一、反义hTERT可促进肺癌细胞A549凋亡（论文文献综述）
陈洁[1]（2021）在《USP39通过调节FoxO1的表达促进肺癌细胞的增殖》文中研究说明背景肺癌是人类最常见的恶性肿瘤之一,也是造成癌症死亡的主要原因,与大多数生存率稳步上升的肿瘤相比,肺癌的治疗现状仍不乐观,病情进展较迅速,其发病机制仍不明确。在众多肺癌靶分子中,泛素特异性蛋白酶39（ubiquitin-specific protease 39,USP39）作为一种促癌因子,参与调控肿瘤细胞的迁移、衰老、凋亡等过程,但其在肺癌中的作用及分子机制尚不明确。目的通过研究USP39在非小细胞肺癌中的表达,筛选、检测其下游信号分子的表达及功能,探究USP39及其下游靶基因FoxO1在非小细胞肺癌发生、发展的作用。方法利用免疫组化实验、内源性免疫荧光、Western blot等实验探究肺癌组织及细胞中USP39的表达水平、细胞中的亚细胞定位,通过慢病毒包装感染shRNA敲低、瞬时转染siRNA敲低实验,初步探究肺癌细胞A549中USP39、FoxO1的作用,了解USP39对肺癌细胞生长、增殖的影响,以及下游靶基因FoxO1在肺癌发生、发展的作用。结果在A549细胞系中,USP39主要定位于的细胞核中,FoxO1主要定位于细胞质中。USP39能促进肺癌细胞系A549的增殖能力,抑制FoxO1的表达会抑制A549的增殖,USP39可能通过调节FoxO1发挥促癌作用。结论USP39可能通过调节FoxO1在肺腺癌细胞中的表达促进肺癌的发生。
王宇[2]（2021）在《lncRNA MALAT1通过miR-515-5p/TRIM65轴调控非小细胞肺癌细胞的生物学特性和糖酵解》文中指出背景:肺癌是全世界最常见和致命的癌症之一,其中非小细胞肺癌（NSCLC）约占所有肺癌病例的85%。许多NSCLC患者被确诊时已处晚期。目前,晚期和转移性NSCLC患者的治疗方法十分有限。因此迫切需要发现用于早期诊断的生物标志物和新的治疗靶标。长非编码RNA（lncRNA）是一类长度超过200个核苷酸的非编码RNA,众所周知,其可调节各种基因的表达,从而参与肿瘤的发生和发展。例如,lncRNA转移相关的肺腺癌转录本1（MALAT1）通过调节miRNA促进NSCLC的进展。但是目前尚未完全阐明MALAT1在NSCLC中的作用机制。目的:本研究目的在于探究MALAT1对NSCLC细胞生物学特性和糖酵解的影响,并探讨其分子机制是否与调控miR-515-5p/TRIM65有关,以期为NSCLC的诊断和治疗提供实验基础。方法:1、采用qRT-PCR技术检测NSCLC组织和细胞系MALAT1和LOXL1-AS1的表达情况,通过脂质体转染技术将MALAT1或LOXL1-AS1 si RNA转染至A549和SPC-A-1细胞。2、qRT-PCR技术检测转染效果,MTT实验、平板克隆实验检测细胞增殖和克隆形成能力。3、采用流式细胞术和Annexin V-FITC/PI双染色法检测干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞周期和凋亡的影响。4、采用Transwell实验、划痕实验、Western blot检测以及试剂盒检测干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞侵袭、迁移、上皮-间质转化和糖酵解的影响。5、构建同时干扰MALAT1和过表达TRIM65的A549和SPC-A-1细胞株,通过MTT实验、克隆形成、流式细胞术、Transwell等实验分析过表达TRIM65是否能回复干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞增殖、细胞周期、凋亡、侵袭、迁移、上皮-间质转化以及糖酵解的影响。6、生物信息学在线数据库Starbase预测MALAT1和miR-515-5p以及miR-515-5p和TRIM65之间靶向结合位点,采用双荧光素酶报告基因实验、RIP实验和qRT-PCR技术验证MALAT1和miR-515-5p以及miR-515-5p和TRIM65靶向结合关系。7、分别采用qRT-PCR技术和Western blot检测miR-515-5p和TRIM65在NSCLC组织和细胞中的表达情况,并分析MALAT1、miR-515-5p和TRIM65在NSCLC组织中表达相关性。8、通过Western blot检测在NSCLC细胞中MALAT1是否能够通过miR-515-5p调控TRIM65的表达。9、裸鼠移植瘤实验证实lncRNA MALAT1通过miR-515-5p/TRIM65轴参与调控NSCLC的进展。结果:1、MALAT1和LOXL1-AS1在NSCLC组织和细胞系中呈高表达,转染MALAT1或LOXL1-AS1 si RNA能够有效干扰A549和SPC-A-1细胞中MALAT1和LOXL1-AS1的表达。2、干扰MALAT1或LOXL1-AS1能够抑制A549和SPC-A-1细胞增殖、细胞周期进程、克隆形成、侵袭、迁移、上皮-间质转化和糖酵解,并促进细胞凋亡。3、过表达TRIM65能够逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞生物学特性和糖酵解的影响。4、MALAT1能够靶向负调控miR-515-5p的表达,且miR-515-5p能够靶向负调控TRIM65的表达。5、MALAT1和miR-515-5p以及miR-515-5p和TRIM65在NSCLC组织中的表达呈负相关,MALAT1和TRIM65在NSCLC组织中的表达正相关。6、在NSCLC细胞中MALAT1能够通过miR-515-5p调控TRIM65的表达。7、裸鼠移植瘤实验证实lncRNA MALAT1通过miR-515-5p/TRIM65轴参与调控NSCLC的进展。结论:1、MALAT1和LOXL1-AS1在NSCLC组织和细胞中呈高表达,干扰MALAT1或LOXL1-AS1能够抑制NSCLC细胞生长、转移及糖酵解。2、MALAT1可作为miR-515-5p的ce RNA竞争性结合miR-515-5p,进而调控下游基因TRIM65的表达。3、MALAT1可通过调控miR-515-5p/TRIM65轴介导NSCLC细胞生物学特性和糖酵解,参与促进NSCLC的进展。
周俊[3]（2020）在《超保守RNA uc.454抑制肺癌细胞侵袭转移的机制研究》文中研究表明目的本文通过研究超保守uc.454在肺癌组织及肺癌细胞株中的表达及与临床病理意义以及uc.454的表达对肺癌细胞侵袭迁移的影响,并探讨uc.454对下游靶分子K-RAS调控机制以及其抑制肺癌细胞侵袭迁移的信号通路的研究,旨在为非小细胞肺癌的临床治疗提供实验基础。方法1、应用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）方法检测非小细胞肺癌细胞系中uc.454的表达,qRT-PCR方法和RNA原位分子杂交方法检测130例NSCLC术后组织标本和90例癌旁正常肺组织中uc.454的表达水平,分析uc.454的表达水平与临床病理参数及预后之间的病理关系。2、建立uc.454过表达/沉默稳定表达的肺癌稳定细胞株,然后在细胞水平上通过划痕实验和Transwell实验来观察uc.454对肺癌细胞侵袭迁移能力的影响。3、通过生物信息学分析K-RAS是uc.454靶基因之一,并证实K-RAS的转录后区域具有uc.454的结合位点。应用uc.454过表达/沉默稳定表达的肺癌细胞株（A549、NCI-H520）,通过qRT-PCR和Western Blotting实验检测K-RAS的m RNA和蛋白表达水平的变化,从而了解uc.454能否能直接或间接抑制K-RAS的表达。建立K-RAS转录后区域的野生型和突变型质粒,应用双荧光素酶报告系统,检测uc.454是否通过结合K-RAS的3’UTR抑制K-RAS的蛋白表达。在rescue实验反复验证中,首先使用敲低K-RAS的表达的肺癌细胞,观察对P65/MMP9的信号通路的影响,其次使用uc.454过表达和K-RAS过表达的肺癌细胞株,观察uc.454对P65/MMP9的信号通路的影响。4、查阅文献了解K-RAS调控肺癌细胞侵袭转移的信号通路。应用Western Blotting实验检测uc.454过表达/沉默后的K-RAS相关信号通路关键分子P65蛋白和MMP9蛋白的表达变化,在蛋白质水平上验证uc.454是否对K-RAS、P65、MMP9有抑制作用。通过qRT-PCR实验检测uc.454过表达/沉默后能否影响K-RAS、P65、MMP9的表达变化,从而在RNA水平上验证uc.454对K-RAS、P65、MMP9能否有抑制作用。5.在体内实验中,将uc.454过表达的肺癌细胞,过继输入给裸鼠荷瘤（皮下注射,尾静脉注射）,观察对荷瘤裸鼠的肿瘤大小（体积）、重量及肺部的转移情况;同时进行移植瘤HE染色和免疫组化实验在蛋白质水平上验证uc.454能否对K-RAS、P65、MMP9有抑制作用。结果1、qRT-PCR结果显示:非小细胞肺癌细胞系中uc.454的表达明显下调;非小细胞肺癌组织中uc.454的表达明显低于癌旁正常组织,差异均具有显着统计学意义（P<0.01）。uc.454 RNA水平与NSLCL患者吸烟情况、年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤病理分级均无关（P值分别>0.05）,与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、浸润深度均有关（P值分别<0.05）。2、划痕实验结果表明过表达uc.454后,肺癌细胞划痕间伤口愈合距离百分比明显低于对照组;而抑制uc.454后,细胞划痕间伤口愈合距离百分比明显高于对照组,差异均具有统计学意义（P<0.05）。Transwell实验证明过表达uc.454转染组穿膜迁移的细胞数量明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。反之,敲低uc.454转染组穿膜迁移的细胞数量明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。3、通过生物信息学分析uc.454基因序列中含有K-RAS 3’非翻译区（3’Untranslated region,3’UTR）的结合位点。双荧光素酶报告基因分析确认在K-RAS 3’UTR野生型转染组,uc.454高表达可明显抑制相应的荧光活性,而在突变组uc.454未有这种抑制作用。因此uc.454与K-RAS是直接结合,并具有特异性。本研究结合生物信息学分析证实uc.454和K-RAS有直接关联,双荧光素酶报告基因分析确认在非小细胞肺癌中,K-RAS是uc.454直接调控的靶点之一。在rescue实验反复验证中,当敲除uc.454和K-RAS以及过表达uc.454和K-RAS后下游基因P65、MMP9的表达无明显变化。当过表达uc.454后,K-RAS及下游基因P65、MMP9的表达明显下调,当敲低uc.454表达后K-RAS及下游基因后P65、MMP9的表达明显上调。4、在裸鼠的体内实验中,uc.454过表达组肺部转移瘤的数目明显少于对照组。皮下荷瘤实验中,uc.454过表达组肿瘤生长的体积和重量变化不大,HE光镜下显示肿瘤生长稀疏,坏死明显,病理性核分裂像较少。qRT-PCR法显示uc.454过表达后K-RAS、P65、MMP9表达下降,而uc.454敲低表达后K-RAS、P65、MMP9表达升高,证实在RNA水平上uc.454对K-RAS、P65、MMP9的抑制作用。免疫组化实验检测uc.454过表达后,K-RAS蛋白、P65蛋白、MMP9蛋白的表达下调,表明在蛋白质水平上uc.454对K-RAS、P65、MMP9有抑制性调控作用。结论1、uc.454在肺癌组织和肺癌细胞系中低表达,与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、浸润深度有关,uc.454显着低表达组的预后明显差于相对高表达组;2、uc.454能抑制肺癌细胞的迁移、侵袭能力;3、在肺癌细胞中uc.454直接结合K-RAS 3’UTR,抑制K-RAS的表达;4、uc.454下调K-RAS表达,抑制P65/MMP9信号通路,从而抑制肺癌细胞的侵袭转移。
梁媛[4]（2020）在《长链非编码RNA LINC00355通过下调miR-195上调CCNE1表达促进肺腺癌细胞的增殖》文中指出肺癌的治疗早已进入靶向治疗时代,然而,尽管表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂、间变性淋巴瘤激酶抑制剂和免疫检查点抑制剂等大批明星靶向药物已成功应用于临床,肺癌五年总体生存率之和仍然低至15.9%。这说明我们对于肺癌的发病机制还缺乏足够的认知,并且缺乏针对早期肺癌的诊断性标志物和治疗靶点。众所周知,基因通常不是单独起作用的,他们的背后往往存在非常复杂的调控网络,近年来越来越多的研究表明非编码RNA在基因表达的启动等过程中发挥重要调控作用。非编码RNA主要分为两个亚型:转录本少于200nt的非编码性小RNA（microRNA）及转录本介于200 nt至100 kb间的长链非编码RNA（1ong non-coding RNA,lncRNA）。既往人们对于非编码RNA的研究主要集中在microRNA,而lncRNA往往被认为是“垃圾RNA”,但近几年来的研究表明它们的异常表达在许多疾病和肿瘤的发生发展过程中发挥着重要作用。LncRNA可能通过直接与RNA、DNA或蛋白质结合,在表观遗传、转录及转录后水平通过复杂的调控机制影响细胞增殖、分化、凋亡、迁移及免疫等多种生物学功能,具有较高的组织特异性、敏感性和可靠的稳定性,可作为肿瘤治疗的信息标志物和治疗靶点。这些研究结果使lncRNA成为新的研究热点,并显示出良好的临床应用前景。目的:利用GEO数据库基因芯片及TCGA数据库进行差异性表达靶基因筛选,结果表明CCNE1在肺腺癌中高表达,与不良预后密切相关。进一步预测发现CCNE1可能作为miR-195的靶基因,而长链非编码RNA LINC00355能够与miR-195结合,且与miR-195/CCNE1存在相同的结合位点。同时,利用TCGA数据库分析三者表达水平,结果表明LINC00355及CCNE1在肺腺癌中高表达,miR-195低表达,相关性分析提示miR-195表达水平与LINC00355及CCNE1呈负相关。基于以上数据,我们猜想LINC00355可能通过下调miR-195进而上调CCNE1的表达促进肺腺癌细胞的增殖。目前尚无关于LINC00355具体生物学功能的研究报道,部分关于LINC00355的相关数据库分析提示其在结肠腺癌及膀胱癌中高表达。因此,本研究通过检测LINC00355在肺腺癌组织及细胞中的表达及与临床病理因素、预后之间的关系,并通过体内外实验观察LINC00355的生物学功能。通过分别构建和转染识别miR-195互补序列的突变型/野生型LINC00355及CCNE1质粒,进行靶向关系及调控作用的验证,阐明LINC00355在肺腺癌中发挥作用的可能机制。研究方法:1.通过pubmed GEO数据库下载肺腺癌基因芯片,筛选在肺腺癌及癌旁组织中差异表达比较显着的mRNA-CCNE1,利用TCGA数据库验证CCNE1的表达及与预后的关系。2.生物信息学预测CCNE1可能是miR-195的靶基因,而miR-195可能是长链非编码RNA LINC00355的靶基因。3.利用TCGA数据库分析肺腺癌中LINC00355及miR-195的表达,并进行相关性分析。4.在103例肺腺癌组织和癌旁组织中利用Real-time PCR检测LINC00355的表达,并统计分析患者临床病理学特征与肺癌组织中LINC00355表达水平的关系。5.EDU实验、细胞克隆形成实验、细胞周期实验检测干扰LINC00355前后肺腺癌细胞增殖活性的变化情况。6.流式细胞仪检测干扰LINC00355前后肺腺癌细胞早期凋亡的变化情况。7.Western Blot实验检测干扰LINC00355前后肺腺癌细胞中增殖、周期及凋亡相关蛋白表达的变化情况。8.LncAtlas网站预测并通过FISH实验检测LINC00355在肺腺癌细胞中的亚定位。9.生物信息学预测miR-195与CCNE1和LINC00355的结合位点,分别构建含有miR-195结合位点的突变/野生型LINC00355及CCNE1片段载体。双荧光素酶报告基因实验验证miR-195与CCNE1及LINC00355的靶向关系。10.RNA pull-down及RIP实验进一步验证LINC00355与miR-195的结合以及是否存在于相同的RISC复合体。11.细胞培养并分为Blank组、NC组、sh-LINC00355组、miR-195 mimic、miR-195 inhibitor、miR-195 inhibitor+sh-LINC00355组。RT-PCR检测各组细胞转染后LINC00355、miR-195、CCNE1的表达;Western Blot检测各组增殖、周期及凋亡相关蛋白的表达。12.EDU实验、克隆形成实验、细胞周期及裸鼠成瘤实验检测转染后各组细胞增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞的凋亡情况。13.采用SPSS22.0统计分析软件对实验数据进行分析,P<0.05说明结果具有统计学意义。结果:1.生物信息学预测LINC00355/miR-195/CCNE1靶向关系并分析三者的表达。从pubmed GEO公共数据库下载肺腺癌全基因组芯片GSE43458数据,CCNE1为差异表达最显着的mRNA,利用TCGA数据库进一步证实CCNE1在肺腺癌中高表达,且与不良预后相关。生物信息学预测得出miR-195可作为与CCNE1相互作用的靶miRNA,进一步预测发现长链非编码RNA LINC00355能够与miR-195靶向结合,并且TCGA数据库分析提示LINC00355在肺腺癌中高表达,miR-195呈低表达,相关性分析显示miR-195表达水平与CCNE1、LINC00355表达均呈负相关。2.分别在肺腺癌组织及细胞系中验证LINC00355的表达。收集辽宁省肿瘤医院103例肺腺癌术后组织学标本,RT-PCR检测LINC00355表达,相比癌旁正常肺组织,LINC00355在肺腺癌组织的表达水平明显升高,这些发现与芯片GSE43458中的结果一致。此外,肺腺癌组织中LINC00355的表达与性别、年龄、有无吸烟史无明显关系,而与肿瘤直径、淋巴结转移及TNM分期相关。RT-PCR检测肺癌细胞株及正常肺上皮细胞HBE中LINC00355、miR-195及CCNE1表达水平,结果显示LINC00355和CCNE1在肺癌细胞株中的表达量高于HBE正常肺上皮细胞,miR-195在肺癌细胞株中的表达量低于HBE正常肺上皮细胞。3.干扰LINC00355可抑制肺腺癌细胞的增殖。EDU法检测结果显示,与NC组比较,sh-LINC00355组细胞增殖较慢。细胞克隆形成实验结果显示与NC组比较,sh-LINC00355组细胞克隆形成能力明显下降。流式细胞术检测细胞周期结果提示干扰LINC00355后细胞出现G1/G0-S期细胞周期阻滞。采用Annexin V FITC/PI双染色方法对干扰LINC00355后进行细胞凋亡分析,结果显示sh-LINC00355组相较于对照组,细胞凋亡比例明显增加。Westernblot检测发现干扰LINC00355后,肺腺癌细胞中CDK6、PCNA、Cyclin-D1和Bcl-2的表达水平均显着下降,而Bax的表达则显着上调。4.LINC00355/miR-195/CCNE1靶向关系的验证。在A549细胞中进行FISH实验证实LINC00355主要存在于细胞浆,通过生物信息学预测miR-195与LINC00355及CCNE1存在共同结合位点。荧光素酶报告基因结果提示,与包含突变型LINC00355及CCNE1片段的荧光素酶报告基因载体相比,过表达miR-195可以使野生型载体组的荧光素酶活性明显下降,提示miR-195与LINC00355及CCNE1存在直接靶向关系。RNA pull-down实验表明,与MUT-miR-195对比,WT-miR-195结合的LINC00355明显增加,再次验证miR-195和LINC00355可以直接结合。RIP实验结果进一步提示Ago2免疫复合物中LINC00355和miR-195的表达水平明显高于Ig G组,提示非小细胞肺癌细胞中LINC00355和miR-195可能存在于相同的RISC复合物中。5.LINC00355负性调控miR-195,正性调控CCNE1,且对CCNE1的调控依赖于miR-195。为进一步验证LINC00355、CCNE1及miR-195三者之间的调控关系,我们首先利用RT-PCR分别检测Blank组、NC组、miR-195 mimic组、miR-195inhibitor组、sh-LINC00355组及miR-195 inhibitor+sh-LINC00355组中LINC00355、CCNE1及miR-195的表达,提示干扰LINC00355可上调miR-195表达,下调CCNE1表达。此外,将6组细胞分别进行EDU实验、细胞克隆形成实验、细胞周期实验、细胞凋亡实验、体内成瘤实验并进一步利用Western Blot检测增殖、周期及凋亡相关蛋白的表达,结果显示,下调LINC00355或过表达miR-195均可抑制A549细胞的增殖,而下调miR-195可逆转敲减LINC00355对A549细胞的增殖抑制作用。结论:1.LINC00355在肺腺癌中高表达并与患者不良预后明显相关;2.体内外实验证明了LINC00355可促进肺腺癌细胞的增殖;3.miR-195与LINC00355及CCNE1存在直接靶向关系;4.LINC00355负性调控miR-195,正性调控CCNE1,且LINC00355对CCNE1的调控依赖于miR-195。因此,综上实验结果证实LINC00355通过下调miR-195上调CCNE1的表达促进肺腺癌细胞的增殖。
蒋连勇[5]（2020）在《LINC00511促进肺癌细胞增殖、迁移以及上皮间质转化的分子机制研究》文中研究指明肺癌是最为常见的恶性肿瘤,其发病率和死亡率均居世界首位。尽管近年来手术、放疗和化疗等传统治疗方法有所进步,患者的整体治疗效果较前有所改善,但总体预后仍然很差,肿瘤的浸润和转移是导致患者预后差的重要原因。上皮性肿瘤获得浸润及转移能力一个非常重要的内在因素是肿瘤细胞获得间充质细胞的活动能力,即上皮间质转化（EMT）,EMT可在癌症进展的各个阶段被异常激活,在肿瘤的生长、侵袭、转移以及对治疗的耐药性等各个方面均起到至关重要的作用。长链非编码RNA（Lnc RNA）是指长度大于200 nt的非编码RNA,近年来大量研究显示多种Lnc RNAs参与了肺癌的发生、进展以及转移。长链非编码RNA00511（LINC00511）在肺癌中表达上调,并且该表达上调与肿瘤的浸润及转移相关,然而其相关机制并不明确。本研究将通过细胞实验逐步阐明LINC00511在肺癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用以及潜在的分子机制。本研究课题主要分为三个部分:（1）探究LINC00511对肺癌细胞增殖、迁移以及上皮间质转化的作用以及其初步分子机制;（2）探究LINC00511在TGFβ1诱导的肺癌细胞EMT以及侵袭和迁移中的作用;（3）探究LINC00511影响TGFβ1诱导的肺癌细胞EMT以及侵袭和迁移的分子机制。研究结果表明:（1）LINC00511可促进肺癌细胞的增殖、迁移以及上皮间质转化,PTEN是LINC00511调控肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的关键中间分子;（2）LINC00511是TGF-β1促进肺癌发展的关键中间分子,敲降LINC00511可通过调节MMPs以及EMT抑制由TGF-β1诱导的肺癌细胞侵袭、迁移能力。（3）LINC00511通过mi R-183-5p/ZEB2轴调控TGF-β1引起的肺癌细胞上皮间质转化以及侵袭和迁移。第一部分 LINC00511促进肺癌细胞增殖、迁移以及上皮间质转化的作用机制研究目的:研究LINC00511促进肺癌细胞增殖、迁移以及上皮间质转化的作用机制。方法:我们首先转染si RNA沉默肺癌细胞中LINC00511的表达,并用q RT-PCR验证沉默效率;然后采用CCK-8法和Transwell法研究沉默LINC00511对肺癌细胞的增殖以及迁移能力的影响;并采用Western Blotting法检测沉默LINC00511对肺癌细胞EMT的影响;同时采用q RT-PCR和Western Blotting技术分析了沉默LINC00511对PTEN的m RNA以及蛋白水平以及AKT信号通路的影响;为了证实肺癌细胞的增殖、迁移以及EMT过程是由沉默LINC00511引起的,我们过表达LINC00511并重复以上实验;为证实PTEN在LINC00511促进肺癌浸润、转移以及EMT中的关键作用,同时沉默LINC00511和PTEN后分析对肺癌细胞增殖、迁移和EMT影响,以及对PTEN及AKT/FOXO1信号通路的影响。结果:LINC00511 si RNA可成功沉默肺癌细胞系中LINC00511的表达;沉默LINC00511显着抑制肺癌细胞的增殖和迁移能力;沉默LINC00511抑制肺癌细胞的上皮间质转化;沉默LINC00511上调肺癌细胞中PTEN的m RNA和蛋白表达量,并抑制AKT的磷酸化;过表达LINC00511促进肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化,同时下调PTEN的m RNA和蛋白表达量,并促进AKT的磷酸化;同时沉默LINC00511和PTEN显着回复沉默LINC00511对肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的抑制作用,并回复沉默LINC00511对AKT信号通路的影响。结论:LINC00511可促进肺癌细胞的增殖、迁移以及上皮间质转化,PTEN是LINC00511调控肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的关键中间分子。第二部分 LINC00511在TGF-β诱导的肺癌细胞侵袭和迁移中的作用机制研究目的:探究LINC00511在TGFβ1诱导的肺癌细胞EMT以及侵袭和迁移中的作用。方法:为研究LINC00511在TGF-β1引起的肺癌转移过程中的作用,我们将肺癌细胞分为四组:对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1+si NC组和TGF-β1+si LINC00511组,然后检测了LINC00511的表达量,肿瘤细胞的迁移和侵袭能力、上皮间质转化标志分子如波形蛋白（Vimentin）、N-钙黏素（N-cadherin）、E-钙黏素（E-cadherin）以及ZEB2的表达水平和基质金属蛋白酶MMP7和MMP13的表达水平。结果:实验结果表明TGF-β1上调肺癌细胞A549和H460中LINC00511表达水平;TGF-β1促进肺癌细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化,表现为增强迁移和侵袭能力并上调N-cadherin和Vimentin的表达而下调E-cadherin的表达,在TGF-β1处理的肺癌细胞中沉默LINC00511可抑制TGF-β1引起的细胞迁移和侵袭能力增加和上皮间质转化;TGF-β1可上调肺癌细胞中MMP7和MMP13的表达水平,而在TGF-β1处理的肺癌细胞中沉默LINC00511可以抑制TGF-β1引起MMP7和MMP13上调;分子机制上,TGF-β1可上调肺癌细胞中上皮间质转化相关转录因子ZEB2的表达,而在TGF-β1处理的肺癌细胞中沉默LINC00511可以抑制TGF-β1引起的ZEB2上调。结论:LINC00511是TGF-β1促进肺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化的关键中间分子,沉默LINC00511可逆转TGF-β1诱导的肺癌细胞迁移、侵袭和上皮间质转化。第三部分 LINC00511调控TGF-β1诱导的肺癌细胞侵袭迁移以及EMT的分子机制研究目的:探究LINC00511影响TGFβ1诱导的肺癌细胞EMT以及侵袭和迁移的分子作用机制。方法:在第二部分中我们发现沉默LINC00511可降低ZEB2的表达,抑制肺癌细胞的EMT及浸润和转移,为进一步明确TGF-β1诱导的EMT及浸润和转移过程中LINC00511调节ZEB2的具体分子机制,我们在TGF-β1诱导且沉默LINC00511的肺癌细胞系中转染pc DNA3.1-ZEB2过表达载体上调ZEB2的表达,再观察肺癌细胞侵袭、迁移能力以及上皮间质转化能力的变化;考虑到lnc RNA可竞争性结合micro RNA发挥其促癌作用的普遍现象,我们使用Star Base v2.0数据库预测到LINC00511与mi R-183-5p有潜在结合位点,并且mi R-183-5p可以靶向结合肺癌细胞中ZEB2的3’UTR,因此我们假设LINC00511可通过竞争性结合mi R-183-5p促进肺癌细胞EMT,为验证该假设,我们构建了突变结合位点的Linc00511-mut载体用来干扰Linc00511和mi R-183-5p之间的相互作用,然后比较对照组、mi R-183-5p组、mi R-183-5pmimic+Linc00511 WT组以及mi R-183-5p mimic+Linc00511 mut组之间ZEB2的表达水平;此外,我们还研究了TGF-β1处理条件下,沉默LINC00511和过表达ZEB2对肺癌细胞上皮间质转化的影响。结果:过表达ZEB2可以逆转敲降LINC00511对TGF-β1引起的上皮间质转化的抑制作用,同时还可以逆转沉默LINC00511对TGF-β1引起的肺癌细胞迁移和侵袭的抑制作用;LINC00511通过竞争性结合mi R-183-5p调控ZEB2的表达水平;LINC00511通过mi R-183-5p/ZEB2轴调控TGF-β1引起的肺癌细胞上皮间质转化。结论:LINC00511通过mi R-183-5p/ZEB2轴调控TGF-β1引起的肺癌细胞上皮间质转化、侵袭和迁移。
赵喆[6]（2020）在《新的抑癌基因KRT7-AS的抗肺癌作用及其分子机制研究》文中指出肿瘤的发生往往伴随着癌基因的激活与抑癌基因的失活。近四十年来,全球范围内,对癌基因进行了广泛和深入的研究,已发现了400多种癌基因;但对抑癌基因的研究相对不足。抑癌基因在调控肿瘤发生发展发挥重要作用,如抑癌基因P53与PTEN。肺癌中存在P53突变;PTEN低表达时,往往临床肺癌等多种恶性肿瘤病人预后较差。因此,对抑癌基因深入探究可能具有更大的潜在价值。近年来,超过8000种长链非编码RNA（lncRNA）被相继发现,但人们对其功能知之甚少。在肿瘤中,lncRNA可通过与DNA、RNA和蛋白等多种生物大分子相互作用,进而影响肿瘤的发生发展。然而,目前绝大多数lncRNA在肿瘤中功能未知。LncRNA为我们研究癌症提供了新的机遇。首先,我们采用生物信息学分析方法,从肿瘤基因组图谱（TCGA）发掘新的抑癌基因,聚焦于lncRNA表达与肿瘤发生关系的分析。研究结果发现,33种人恶性肿瘤组织中,与正常组织相比,lncRNA Keratin 7-Antisense RNA 1（KRT7-AS）在 17种肿瘤中呈现出显着性低表达,其中肺癌中表达差异性最大。然而,KRT7-AS与包括肺癌在内的绝大多数癌症之间的关系在国内外迄今尚未报道。据此,我们提出科学问题,KRT7-AS在肺癌中发挥怎样的作用?可否作为抑癌基因抑制肺癌的发生发展?根据该基因在肺癌中的低表达,我们提出了 KRT7-AS在肺癌中作为抑癌基因,抑制肺癌发生发展的科学假设,并制定了研究策略。我们首先建立KRT7-AS基因过表达和沉默的肺癌细胞株,在细胞与荷瘤小鼠中,探究KRT7-AS对肺癌细胞的致瘤性、移动性和药物敏感性等体外表型的影响,KRT7-AS对小鼠体内肿瘤生长的作用,及其体内外作用的分子机制。我们通过一系列实验探究,研究结果发现:（1）揭示lncRNAKRT7-AS在临床肺癌样本数据库与肺癌细胞株中呈现显着性低表达,其在肺癌组织与正常组织表达量差值超过5倍。（2）发现KRT7-AS转录的核心转录因子RXRα可能通过与KRT7-AS基因启动子核心核苷酸序列“GGTCA”相结合,激活该基因启动子,调控KRT7-AS基因转录。（3）细胞水平研究表明,KRT7-AS过表达的肺癌细胞克隆形成能力降低3.2倍,KRT7-AS过表达在体内显着抑制肺癌细胞成瘤性,其抑瘤率为53%,提示KRT7-AS为抑瘤基因。（4）通过基因芯片与信号通路分析,结合实验证明PTEN蛋白是KRT7-AS调控致瘤性的主要靶分子。（5）基于KRT7-AS靶蛋白PTEN的发现,且PTEN参与调控DNA修复和化疗药物增敏,我们进行了 KRT7-AS对肺癌细胞的顺铂（Cisplatin,临床化疗药物）敏感性研究,结果显示KRT7-AS显着增加肺癌细胞对顺铂的敏感程度。（6）KRT7-AS的顺铂增敏机制研究揭示,KRT7-AS可顺铂依赖性地增加Cleaved-Caspase 3、γ-H2AX等凋亡相关蛋白的表达。（7）KRT7-AS与PTEN蛋白的机制实验结果揭示,KRT7-AS调控PTEN蛋白的泛素化-蛋白酶体降解;在肺癌细胞中,PTEN蛋白存在与KRT7-AS结合的能力。综上所述,KRT7-AS可作为抑癌基因,通过调控PTEN蛋白,降低肺癌细胞体内外成瘤性,增加肺癌细胞对化疗常用药物顺铂的敏感性。综合研究结果,我们得出实验结论:KRT7-AS具有抑瘤功能,是一个新的抑癌基因,为抗肺癌研究提供了新思路,为肺癌的诊断提供了新的分子标记物,为开发抗肺癌药物提供了新的潜在靶点,也为临床上抗癌药物顺铂的增敏,减少顺铂的毒副作用提供了新的策略。因此,本研究具有理论意义和潜在的应用价值。
张济周[7]（2020）在《基于活血化瘀法探讨三七粉抗肺癌的机制研究》文中认为目的:本项目在临床疗效的基础上通过理论研究、细胞实验、动物实验,探讨三七对肺癌的干预作用及其抗肿瘤的可能机制,为临床使用中药饮片三七治疗肺癌提供理论基础。方法:1.理论研究:通过查阅大量的参考文献,了解肺癌的发病机理、三七的药用机制、血瘀与肺癌发病的关系及肿瘤治疗基因学研究进展。2.临床研究（回顾性分析）:通过临床资料回顾性分析,得出三七在治疗肺癌上可能起作用;结合临床数据收集统计结果,进一步从细胞水平及动物水平两个层面进行研究认证。3.细胞实验:1)筛选最佳目的基因CTSB干扰组;2)三七含药血清低、中、高剂量进行干预实验,并于目的基因CTSB干扰组进行对比,从细胞水平研究三七粉对肺腺癌细胞系的作用及其对Cathepsin B的作用关系及机制。4.动物实验:用A549肺腺癌细胞进行皮下成瘤,分为5组,正常对照组、荷瘤模型组、三七低剂量干预组、三七中剂量干预组、三七高剂量干预组,用三七粉低、中、高剂量进行瘤体干预实验,与正常肺组织及肿瘤肺组织进行对比,从动物水平研究三七粉对CTSB基因表达的调控作用及抑制肺癌生长的机制。结果:1.理论研究:查阅大量的参考文献后,结果分析:1)中医认为血瘀与肺癌发病存在一定的相关性;2)活血化瘀药治疗肿瘤存在一定的争议:“争对血瘀的病因治疗肿瘤”和“活血化瘀促进肿瘤的扩散”;3)肿瘤治疗基因学研究发现cathepsin B在肿瘤组织中高表达,可能与肿瘤发病相关,并确定其对应基因为CTSB。2.临床研究（回顾性分析）:对2组肺癌患者进行临床观察,发现使用三七粉治疗后可不同程度降低观察期患者体内CEA、NSE和CYFRA21的含量、纤维蛋白原、活化部分凝血酶原时间及凝血酶原时间水平,并且可降低患者血清中D-二聚体的水平,其中,CYFRA21、D-二聚体、纤维蛋白原三项指标改善比较明显,CT结果无进展,患者体内肿瘤情况稳定,生活质量改善。3.细胞实验:1)转染后针对cathepsin B的小干扰RNA能够有效抑制A549细胞中cathepsin B的表达,通过荧光定量PCR和western blot检测,发现细胞中cathepsin B的mRNA和蛋白表达水平均显着下降,并筛选出CTSB最佳干扰组;2)三七含药血清低、中、高剂量干预实验:三七含药血清处理后肺癌A549细胞的细胞增殖能力下降、凋亡能力上升,且细胞的增殖能力与凋亡能力改变具有剂量依赖性。荧光定量PCR检测三七含药血清能够下调A549细胞中CTSB mRNA表达,以高剂量组更为明显。4.动物实验:1)荷瘤模型组与正常对照组相比,cathepsin B的mRNA和蛋白表达水平呈高表达状态;2)三七干预组与荷瘤模型组相比瘤子生长速度明显减慢,且具有剂量依耐性,不同组间瘤子体积差异有显着性（P<0.05）;三七干预后不同组瘤体的CTSB mRNA的表达量及CTSB蛋白的表达水平均有不同程度的下降,且具有剂量依赖性;三七干预后能够不同程度影响小鼠血清中肿瘤标志物（CEA、NSE和CYFRA21）的水平、降低荷瘤小鼠血清中D-二聚体的含量,可不同程度延长小鼠总生存期,且高剂量组更为明显。结论:通过理论研究、临床回顾性分析及体内外实验证实三七能够作用于CTSB基因、下调肺癌细胞cathepsin B（CTSB）mRNA及蛋白表达、降低D-二聚体、改变血液粘度等方式抑制肺癌生长,实现抗肿瘤作用,为临床三七（粉）运用于肺癌的治疗提供了一定的实验基础。
赵玉[8]（2020）在《细胞衰老在肺癌辐射抵抗和小肠远期损伤效应中的作用及机制研究》文中提出放疗是利用不同能量的射线对肿瘤进行照射,从而达到抑制肿瘤生长的一种治疗方法。目前放疗已成为癌症患者常用的治疗方法之一。在辐射作用中,细胞衰老很普遍。衰老细胞在形态、基因表达、代谢等方面均有明显的改变。更重要的是,衰老细胞会分泌大量细胞因子,这些因子构成的衰老相关分泌表型（senescence associated secretory phenotype,SASP）会介导炎症作用,进而影响肿瘤的放疗疗效和患者预后。作为世界上最常见的恶性肿瘤之一,肺癌大多属于非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）。促进衰老后的细胞凋亡是提高放疗敏感性的有效策略。但影响肿瘤细胞趋向凋亡或衰老的因素,衰老与肿瘤获得性抗辐射作用之间的关系尚不清楚。为阐明NSCLC辐射抵抗过程中细胞衰老的作用,本文第一部分通过多次低剂量照射来建立NSCLC细胞辐射抵抗模型,并对亲本细胞和辐射抵抗细胞中的基因和蛋白进行研究。研究发现,信号转导转录激活因子5（signal transducer and activator of transcription 5,STAT5）是影响NSCLC辐射敏感性的关键分子。在多次照射后,衰老细胞的比例增加,STAT5的表达增强,NSCLC细胞出现辐射抵抗。电离辐射联合STAT5抑制剂或衰老细胞清除剂FOXO4-DRI,可促进NSCLC细胞凋亡,提高NSCLC对辐射的敏感性。在造血干细胞移植（hematopoietic stem cell transplantation,HSCT）之前,用全身放射疗法（total body irradiation,TBI）清除受体骨髓细胞是一种常规的治疗方法,可用于治疗各种血液系统恶性病变,但TBI也会对机体产生毒副作用。目前国内外有关TBI对小肠损伤的晚期效应研究报告尚少。本文第二部分采用HSCT小鼠模型,研究了电离辐射引起的小肠远期损伤中细胞衰老可能起到的作用。实验结果表明,辐照后10个月,HSCT小鼠的体毛变灰,体重减轻,小肠隐窝衰老细胞比例增加。进一步研究发现,这些现象与小鼠肠道菌群的变化以及小肠对蛋白质、糖类等营养物质的消化吸收功能紊乱有着直接的联系。总之,我们发现了与肿瘤细胞凋亡和衰老有关的关键蛋白STAT5,发现了影响肺癌辐射敏感性的新分子通路,这为提高肺癌的放疗疗效提供了新思路和进一步研究的实验依据;辐射诱导的远期小肠衰老效应的研究结果对提高骨髓移植患者的生存质量具有重要意义。
阮丽波[9]（2019）在《miR-186、miR-34a、SIRT6在云南人群肺癌中的表达及其对肺癌细胞恶性生物学行为机制研究》文中进行了进一步梳理肺癌具有较高的发病率和死亡率,严重威胁着人类的健康。云南是肺癌的高发省份。云南人群肺癌在国内乃至国际上都具有特殊性,具有独特的临床研究价值。肺癌的发生是多因素相互作用的结果,其中环境、遗传及生活习惯是最重要的危险因素。云南有其独特的人文地理环境特点:云南地处高原易导致强紫外线暴露;云南人习惯于大火爆炒烹饪;以烟煤作燃料比较普遍;日常生活环境污染暴露是云南重要污染源;云南空气质量年均优良的天数居全国前列,但人均寿命低于全国平均水平。研究云南人文地理环境特点、寿命相关基因与云南人群肺癌的关系,对于揭示云南人群肺癌的特点具有重要的意义。miRNA是一类小分子非编码RNA,在人类癌症中经常被放大或删除,既可以作为抑癌因子,也可以作为促癌因子。miR-34a在多种癌症中被报道存在失调,其转录主要受关键的肿瘤抑制因子p53调控。miR-34a是重要的抑癌因子,其抑癌作用已在肝癌、前列腺癌、乳腺癌细胞研究中报道并确定。miR-186在多种人类肿瘤中具有抑癌基因功能,也可作为致癌基因,在皮肤癌中主要作为致癌基因,在胃癌、垂体肿瘤、乳腺癌、黑色素瘤中主要发挥抑癌作用。慢性PM2.5暴露可显着下调miR-34a的表达水平,紫外线的暴露可导致miR-186明显下将,因此miR-34a及miR-186可能与空气污染、紫外线暴露相关。SIRT6是NAD+依赖的组蛋白去乙酰化酶家族中的一个成员,通过去乙酰化作用调控下游基因,是重要的长寿基因,在肿瘤中存在相悖的作用。研究miR-34a、miR-186、SIRT6在云南人群肺癌中的表达及其与云南环境特点、病情进展、临床预后之间的关系具有重要的意义。同一个基因可受不同的miRNA调控,而miRNA可同时调控多个基因。研究miRNA不同调控网络,对于理解miRNA的作用及药物的开发具有重要的意义。通过miRNA预测软件预测到hsa-mir-34a及hsa-mir-186可共同靶向SIRT6,hsa-mir-186可靶向HOXB8,hsa-mir-34a可靶向ALDOA。ALDOA是参与糖酵解的醛缩酶家族中的一个成员,在NSCLC组织中鉴定出710个基因与ALDOA呈正相关,ALDOA可能是调控NSCLC的一个重要基因。HOXB8是HOX家族中的成员之一,在多种肿瘤中出现表达异常,但未见NSCLC中的研究。敲低与HOXB8同源的HOXB5显着地抑制NSCLC细胞增殖、侵袭、转移和EMT,且部分是通过Wnt/β-catenin信号通路来实现的。我们期望通过此研究明确miR-34a、miR-186、SIRT6在云南人群肺癌中的表达特征,探究其表达与环境污染、紫外线暴露、病情进展、临床预后之间的关系。通过细胞水平及动物成瘤模型的研究全面揭示miR-34a、miR-186对非小细胞肺癌细胞生长、侵袭、迁移、凋亡、上皮间质转化、体内肿瘤形成能力的影响及其调控通路。本文的主要研究结果如下:（1）与癌旁组织比较,在非转移组癌组织中miR-34a表达下调了54.60%,miR-186表达下调了52.31%;在转移组癌组织中miR-34a表达下调了66.67%;miR-186表达下调了76.16%。在癌组织中,SIRT6的mRNA及蛋白表达均明显上升,并且转移组表达水平更高。TP53基因突变及空气污染暴露与肺癌组织miR-34a低表达相关,miR-34a及miR-186低表达与临床分期相关;SIRT6高表达与临床分期、T分期明显相关;miR-34a及miR-186表达与SIRT6表达呈明显的负相关。miR-34a、miR-186表达下调组及SIRT6表达上调组无进展生存期明显缩短。（2）在肺癌A549细胞中,过表达miR-34a和miR-186显着抑制肺癌细胞的恶性生物学行为（增殖、迁移、侵袭、EMT和抗凋亡）;而抑制miR-34a和miR-186表达则具有相反的作用。（3）miR-34a和miR-186靶向SIRT6降低A549细胞的恶性生物学行为,SIRT6可能通过（至少部分通过）调控Snail、Twist而影响肺癌细胞EMT,进而影响肺癌的进展。（4）裸鼠皮下异种移植成瘤实验结果表明,过表达SIRT6增加了A549细胞在裸鼠皮下形成肿瘤的能力和肿瘤生长的能力,miR-34a-agomir和miR-186-agomir瘤内注射干预治疗显着降低了过表达SIRT6 A549细胞裸鼠皮下移植瘤的体积和重量。（5）miR-34a通过调控ALDOA/ERK信号通路影响肺癌细胞的恶性生物学行为。（6）miR-186通过调控HOXB8-Wnt/β-Catenin信号通路影响肺癌细胞的恶性生物学行为。结论:miR-34a可能是云南人群NSCLC中空气污染暴露与肿瘤发生的桥梁,紫外线暴露不是云南人群NSCLC中miR-186下降的危险因素。miR-34a和miR-186在云南人群NSCLC中具有抑癌基因的功能,miR-34a和miR-186可分别通过ALDOA/ERK及HOXB8-Wnt/β-Catenin信号通路调控肺癌细胞的恶性生物学行为。SIRT6在云南人群NSCLC中具有促癌基因的功能,是miR-34a和miR-186的共同靶基因。他们可能运用于云南人群NSCLC的诊断及治疗。
曾永静[10]（2019）在《长链非编码RNA HMMR-AS1促进肺腺癌的恶性进展的研究》文中研究表明目的:长链非编码RNA（Long non-coding RNAs,lnc RNAs）是一种长度大于200nt的非编码RNA,其异常表达影响肿瘤恶性进展的作用机制已经成为很多学者研究的热点。Lnc RNA HMMR-AS1作为一种新的lnc RNA在肺腺癌（lung adenocarcinoma,LUAD）中的作用机制尚不明确,本文拟通过分析HMMR-AS1在LUAD中的表达情况,探索HMMR-AS1对体外肺腺癌细胞生物学作用的影响,并探究其在肺腺癌患者中的预后情况,为LUAD临床治疗提供新靶标。方法:1.登录基因表达数据库（Gene Expression Omnibus,GEO）下载数据集GSE19188,其中包括65例正常肺上皮组织和45例肺腺癌组织的芯片数据,通过一系列生物信息学分析筛选出与LUAD相关的差异lnc RNAs。2.购买人肺腺癌细胞系A549和H1299以及人正常肺上皮细胞BEAS-2A。利用实时荧光定量聚合酶链反应技术（RT-q PCR）检测上述细胞系中HMMR-AS1及其正义链HMMR的表达水平。3.将si-HMMR-AS1转染至A549和H1299细胞中,利用RT-q PCR检测转染效率;同时运用RT-q PCR和western blot分别检测敲减HMMR-AS1水平后对HMMR m RNA水平和蛋白水平的影响。4.采用CCK-8、克隆形成实验、细胞凋亡实验、划痕实验、Transwell侵袭实验检测干扰HMMR-AS1的表达对A549和H1299细胞生物学功能的影响。5.利用Kaplan-Meier plotter数据库评估HMMR-AS1和HMMR对肺腺癌患者预后的影响。结果:1.通过对GSE19188数据集中的LUAD RNA芯片数据进行分析后发现,与正常肺组织相比,有81个lnc RNAs在LUAD组织中存在差异表达。进一步分析发现HMMR-AS1在LUAD中的表达水平明显升高约2.08倍（t=14.1,P<0.01）,同时,分析该数据集中HMMR-AS1的正义转录本HMMR的表达水平,发现其在LUAD中亦升高约2.37倍（t=13.04,P<0.01）。2.与正常肺上皮细胞BEAS-2A相比,HMMR-AS1在LUAD细胞系A549和H1299中的表达水平分别上调了3.06倍和5.02倍（P<0.05）3.转染小干扰RNA后A549和H1299细胞中HMMR-AS1的表达水平明显下降（P<0.05）,并且明显抑制HMMR的转录和蛋白质表达水平（P<0.05）。4.表型实验结果显示,与阴性对照组相比较,敲降HMMR-AS1能够抑制LUAD细胞的生长、迁移和侵袭能力,并促进凋亡。5.Kaplan-Meier Plotter预后相关数据库分析结果显示,HMMR-AS1和HMMR表达水平越高,LUAD患者的预后情况越差（P<0.05）。结论:Lnc RNA HMMR-AS1在LUAD中高表达,能够促进LUAD细胞的增殖与转移能力,与患者的不良预后相关,表明HMMR-AS1有可能是LUAD治疗的潜在靶点。
二、反义hTERT可促进肺癌细胞A549凋亡（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、反义hTERT可促进肺癌细胞A549凋亡（论文提纲范文）
（1）USP39通过调节FoxO1的表达促进肺癌细胞的增殖（论文提纲范文）
| 英文缩略词表(Abbreviation) |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1.引言 |
| 2.材料与方法 |
| 2.1 主要仪器及来源 |
| 2.2 主要实验耗材及来源 |
| 2.3 细胞株、手术病例资料 |
| 2.4 siRNA 及 qPCR 引物 |
| 2.5 主要抗体 |
| 2.6 主要试剂配方 |
| 2.7 实验方法 |
| 3.结果 |
| 4.讨论 |
| 5.进一步展望 |
| 6.结论 |
| 7.参考文献 |
| 附录 个人简历 |
| 致谢 |
| 综述 USP39 及其家族在肿瘤中研究进展 |
| 参考文献 |
（2）lncRNA MALAT1通过miR-515-5p/TRIM65轴调控非小细胞肺癌细胞的生物学特性和糖酵解（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 引言 |
| 第一部分 lncRNA MALAT1和LncRNA LOXL1-AS1对NSCLC细胞生物学特性和糖酵解的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 组织标本和细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 1.4 主要试剂配制 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 qRT-PCR检测 |
| 2.3 细胞转染 |
| 2.4 MTT实验 |
| 2.5 克隆形成实验 |
| 2.6 流式细胞术检测 |
| 2.7 AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法 |
| 2.8 划痕实验 |
| 2.9 Transwell迁移实验 |
| 2.10 Transwell侵袭实验 |
| 2.11 Western blot检测 |
| 2.12 葡萄糖检测试剂盒测定葡萄糖消耗 |
| 2.13 乳酸检测试剂盒检测乳酸分泌量 |
| 2.14 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 MALAT1和LOXL1-AS1在NSCLC患者组织中的表达 |
| 3.2 MALAT1和LOXL1-AS1在NSCLC细胞中的表达 |
| 3.3 qRT-PCR验证MALAT1和LOXL1-AS1 siRNA转染效率 |
| 3.4 干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞增殖的影响 |
| 3.5 干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞周期的影响 |
| 3.6 干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞凋亡的影响 |
| 3.7 干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞侵袭的影响 |
| 3.8 干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞迁移的影响 |
| 3.9 干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞上皮-间质转化的影响 |
| 3.10 干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞葡萄糖消耗和乳酸含量的影响 |
| 3.11 干扰MALAT1或LOXL1-AS1对A549和SPC-A-1细胞中HK2表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第二部分 过表达TRIM65逆转干扰lncRNA MALAT1对NSCLC细胞生物学特性和糖酵解的影响 |
| 前言 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 细胞株 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 细胞培养 |
| 2.2 构建过表达TRIM65的细胞株 |
| 2.3 Western blot检测 |
| 2.4 MTT实验 |
| 2.5 克隆形成实验 |
| 2.6 流式细胞术检测 |
| 2.7 AnnexinⅤ-FITC/PI双染色法 |
| 2.8 划痕实验 |
| 2.9 Transwell迁移实验 |
| 2.10 Transwell侵袭实验 |
| 2.11 葡萄糖检测试剂盒测定葡萄糖消耗 |
| 2.12 乳酸检测试剂盒检测乳酸分泌量 |
| 2.13 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 Western blot检测TRIM65过表达转染效果 |
| 3.2 过表达TRIM65逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞增殖的影响 |
| 3.3 过表达TRIM65逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞周期的影响 |
| 3.4 过表达TRIM65逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞凋亡的影响 |
| 3.5 过表达TRIM65逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞侵袭的影响 |
| 3.6 过表达TRIM65逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞迁移的影响 |
| 3.7 过表达TRIM65逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞上皮-间质转化的影响 |
| 3.8 过表达TRIM65逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞葡萄糖消耗和乳酸含量的影响 |
| 3.9 过表达TRIM65逆转干扰MALAT1对A549和SPC-A-1细胞中HK2表达的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 第三部分 lncRNA MALAT1通过靶向miR-515-5p调控TRIM65的表达参与NSCLC的生物学特性和糖酵解 |
| 前言 |
| 1 材料与试剂 |
| 1.1 组织标本、细胞株和实验动物 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 生物信息学预测 |
| 2.2 双荧光素酶报告基因实验 |
| 2.3 RIP |
| 2.4 构建过表达MALAT1的细胞株 |
| 2.5 qRT-PCR检测miR-515-5p和TRIM65的相对表达量 |
| 2.6 Western blot检测 |
| 2.7 裸鼠成瘤实验 |
| 2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 MALAT1与miR-515-5p靶向关系预测 |
| 3.2 双荧光素酶报告基因实验证实MALAT1和miR-515-5p的靶向关系 |
| 3.3 RIP实验验证MALAT1和miR-515-5p相互结合 |
| 3.4 MALAT1对miR-515-5p表达的调控 |
| 3.5 miR-515-5p在NSCLC中的表达情况 |
| 3.6 miR-515-5p与TRIM65靶向关系预测 |
| 3.7 双荧光素酶报告基因实验证实miR-515-5p与TRIM65的靶向关系 |
| 3.8 RIP实验验证miR-515-5p与TRIM65相互作用 |
| 3.9 miR-515-5p对TRIM65表达的调控 |
| 3.10 TRIM65在NSCLC中的表达情况 |
| 3.11 MALAT1、miR-515-5p和TRIM65在NSCLC组织中的表达相关性 |
| 3.12 MALAT1、miR-515-5p和TRIM65三者的调控关系 |
| 3.13 裸鼠成瘤实验验证MALAT1、miR-515-5p和TRIM65之间的调控关系 |
| 4 讨论 |
| 5 小结 |
| 全文结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 非小细胞肺癌中的长链非编码RNA |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）超保守RNA uc.454抑制肺癌细胞侵袭转移的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 uc.454在非小细胞肺癌中的表达及临床病理意义 |
| 实验方法和材料 |
| 研究方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 uc.454表达对肺癌细胞侵袭和迁移能力的影响 |
| 前言 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 uc.454 抑制K-RAS表达的机制研究 |
| 实验材料 |
| 实验方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 uc.454 通过K-RAS抑制肺癌细胞侵袭转移的信号通路研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文小结 |
| 综述 非编码RNA在肺癌中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（4）长链非编码RNA LINC00355通过下调miR-195上调CCNE1表达促进肺腺癌细胞的增殖（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分 :LINC00355在肺腺癌中的表达及对肺腺癌细胞生物学功能的影响 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 实验对象、材料与试剂 |
| 2.1.1 患者标本 |
| 2.1.2 细胞系 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.1.4 主要实验仪器 |
| 2.1.5 主要RT-PCR引物序列 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 生物信息学分析 |
| 2.2.2 细胞培养 |
| 2.2.3 细胞转染 |
| 2.2.4 qRT-PCR |
| 2.2.5 EDU实验 |
| 2.2.6 克隆形成实验 |
| 2.2.7 流式细胞仪检测周期及凋亡 |
| 2.2.8 Westernblot实验 |
| 2.2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 生物信息学预测LINC00355/miR-195/CCNE1靶向关系及在肺腺癌中的表达 |
| 3.2 在肺腺癌组织及细胞系中分别验证LINC00355/miR-195/CCNE1 的表达 |
| 3.3 下调LINC00355抑制肺腺癌细胞增殖 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分 :LINC00355 通过下调miR-195 上调CCNE1 表达促进肺腺癌细胞的增殖 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料与试剂 |
| 2.1.1 细胞 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 qRT-PCR |
| 2.2.2 双荧光素酶报告基因分析 |
| 2.2.3 RNA免疫共沉淀(RIP) |
| 2.2.4 荧光原位杂交 |
| 2.2.5 RNA pull-down |
| 2.2.6 裸鼠成瘤实验 |
| 2.2.7 EDU实验、细胞克隆形成实验、流式细胞实验、Westernblot实验 |
| 2.2.8 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 LINC00355在肺腺癌细胞中亚细胞定位的验证 |
| 3.2 miR-195 可与LINC00355及CCNE1 直接结合 |
| 3.3 miR-195以Ago2 依赖的方式与LINC00355 靶向结合 |
| 3.4 下调LINC00355 可提高肺腺癌细胞中miR-195 的表达,降低CCNE1 的表达 |
| 3.5 体外实验验证下调LINC00355 或过表达miR-195 抑制肺腺癌细胞增殖 |
| 3.6 体内裸鼠成瘤实验验证下调LINC00355 或过表达miR-195 抑制肺腺癌细胞增殖 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）LINC00511促进肺癌细胞增殖、迁移以及上皮间质转化的分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 绪论 |
| 参考文献 |
| 第一部分 LINC00511促进肺癌细胞增殖、迁移以及上皮间质转化的作用机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 第二部分 LINC00511在TGF-β诱导的肺癌细胞侵袭和迁移中的作用机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 第三部分 LINC00511调控TGF-β1诱导的肺癌细胞侵袭迁移以及EMT的分子机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 致谢 |
| 在读期间发表学术论文 |
（6）新的抑癌基因KRT7-AS的抗肺癌作用及其分子机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 一、前言 |
| 1. 抑癌基因PTEN低表达、失活在肺癌发生发展中的作用 |
| 2. 长链非编码RNA在肺癌发生发展中的作用及机制 |
| 3. KRT7-AS的表达、结构与功能 |
| 4. 科学问题、科学假设、研究目标、研究思路及研究结果简述 |
| 二、材料与方法 |
| (一)、材料 |
| (二)、方法 |
| 三、实验结果 |
| (一)、KRT7-AS在肺癌中的低表达及其转录调控机制 |
| (二)、肺癌细胞中KRT7-AS通过调控PTEN蛋白抑制肺癌细胞致瘤性 |
| (三)、KRT7-AS增加肺癌细胞对常用抗癌药物顺铂的敏感性 |
| (四)、KRT7-AS提高肺癌细胞内PTEN蛋白水平的分子机制研究 |
| 四、讨论 |
| 1. KRT7-AS是肺癌中新的抑癌基因 |
| 2. KRT7-AS主要通过调控PTEN蛋白抑制肺癌发生 |
| 3. lncRNA KRT7-AS介导的肺癌中PTEN调控的新机制 |
| 4. KRT7-AS在临床肺癌诊疗中的意义与展望 |
| 五、结论 |
| 1. 揭示KRT7-AS基因在肺癌中低表达及其转录机制 |
| 2. 发现KRT7-AS在肺癌中作为抑癌基因抑制肺癌发生和发展 |
| 3. 阐明KRT7-AS在抑制肺癌发生发展中的新机制 |
| 4. 为肺癌临床诊断与药物联合应用提供新思路 |
| 六、参考文献 |
| 综述 Long Non-Coding RNAs in lung cancer |
| Reference |
| 攻读学位期间本人出版或公开发表的论着、论文 |
| 攻读学位期间获奖情况 |
| 中英文缩写词表 |
| 致谢 |
（7）基于活血化瘀法探讨三七粉抗肺癌的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语 |
| 前言 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 对“血瘀理论”及“活血化瘀法”的认识 |
| 1.1 “瘀”是体内一种状态(高凝状态) |
| 1.2 “致瘀”是一个致病过程(血栓形成) |
| 1.3 “瘀血”是病理结果(血栓栓塞) |
| 1.4 “瘀”与D-二聚体的相关研究 |
| 1.5 活血化瘀法的中医溯源 |
| 1.6 活血化瘀药治疗肿瘤的争议与思考 |
| 2. 中医学对肺癌的认识及治疗 |
| 2.1 肺癌的中医病名认识 |
| 2.2 肺癌的中医病因认识 |
| 2.3 肺癌的中医主要病机认识 |
| 3. 肺癌的中医治疗 |
| 3.1 药物治疗 |
| 3.2 食物治疗 |
| 3.3 康复治疗 |
| 3.4 中医特色适宜技术治疗 |
| 4. 现代医学对肺癌的认识及治疗 |
| 4.1 肺癌的定义及临床分型 |
| 4.2 肺癌的分期 |
| 4.3 现代医学对肺癌的病因认识 |
| 5. 肺癌的西医治疗 |
| 5.1 手术 |
| 5.2 放射治疗 |
| 5.3 化学治疗 |
| 5.4 靶向治疗 |
| 5.5 免疫治疗 |
| 6. 三七的研究进展 |
| 6.1 三七的中医研究概述 |
| 6.2 三七的现代药理学研究进展 |
| 6.3 三七的前期基础研究 |
| 7. 立项依据及意义 |
| 7.1 肺癌的流行病学概况及治疗现状 |
| 7.2 血瘀与肺癌发病的相关性 |
| 7.3 组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)与肿瘤的相关性 |
| 7.4 立项思路与科学假说 |
| 8. 小结 |
| 第二部分 回顾性临床研究 |
| 1. 目的 |
| 2. 临床资料与方法 |
| 2.1 一般资料 |
| 2.2 方法 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.4 统计学分析 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 不足之处 |
| 6. 典型病例举例1例 |
| 7. 结论 |
| 第三部分 实验研究 |
| 1. 细胞实验 |
| 1.1 实验材料与方法 |
| 1.2 实验结果 |
| 2. 动物实验 |
| 2.1 实验材料与方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 3. 讨论 |
| 3.1 肺癌研究中“中医药治疗”介入的必要性 |
| 3.2 实验中三七剂量组设定及其效量关系探讨 |
| 3.3 三七粉与三七含药血清药效成分探讨 |
| 3.4 三七在肺癌及肿瘤治疗中的药用机制探讨 |
| 3.5 CSTB在肺癌及肿瘤治疗中的研究价值 |
| 3.6 活血化瘀法在肺癌及肿瘤治疗中应用的思考 |
| 4. 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1: 综述 |
| 参考文献 |
| 附录2: 临床研究伦理批件 |
| 附录3: 三七质检报告 |
| 附录4: 体力状态评分表 |
| 附录5: 压力指数评分表 |
| 攻读博士学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）细胞衰老在肺癌辐射抵抗和小肠远期损伤效应中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 STAT5通过NEK2-P53轴和细胞衰老促进非小细胞肺癌细胞的辐射抗性 |
| 技术路线 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验细胞 |
| 2.2 实验动物 |
| 2.3 试剂 |
| 2.3.1 质粒和菌体 |
| 2.3.2 干扰RNA |
| 2.3.3 化合物 |
| 2.3.4 仪器耗材 |
| 2.3.5 照射源 |
| 2.3.6 抗体 |
| 2.3.7 其他试剂 |
| 2.3.8 试剂配制 |
| 2.4 主要绘图软件 |
| 3 实验方法 |
| 3.1细胞培养 |
| 3.2 实验动物饲养 |
| 3.3 药物IC50的确定 |
| 3.4 CCK8法检测细胞活力 |
| 3.5 克隆形成实验 |
| 3.6 作品愈合实验 |
| 3.7 细胞凋亡检测 |
| 3.7.1 Annexin V-FITC试剂盒 |
| 3.7.2 Annexin V-PE试剂盒 |
| 3.8 细胞周期检测 |
| 3.9 引物的提取 |
| 3.10 引物的合成 |
| 3.11 cDNA的合成 |
| 3.12 qRT-PCR |
| 3.13 蛋白质提取 |
| 3.14 BCA法测定蛋白浓度 |
| 3.15 蛋白质免疫印迹 |
| 3.16 质粒的扩增 |
| 3.17 基因的转染 |
| 3.18 β-半乳糖苷酶染色 |
| 3.19 染色质免疫共沉淀 |
| 3.20 异种移植瘤生长 |
| 3.21 辐射抵抗细胞系的建立 |
| 3.22 免疫组化 |
| 3.23 条件培养基处理 |
| 3.24 数据统计分析 |
| 4 实验结果 |
| 4.1 STAT5在非小细胞肺癌中高表达 |
| 4.1.1 STAT5在非小细胞肺癌组织高表达 |
| 4.1.2 STAT5在非小细胞肺癌缩胞高表达 |
| 4.1.3 STAT5B高表达患者整体生存期更短 |
| 4.2 抑制STAT5增加非小细胞肺癌细胞的辐射敏感性 |
| 4.2.1 STAT5表达水平呈照射剂量依赖性下降 |
| 4.2.2 STAT5抑制剂的IC50为400μM |
| 4.2.3 抑制STAT5协同辐照抑制非小细胞肺癌细胞增殖 |
| 4.2.4 抑制STAT5协同辐照增加非小细胞肺癌细胞凋亡比例 |
| 4.2.5 下调STAT5A、STAT5B抑制A549细胞增殖 |
| 4.2.6 下调STAT5可以协同照射抑制肿瘤生长 |
| 4.3 STAT5影响非小细胞肺癌细胞放射敏感性的机制 |
| 4.3.1 NEK2可能是STAT5调控的下游靶基因 |
| 4.3.2 抑制STAT5会抑制NEK2-P53信号通路 |
| 4.4 辐射抵抗非小细胞肺癌细胞中STAT5表达增加 |
| 4.4.1 辐射抵抗细胞模型的构建 |
| 4.4.2 辐射抵抗H460细胞中STAT5A/B表达增加 |
| 4.5 STAT5介导的辐射抵抗与细胞衰老有关 |
| 4.5.1 照射后衰老细胞比例增加 |
| 4.5.2 衰老细胞培养上清促进STAT5表达 |
| 4.5.3 衰老细胞可能通过IL6促进STAT5表达 |
| 4.5.4 老年鼠与年轻鼠中STAT5表达量无显着差异 |
| 4.6 衰老细胞清除剂对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响 |
| 4.6.1 FOXO4-DRI协同照射抑制A549和H460细胞的增殖 |
| 4.6.2 FOXO4-DRI协同照射抑制A549和H460细胞的克隆形成能力 |
| 4.6.3 FOXO4-DRI协同照射抑制A549和H460细胞的迁移能力 |
| 4.6.4 FOXO4-DRI协同照射促进A549和H460细胞凋亡 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 全身照射诱导小鼠小肠衰老的远期效应 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 抗体 |
| 2.3 试剂 |
| 2.4 引物序列 |
| 2.5 实验仪器 |
| 3 实验方法 |
| 3.1 TBI照射方法 |
| 3.2 小鼠骨髓细胞的获取 |
| 3.3 竞争性骨髓移植 |
| 3.4 外周血淋巴细胞分型检测 |
| 3.5 β-半乳糖苷酶染色 |
| 3.6 小肠隐窝的分离 |
| 3.7 qRT-PCR |
| 3.8 蛋白质免疫印迹 |
| 3.9 RNA-Seq和数据分析 |
| 3.10 肠道细菌菌群分析 |
| 3.11 统计分析 |
| 4 结果 |
| 4.1 TBI诱导骨髓细胞移植小鼠衰老 |
| 4.2 TBI对小肠衰老小鼠的远期影响 |
| 4.3 TBI对小鼠肠道菌群多样性影响的研究化 |
| 4.4 TBI诱导小鼠小肠菌群丰度变化 |
| 4.5 TBI诱导小鼠小肠隐窝基因表达变化 |
| 5 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 综述 STAT5在肿瘤中的作用研宄进展 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 致谢 |
（9）miR-186、miR-34a、SIRT6在云南人群肺癌中的表达及其对肺癌细胞恶性生物学行为机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写词索引 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 肺癌对人类的危害 |
| 1.1.1 肺癌的发病率及死亡率高 |
| 1.1.2 急需寻找新的特异性肺癌治疗方法 |
| 1.2 肺癌相关的主要危险因素 |
| 1.2.1 环境因素与肺癌 |
| 1.2.2 行为因素与肺癌 |
| 1.2.3 人口学因素与肺癌 |
| 1.2.4 遗传因素与肺癌 |
| 1.3 miRNA与肺癌 |
| 1.3.1 miRNA与环境致癌物 |
| 1.3.2 miRNA与肺癌相关的基因突变 |
| 1.3.3 miRNA抑癌作用及机制 |
| 1.3.4 miRNA致癌作用及机制 |
| 第二章 miR-34a、miR-186及SIRT6 在云南人群NSCLC中表达的临床意义 |
| 2.1 实验方法 |
| 2.1.1 主要实验试剂、材料及设备 |
| 2.1.2 临床资料收集 |
| 2.1.3 NSCLC组织样本收集 |
| 2.1.4 miRNA-seq检测miR-34a及 miR-186 在云南人群NSCLC患者组织中的表达 |
| 2.1.5 qRT-PCR检测miR-34a、miR-186及SIRT6 在云南人群NSCLC肺癌组织中的表达 |
| 2.1.6 Western blot检测SIRT6 在云南人群NSCLC肺癌组织中的表达 |
| 2.1.7 实验数据处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 临床基本信息 |
| 2.2.2 miR-34a及 miR-186 在云南人群NSCLC中的异常表达 |
| 2.2.3 miR-34a及 miR-186 表达异常与预后的相关性 |
| 2.2.4 SIRT6 在云南人群NSCLC癌组织中的异常表达 |
| 2.2.5 SIRT6 表达与预后的相关性 |
| 2.2.6 miR-34a及 miR-186 表达与SIRT6 表达的相关性 |
| 2.3 讨论和小结 |
| 第三章 miR-34a与 miR-186 对肺癌细胞恶性生物学行为的影响 |
| 3.1 实验方法 |
| 3.1.1 主要实验试剂、材料及仪器 |
| 3.1.2 细胞株的复苏与培养 |
| 3.1.3 实验分组与细胞转染 |
| 3.1.4 qRT-RCR检测miR-34a和 miR-186 表达 |
| 3.1.5 CCK-8 法检测细胞的增殖能力 |
| 3.1.6 Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力 |
| 3.1.7 流式细胞仪检测细胞凋亡 |
| 3.1.8 Western blot检测细胞EMT相关蛋白表达 |
| 3.1.9 实验数据处理 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 miR-34a对肺癌细胞恶性生物学行为的影响 |
| 3.2.2 miR-186 对肺癌细胞恶性生物学行为的影响 |
| 3.3 讨论和小结 |
| 第四章 miR-34a与 miR-186 靶向SIRT6 对肺癌细胞恶性生物学行为的作用 |
| 4.1 实验方法 |
| 4.1.1 主要实验试剂、材料及仪器 |
| 4.1.2 SIRT6与miR-34a及 miR-186 靶向作用检测 |
| 4.1.3 miR-34a与 miR-186 靶向SIRT6 对肺癌细胞恶性生物学行为的影响及机制研究 |
| 4.1.4 统计学处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 miR-34a及 miR-186与SIRT6 靶向结合 |
| 4.2.2 miR-34a及 miR-186 靶向SIRT6 对肺癌细胞恶性生物学行为的影响 |
| 4.2.3 miR-34a及 miR-186 靶向SIRT6 对肺癌细胞EMT相关蛋白的影响 |
| 4.3 讨论和小结 |
| 第五章 miR-34a及 miR-186 靶向SIRT6 对体内成瘤的影响 |
| 5.1 实验方法 |
| 5.1.1 主要实验试剂、材料及仪器 |
| 5.1.2 稳定高表达SIRT6 细胞建立 |
| 5.1.3 动物成瘤 |
| 5.1.4 免疫组织 |
| 5.1.5 TUNEL染色检测移植瘤组织细胞凋亡 |
| 5.1.6 实验数据处理 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 SIRT6对A549 细胞体内成瘤能力的影响 |
| 5.2.2 miR-34a和 miR-186 靶向SIRT6对A549 细胞体内成瘤能力的影响 |
| 5.3 讨论和小结 |
| 第六章 miR-34a通过ALDOA/ERK通路影响肺癌细胞的恶性生物学行为 |
| 6.1 试验方法 |
| 6.1.1 主要实验试剂、材料和设备 |
| 6.1.2 DLR检测miR-34a与 ALDOA的靶向结合 |
| 6.1.3 miR-34a靶向ALDOA对肺癌细胞恶性生物学行为的影响及机制 |
| 6.1.4 实验数据处理 |
| 6.2 结果 |
| 6.2.1 miR-34a靶向负调控ALDOA的表达 |
| 6.2.2 miR-34a靶向ALDOA对肺癌细胞恶性生物学行为的影响 |
| 6.2.3 miR-34a通过ALDOA/ERK信号通路对肺癌细胞恶性生物学行为的影响 |
| 6.3 讨论与小结 |
| 第七章 miR-186 通过HOXB8-Wnt/β-Catenin通路影响肺癌细胞的恶性生物学行为 |
| 7.1 试验方法 |
| 7.1.1 实验所需主要试剂、材料和设备 |
| 7.1.2 miR-186与HOXB8 靶向作用 |
| 7.1.3 miR-186 靶向HOXB8 对肺癌细胞恶性行为的影响及机制 |
| 7.1.4 实验数据处理 |
| 7.2 结果 |
| 7.2.1 miR-186 靶向负调控HOXB8 的表达 |
| 7.2.2 miR-186 靶向HOXB8 影响肺癌细胞恶性生物学行为 |
| 7.2.3 HOXB8 通过Wnt/β-Catenin信号通路影响肺癌细胞恶性生物学行为 |
| 7.3 讨论与小结 |
| 第八章 总结和展望 |
| 8.1 总结 |
| 8.1.1 研究背景及意义 |
| 8.1.2 研究成果 |
| 8.2 创新点 |
| 8.3 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| A.在读期间发表论文目录 |
| B.在读期间参与基金项目 |
（10）长链非编码RNA HMMR-AS1促进肺腺癌的恶性进展的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 1.材料 |
| 2.仪器和试剂 |
| 3.实验方法 |
| 4.统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 长链非编码RNA与非小细胞肺癌的研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读学位期间论文发表情况 |
| 致谢 |
四、反义hTERT可促进肺癌细胞A549凋亡（论文参考文献）
- [1]USP39通过调节FoxO1的表达促进肺癌细胞的增殖[D]. 陈洁. 安徽医科大学, 2021(01)
- [2]lncRNA MALAT1通过miR-515-5p/TRIM65轴调控非小细胞肺癌细胞的生物学特性和糖酵解[D]. 王宇. 中国医科大学, 2021(02)
- [3]超保守RNA uc.454抑制肺癌细胞侵袭转移的机制研究[D]. 周俊. 苏州大学, 2020(06)
- [4]长链非编码RNA LINC00355通过下调miR-195上调CCNE1表达促进肺腺癌细胞的增殖[D]. 梁媛. 中国医科大学, 2020(01)
- [5]LINC00511促进肺癌细胞增殖、迁移以及上皮间质转化的分子机制研究[D]. 蒋连勇. 上海交通大学, 2020(01)
- [6]新的抑癌基因KRT7-AS的抗肺癌作用及其分子机制研究[D]. 赵喆. 苏州大学, 2020(06)
- [7]基于活血化瘀法探讨三七粉抗肺癌的机制研究[D]. 张济周. 南京中医药大学, 2020(08)
- [8]细胞衰老在肺癌辐射抵抗和小肠远期损伤效应中的作用及机制研究[D]. 赵玉. 北京协和医学院, 2020
- [9]miR-186、miR-34a、SIRT6在云南人群肺癌中的表达及其对肺癌细胞恶性生物学行为机制研究[D]. 阮丽波. 昆明理工大学, 2019(06)
- [10]长链非编码RNA HMMR-AS1促进肺腺癌的恶性进展的研究[D]. 曾永静. 南京医科大学, 2019(04)