棉纤维发育相关基因的功能分析、分组及表达模式研究

一、Functional Analysis, Grouping and Expression Pattern Study of the Cotton Fiber Development-related Genes（论文文献综述）

朱英洁,赵航,包颖^[1]（2021）在《棉花MYB转录因子的研究进展》文中研究说明MYB转录因子在棉花的生长发育、纤维发育以及应对生物和非生物胁迫等方面均具有重要作用.为全面梳理MYB转录因子在棉花中的进化和功能特点,文章分别从基因拷贝数目、结构域类型、基因复制模式、进化速率以及生物学功能等方面论述了不同棉种MYB转录因子的相关研究进展,其结果将为今后进一步阐明植物MYB转录因子家族的进化规律以及提升棉花分子育种的精确性提供理论基础.

滕露,郑凯,曲延英,陈全家^[2]（2021）在《海岛棉GbHCT13基因的功能验证》文中指出该研究利用海岛棉‘新海21’和陆地棉ND203以及模式植物拟南芥,通过转基因及荧光定量检测等方法探究海岛棉GbHCT13基因（GenBank登录号MW048849）在纤维发育中的功能。结果显示:（1）成功构建重组载体pCAMBIA3301-GbHCT13,经农杆菌介导法转化、除草剂抗性基因筛选、荧光定量检测方法鉴定获得转GbHCT13基因拟南芥T3代植株4株;qRT-PCR检测表明,转基因植株中GbHCT13基因表达量较野生型极显着增加。（2）转基因拟南芥过表达GbHCT13基因使植株同一时期的生长较野生型旺盛,株形、叶片数、抽薹数和茎秆表皮毛数量均与野生型存在差异;组织化学分析发现,转GbHCT13基因的拟南芥较野生型茎秆初生木质部生长活跃,导管增粗,次生木质部导管细胞壁横截面积变大,但髓质细胞无明显变化;过表达GbHCT13使拟南芥中木质素合成途径基因发生不同程度改变,其中CAD、CCoAOMT、PAL和4CL与GbHCT13基因的表达呈正相关。（3）经大田筛选、分子鉴定,成功获得转GbHCT13基因棉花植株3株;转GbHCT13基因棉花的棉纤维伸长率增加,纤维强度增大;沉默GbHCT13基因使棉花植株木质素含量降低,茎秆表皮毛数量减少,木质部导管细胞数量减少,导管细胞壁中木质素沉积量降低,而棉株并未发生株高上的明显矮化现象,且木质素合成通路中的CAD、CCoAOMT、CCR、PAL 4个基因的表达均呈降低趋势,说明抑制GbHCT13使得棉花生长代谢受阻,影响纤维发育起始。研究表明,GbHCT13基因能影响棉花植株中木质素合成从而调控纤维的生长发育,其功能与GbHCT13基因在模式植物拟南芥中的基本一致。

邵长生^[3]（2021）在《二球悬铃木表皮毛发育调控基因PaTCP4、PaTCP15和PaNAC089的功能分析》文中研究指明二球悬铃木（Platanus acerifolia Willd）,是悬铃木科悬铃木属植物,该树种冠大荫浓、适应性性强且生长迅速,因此被广泛应用于城市绿化。然而,二球悬铃木作为城市绿化树的最大缺陷是其表皮毛是严重的空气污染物。二球悬铃木幼嫩器官表面被生多细胞表皮毛;依据有无分泌功能这些表皮毛可分为两大类:腺毛和非腺毛。其中非腺毛,尤其是果序毛,是二球悬铃木产生的主要空气污染物。因此,培育解决表皮毛污染的“无毛悬铃木”成为二球悬铃木育种的主要目标。目前研究表明,只依靠传统育种手段很难实现培育“无毛悬铃木”的目标,而借助基因工程手段或许是实现这一育种目标的最佳方式。然而,目前我们对于二球悬铃木表皮毛发育的调控方式所知甚少,因此,本研究希望通过二球悬铃木果毛转录组测序分析的方式,筛选出参与二球悬铃木果毛发育的关键基因,并通过异源转化模式植物拟南芥的方式验证候选基因的功能与调控机制,并以此推测二球悬铃木表皮毛发育的分子机制。主要结果如下:1.使用扫描电镜连续观察二球悬铃木果序发育过程中果皮毛的形态。二球悬铃木果实属于聚花果,果序表面每个小坚果都是一个完整的果实;观察发现二球悬铃木小坚果表面着生两种非腺毛:齿状分支毛和长直毛;其中齿状分支毛主要分布在小坚果中上部。长直毛主要分布在小坚果的中下部。我们依据扫描电镜的观察结果采集了不同发育时期的果毛混样进行转录组测序分析,结果表明众多转录因子和植物激素参与二球悬铃木果毛的发育过程;其中表达量最高的基因是MYB家族基因和TCP家族基因。2.依据转录组数据,我们从二球悬铃木中克隆得到了1个在果毛中高量表达的TCP家族基因;进化树分析与蛋白序列比对结果表明该基因是与拟南芥At TCP4同源的Class TCPⅡ家族基因,因此命名为Pa TCP4。亚细胞定位实验表明Pa TCP4定位在细胞核中。Pa TCP4与Pa TCP15在二球悬铃木的各组织/器官中均有表达,在表皮毛中的表达尤其高。在拟南芥中过表达Pa TCP4降低了第一对真叶的表皮毛数量;此外,在转基因株系的真叶上还检测到一些在对照株系中从未发现的5分支的表皮毛。酵母单杂交和双荧光素酶实验表明,Pa TCP4可以直接激活拟南芥At CPC、At TCL2、At GL3,以及二球悬铃木Pa GIS和Pa GL3。综上所述,这些结果确定了Pa TCP4在拟南芥表皮毛诱导和分支中的作用,我们推测Pa TCP4可能在调控二球悬铃木表皮毛发育过程中发挥重要作用。3.依据转录组数据从二球悬铃木中克隆了另一个TCP基因;进化树与氨基酸序列比对结果表明该基因是与拟南芥At TCP15同源的Class TCPⅠ家族基因,因此命名为Pa TCP15。亚细胞定位表明Pa TCP15定位在细胞核中。RT-q PCR结果显示该基因在二球悬铃木各组织/器官均有表达;另外,通过GUS染色实验发现p Pa TCP15能够在拟南芥表皮毛中表达,并且6-BA处理转基因株系后能够使GUS染色加深;此外,该基因的启动子上包含大量激素响应元件和各种响应胁迫反应的顺势结合元件。异源过表达Pa TCP15能够增加拟南芥花序表皮毛数量,尤其是增加了萼片表皮毛数量。RT-q PCR结果显示转基因株系中正调控拟南芥花序表皮毛发育的基因At ZFP6的表达量升高,双荧光素酶实验同样表明Pa TCP15能够激活At ZFP6。4.我们从二球悬铃木中克隆得到一段基因序列,进化树与蛋白序列比对分析表明该基因编码一个膜锚定转录因子（MTTF）,属于NAC（NAM,ATAF1/2,CUC2）转录因子家族。亚细胞定位结果表明缺失跨膜结构域的Pa NAC089（?Pa NAC089）定位于细胞核,而全长Pa NAC089定位于内质网（ER）,这与膜系转录因子的特点一致。此外,RT-q PCR结果显示该基因在二球悬铃木各组织/器官部位均有表达,在叶片中的表达量随叶片的成熟而逐渐升高。在拟南芥中异源过表达?Pa NAC089会降低拟南芥表皮毛数量,与此表型一致,转基因株系中正调控拟南芥表皮毛发育的基因At GL1和At GL2的表达被抑制。?Pa NAC089转基因株系还出现了开花延迟的表型,酵母单杂实验结果表明?Pa NAC089直接绑定At CO启动子序列。除此之外,?Pa NAC089转基因株系还出现墨绿色的莲座叶,叶绿素检测发现转基因株系莲座叶叶绿素含量明显高于对照植株的莲座叶,酵母单杂与LUC瞬时转化激活实验结果表明?Pa NAC089能够直接抑制At NYE1,At NYE2和At NYC1。除上述结果外,我们还发现?Pa NAC089还影响拟南芥角果的发育。综上所述,Pa NAC089属于调控拟南芥开花、叶绿素分解、表皮毛诱导和角果发育的MTTF。

刘超^[4]（2021）在《四种棉花APX和14-3-3基因家族全基因组分析》文中研究指明

滕露^[5]（2021）在《海岛棉GbHCT基因在纤维发育中的功能分析》文中指出

郑红丽^[6]（2021）在《陆地棉GhGLP4基因调控雄蕊发育的分子机理研究》文中提出

高玉洁^[7]（2021）在《棉花陆海渐渗系16号染色体纤维品质QTL精细定位与分子标记辅助选择》文中研究指明

赵岩,冯加加,肖向辉,黄晋玲,卢全伟,渠云芳^[8]（2021）在《基于BSA-seq法的纤维衣分相关候选基因的鉴定》文中研究指明衣分是影响棉纤维产量的重要指标。本研究以高衣分棉花陆海渐渗系材料MBI7747-14和中棉所45为亲本,构建包含2403个单株的F2分离群体,挑选衣分性状极端单株构建2个混池,采用BSA-seq方法进行衣分相关基因定位分析。结果表明,在D2染色体上得到4个置信指数高于95%的候选区间,4个区间共包含236个基因,总长度为5.47 Mb。在以上基因中,200个基因中含有SNP,190个基因中含有InDel,其中70个基因含有非同义突变位点。通过转录组数据的基因表达模式分析,筛选出19个可能与衣分相关的候选基因。GO功能富集分析表明,19个候选基因集中于NADP+活性、醛糖醇代谢、碳利用和调控细胞发育等功能条目。本研究为进一步研究棉纤维衣分形成的遗传机制奠定了一定的基础。

刘正文,王省芬,孟成生,张艳,孙正文,吴立强,马峙英,张桂寅^[9]（2021）在《海岛棉GH9基因家族成员鉴定及分析》文中提出植物GH9基因在细胞壁的生物合成和重塑中起着重要作用,对海岛棉GH9基因进行全基因组鉴定与分析,挖掘其在棉纤维发育中的作用。从海岛棉全基因组中鉴定到53个GH9基因,分析其理化性质、基因结构、染色体分布、进化历程、棉纤维发育过程中表达模式及转录调控。结果表明,53个GbGH9s分为A、B、C三组,定位在22条染色体上;多倍化事件是海岛棉GH9基因家族扩张的主要驱动力,基因复制后经历严格的选择约束;A组多个成员在棉纤维发育整个时期尤其是次生壁加厚期高表达,C组多个成员在棉纤维起始和伸长期优势表达,B组具有相对复杂的表达模式,生长素和乙烯可能在GbGH9s的转录调控中发挥重要作用。此外,通过回交将GbGH9B6导入陆地棉可提高棉纤维强度。海岛棉GH9基因家族成员的鉴定及分析有助于明确其进化和功能,为后续研究提供重要参考。

杨冬杰^[10]（2021）在《陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员的鉴定及GhWRKY53的功能分析》文中提出棉花是一种可以产生天然纤维并用于纺织的重要经济作物,其中棉纤维的产量和品质是决定棉花经济价值的最重要因素。棉花纤维细胞的分化和发育过程十分复杂,受到多种基因的调控,其中转录因子发挥了十分重要的作用。WRKY是植物中普遍存在的转录因子,在植物多种生命过程中发挥作用。然而,到目前为止,在棉纤维发育相关研究中关于WRKY基因的报道还很少。通过对棉纤维发育相关WRKY基因的筛选和功能验证,有助于对棉纤维发育的分子机制进行解析,进而为棉花产量的提高和纤维品质的改良提供重要的理论基础。本研究中首先利用分子生物学和生物信息学的方法对陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员进行了深入分析,然后对在纤维起始期高表达的Gh WRKY53进行克隆和功能鉴定。主要内容如下:1、陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员的家族分析。陆地棉中存在21个WRKY基因Ⅲ亚组成员。系统发育分析表明,陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员可以分为三个分支,这种分支模式在拟南芥WRKY基因Ⅲ亚组成员中也同样存在;多序列比对、保守基序分析和基因结构分析表明,陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员的蛋白序列高度相似,在系统发育树中聚在一起的成员具有相似的基序组成和基因结构特征,都具有高度保守的WRKY和C2HC锌指结构域,内含子和外显子数目相似。通过分析陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员在棉纤维发育过程中的表达模式,发现它们主要在-3DPA～3DPA的胚珠或纤维中优势表达,可能参与了棉纤维起始的生物学过程。2、棉纤维起始相关基因Gh WRKY53的克隆和功能鉴定。Gh WRKY53的DNA长度为3321 bp,含有3个外显子,2个内含子,CDS长度为1008 bp,编码335个氨基酸,具有典型的Ⅲ亚组WRKY成员的结构特征。亚细胞定位实验表明,Gh WRKY53定位于细胞核内;Gh WRKY53在拟南芥中的异源表达可以显着增加表皮毛的密度;通过酵母双杂交实验,在棉纤维c DNA文库中筛选到12个在纤维发育时期与Gh WRKY53相互作用的蛋白;通过酵母双杂交实验证实了Gh WKY53与Gh RAX3存在相互作用;本研究对陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员进行了详细的解析,主要在拟南芥中对Gh WRKY53基因的功能进行了初步探索,为进一步研究Gh WRKY53基因和陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员提供了新的视角。

二、Functional Analysis, Grouping and Expression Pattern Study of the Cotton Fiber Development-related Genes（论文开题报告）

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

三、Functional Analysis, Grouping and Expression Pattern Study of the Cotton Fiber Development-related Genes（论文提纲范文）

（1）棉花MYB转录因子的研究进展（论文提纲范文）

0 引言

1 棉花MYB转录因子的进化特点

2 棉花中MYB转录因子的生物学功能

2.1 MYB转录因子在纤维发育中的作用

2.2 MYB转录因子在胁迫中的作用

2.2.1非生物胁迫

2.2.2 生物胁迫

3 展望

（2）海岛棉GbHCT13基因的功能验证（论文提纲范文）

1 材料和方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.1 GbHCT13基因转化拟南芥及棉花

1) GbHCT13植物过表达载体构建。

2) 菌液的准备。

3) 转基因操作。

4) 转GbHCT13基因拟南芥与棉花植株筛选与鉴定。

5) 转基因植株表型鉴定及相关检测。

1.2.2 转GbHCT13基因棉花VIGS沉默

1) GbHCT13基因沉默载体构建。

2) GbHCT13基因沉默操作步骤。

3) GbHCT13基因沉默效率检测。

4) GbHCT13沉默植株表型观察。

5) GbHCT13沉默植株茎秆组织切片分析。

6) GbHCT13沉默植株木质素含量测定。

2 结果与分析

2.1 拟南芥中GbHCT13基因功能验证

2.1.1 pcAMBIA3301-GbHCT13重组载体检测双酶切验证

2.1.2 转GbHCT13基因拟南芥植株筛选鉴定

2.1.3 拟南芥分子检测及表型观察

2.1.4 转GbHCT13基因拟南芥植株切片观察及相关基因表达检测

2.2 GbHCT13基因在棉花中功能验证

2.2.1 转GbHCT13基因植株田间筛选与鉴定

2.2.2 转GbHCT13基因棉株分子检测

2.2.3 转GbHCT13基因T2代植株纤维表型分析

2.2.4 GbHCT13基因沉默载体构建

2.2.5 GbHCT13基因沉默效率检测

2.2.6 棉花茎秆组织切片分析

3 讨论

（3）二球悬铃木表皮毛发育调控基因PaTCP4、PaTCP15和PaNAC089的功能分析（论文提纲范文）

摘要

abstract

缩略语表

第一章文献综述

1.1 引言

1.2 植物表皮毛发育的调控机制

1.2.1 拟南芥表皮毛发育的分子调控机制

1.2.2 棉纤维发育的分子调控机制

1.3 TCP家族转录因子调控表皮毛的发育

1.4 NAC家族转录因子调控表皮毛的发育

1.5 二球悬铃木表皮毛发育的研究进展

1.6 本研究的意义

第二章二球悬铃木各部位表皮毛的形态观测及果皮毛转录组测序分析

2.1 前言

2.2 材料与方法

2.2.1 植物材料

2.2.2 RNA提取与反转录

2.2.3 转录组测序数据组装及功能注释

2.2.4 基因表达量分析

2.3 结果与分析

2.3.1 二球悬铃木雌花结构与表皮毛种类

2.3.2 二球悬铃木果皮毛转录组测序结果分析

2.4 讨论

2.4.1 二球悬铃木表皮毛的种类及功能

2.4.2 二球悬铃木表皮毛发育的调控涉及多种植物激素与众多转录因子

第三章二球悬铃木PaTCP4基因的克隆及功能分析

3.1 前言

3.2 材料与方法

3.2.1 植物材料

3.2.2 菌株与载体

3.2.3 基因克隆与启动子分离

3.2.4 序列比对及进化树分析

3.2.5 载体构建

3.2.6 亚细胞定位

3.2.7 拟南芥转化及阳性苗表型观察与统计

3.2.8 基因表达分析

3.2.9 酵母单杂交实验

3.2.10 双荧光素酶报告系统实验

3.3 结果与分析

3.3.1 PaTCP4转录因子序列分析

3.3.2 PaTCP4在二球悬铃木各个器官中的表达分析

3.3.3 PaTCP4亚细胞定位

3.3.4 PaTCP4在拟南芥中的功能验证

3.3.5 异源超表PaTCP4影响拟南芥中表皮毛相关基因的表达

3.3.6 PaTCP4直接激活拟南芥AtCPC和AtTCL2

3.3.7 PaTCP4在拟南芥中直接激活AtGIS和AtGL3

3.3.8 PaTCP4直接激活二球悬铃木PaGL3和PaGIS

3.4 讨论

3.4.1 PaTCP4直接激活AtCPC和AtTCL2表达以调控表皮毛的诱导

3.4.2 PaTCP4直接激活AtGL3和AtGIS及其同源基因表达以调控表皮毛分支

第四章二球悬铃木Pa TCP15 基因的克隆及功能分析

4.1 前言

4.2 材料与方法

4.2.1 实验材料

4.2.2 实验方法

4.3 结果与分析

4.3.1 PaTCP15转录因子序列分析

4.3.2 PaTCP15在二球悬铃木各个组织/器官中的表达分析

4.3.3 PaTCP15亚细胞定位

4.3.4 PaTCP15启动子分析

4.3.5 PaTCP15在拟南芥中的功能验证

4.3.6 异源超表PaTCP15影响拟南芥中下游基因的表达

4.3.7 PaTCP15直接激活拟南芥中AtIAA3与AtZFP6

4.3.8 PaTCP15直接激活PaZFP5

4.4 讨论

4.4.1 PaTCP15调控表皮毛的诱导与发育

4.4.2 PaTCP15可能整合多种激素调控通路以参与悬铃木的生长发育

第五章二球悬铃木PaNAC089基因的克隆及功能分析

5.1 前言

5.2 材料方法

5.2.1 截断序列

5.2.2 载体构建

5.2.3 转基因植株的花期统计

5.2.4 叶绿素含量测定

5.2.5 LUC瞬时表达分析

5.3 结果与分析

5.3.1 PaNAC089转录因子序列分析

5.3.2 PaNAC089在二球悬铃木各个组织/器官中的表达分析

5.3.3 亚细胞定位

5.3.4 ?PaNAC089直接抑制AtCO的表达延缓拟南芥开花

5.3.5 ?PaNAC089通过抑制CCGs的表达而促进拟南芥叶绿素的积累

5.3.6 ?PaNAC089抑制拟南芥表皮毛的诱导

5.4 讨论

5.4.1 PaNAC089编码膜系转录因子

5.4.2 ?PaNAC089通过直接抑制AtCO表达而延迟拟南芥开花

5.4.3 ?PaNAC089抑制拟南芥叶绿素的降解

5.4.4 ?PaNAC089抑制拟南芥表皮毛诱导

第六章总结与展望

6.1 总结

6.1.1 二球悬铃木果皮毛转录组测序

6.1.2 PaTCP4和PaTCP15的功能

6.1.3 PaNAC089的功能

6.2 展望

参考文献

附录

致谢

（9）海岛棉GH9基因家族成员鉴定及分析（论文提纲范文）

1 材料与方法

1.1 基因组序列

1.2 GH9基因家族成员鉴定及理化性质分析

1.3 保守基序、基因结构、染色体定位及系统进化分析

1.4 基因复制分析及计算Ka、Ks、Ka/Ks

1.5 GH9基因在棉纤维中的表达分析

1.6 启动子顺式作用元件分析

1.7 群体构建、功能标记开发、基因分型以及表型数据分析

2 结果与分析

2.1 海岛棉GH9基因家族成员鉴定及系统进化分析

2.2 海岛棉GH9家族成员基因结构和保守基序分析

2.3 海岛棉GH9基因染色体定位分析

2.4 海岛棉GH9基因家族基因复制分析

2.5 海岛棉GH9基因家族进化历程

2.6 GbGH9s在棉纤维发育过程中的表达分析

2.7 转录调控分析

2.8 GbGH9B6功能分析

3 讨论

（10）陆地棉WRKY基因Ⅲ亚组成员的鉴定及GhWRKY53的功能分析（论文提纲范文）

摘要

abstract

第一章绪论

1.1 棉纤维研究进展

1.1.1 棉花的起源与进化

1.1.2 棉纤维发育的生物学基础

1.2 转录因子对棉纤维发育的调控

1.3 植物中WRKY基因的研究

1.4 棉花中WRKY基因的研究

1.5 本研究的目的及意义

第二章材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 植物材料及菌株

2.1.2 药品试剂

2.1.3 质粒载体

2.1.4 仪器设备

2.2 实验方法

2.2.1 陆地棉WRKY基因III亚组成员的鉴定及特征分析

2.2.2 陆地棉WRKY基因III亚组成员染色体定位和亚细胞定位预测

2.2.3 陆地棉WRKY基因III亚组成员序列比对和系统发育分析

2.2.4 陆地棉WRKY基因III亚组成员结构和保守的蛋白质基序分析

2.2.5 样品采集及其RNA提取

2.2.6 cDNA的合成

2.2.7 荧光定量PCR

2.2.8 DNA提取

2.2.9 目的基因的克隆

2.2.10 载体的线性化

2.2.11 DNA回收与纯化

2.2.12 重组载体的构建

2.2.13 大肠杆菌转化

2.2.14 阳性菌落的鉴定

2.2.15 质粒DNA提取

2.2.16 农杆菌转化

2.2.17 菌液PCR验证

2.2.18 浸花法转化拟南芥

2.2.19 拟南芥突变体的鉴定

2.2.20 转基因拟南芥的筛选

2.2.21 转基因拟南芥的分子鉴定

2.2.22 拟南芥的表型观察

2.2.23 亚细胞定位

2.2.24 酵母感受态制备及转化

2.2.25 酵母双杂交筛库

2.2.26 酵母质粒提取

2.2.27 酵母双杂交点对点验证

第三章结果与分析

3.1 陆地棉WRKY基因III亚组成员的鉴定及序列分析

3.2 陆地棉WRKY基因III亚组成员的系统发育分析

3.3 陆地棉WRKY基因III亚组成员结构和保守结构域分析

3.4 陆地棉WRKY基因III亚组成员在棉纤维发育阶段的表达模式分析

3.5 GhWRKY53基因的克隆

3.6 GhWRKY53基因的亚细胞定位

3.6.1 GhWRKY53亚细胞定位载体的构建

3.6.2 GhWRKY53的亚细胞定位

3.7 GhWRKY53在拟南芥中的功能鉴定

3.7.1 GhWRKY53基因过表达载体的构建

3.7.2 GhWRKY53在拟南芥中同源基因的突变体鉴定

3.7.3 GhWRKY53转基因拟南芥阳性苗的筛选和鉴定

3.7.4 GhWRKY53转基因拟南芥表皮毛的观察

3.8 GhWRKY53的互作蛋白研究

3.8.1 GhWRKY53诱饵载体的构建

3.8.2 GhWRKY53酵母双杂交自激活检测

3.8.3 酵母双杂交筛选互作蛋白

3.8.4 酵母双杂交点对点验证的结果

第四章讨论

4.1 陆地棉WRKY基因III亚组成员的功能分析

4.2 陆地棉GhWRKY53的克隆与功能验证

第五章结论