一、骨形成蛋白4诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力(英文)（论文文献综述）
黄为,董盼锋,黄有荣,夏天[1]（2022）在《淫羊藿调控骨髓间充质干细胞分化防治骨质疏松的相关信号通路》文中认为背景:随着社会老龄化的加剧,许多国家的骨质疏松发病率呈逐年上升趋势。目前,骨质疏松的发病原因尚不明确,还没有有效治愈该病的方法。目的:归纳国内外有关文献,总结淫羊藿调控骨髓间充质干细胞分化相关信号通路的研究,以期进一步理解骨质疏松发病机制,为治疗骨质疏松提供新思路。方法:以中文检索词"淫羊藿、成骨分化、骨髓间充质干细胞、骨质疏松症、信号通路、Wnt/β-catenin、BMP/Runx2/Osz、MAPK"等检索中国知网、万方、维普数据库;以英文检索词"Epimedium,Osteogenic differentiation,Bone marrow mesenchymal stem cells,Osteoporosis,Signal path,Wnt/β-catenin,BMP/Runx2/Osz,MAPK"等检索MEDLINE、PubMed数据库,筛选与淫羊藿调控骨髓间充质干细胞分化相关信号通路治疗骨质疏松相关的研究文章,根据纳入及排除标准,共纳入61篇文章。结果与结论:（1）淫羊藿和骨髓间充质干细胞在骨质疏松的发生过程中起着至关重要的作用。（2）大多数研究证实,淫羊藿发挥治疗骨质疏松作用主要通过Wnt/β-catenin、Notch、骨形态发生蛋白/Runx2/Osz、MAPK信号通路等多条信号通路调控骨髓间充质干细胞,从而影响破骨与成骨细胞的动态平衡,达到维持骨稳态状态。因此未来深入淫羊藿对骨髓间充质干细胞的研究可能会提高治疗骨质疏松的潜在价值。
杨埜[2]（2020）在《Dkk-1/Wnt/β-catenin信号轴在酒精性股骨头坏死中的作用和机制研究》文中指出目的:探究动物体内外实验中酒精暴露是否通过影响Wnt信号通路的抑制剂Dkk-1来改变骨组织的成骨和成脂的表达。方法:提取SD大鼠原代骨髓间充质干细胞鉴定并培养,诱导成骨和成脂分化后依浓度梯度（0mmol/L、10mmol/L、50mmol/L、100mmol/L）乙醇暴露干预,应用WB技术检测Dkk-1及Wnt通路中β-catenin和下游中成骨、成脂相关蛋白含量的表达。用si D kk-1慢病毒转染骨髓间充质干细胞,并在乙醇暴露下继续成骨、成脂培养。继续应用W B技术观测目的蛋白及下游蛋白表达的变化情况。取30只4-6周龄的SD大鼠分两组,一组进行食用级酒精（乙醇浓度为56°）灌胃造模,另一组以生理盐水灌胃做对照组。在24周末每组随机抽取10只大鼠取出股骨头组织,进行HE染色、免疫组化、免疫荧光实验。观察组织病理学改变及组织内目标蛋白和下游相关蛋白的变化情况,最后进行体内外免疫荧光证明是否存在一致性。结果:（1）成功提取大鼠骨髓间充质干细胞,并在成骨、成脂诱导分化中进行乙醇暴露,茜素红染色和油红O染色证明成骨、成脂表达呈已经浓度梯度依赖性,两者反向传递。WB检测发现Dkk-1存在乙醇浓度梯度依赖性（P<0.05）,并抑制β-catenin蛋白表达、成骨相关蛋白Runx2表达（P<0.05）和促进成脂相关蛋白PPAR-γ表达（P<0.05）。（2）si Dkk-1慢病毒转染后,相同乙醇浓度下的Dkk-1被成功抑制,并且细胞染色结果及成骨、成脂相关蛋白表达结果逆转。（3）24周后动物实验采取,HE染色病理结果见骨小梁稀疏,周围骨髓坏死,酒精组中Dkk-1高表达（P<0.05）。免疫组化及免疫荧光结果与体外实验相一致,且酒精组中体内外实验β-catenin均被抑制（P<0.05）。结论:（1）在酒精暴露下,Wnt信号通路抑制剂Dkk-1对乙醇存在正向浓度依赖性改变。（2）酒精引发Dkk-1的改变可以影响骨髓间充质干细胞和股骨头中骨组织的成骨、成脂能力,即抑制成骨分化,刺激成脂分化。（3）在应用动物模拟酒精性股骨头坏死的发生过程中,Dkk-1可能参与了股骨头坏死的发生及发展。
文冰[3]（2020）在《miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究》文中认为背景和目的:人乳牙牙髓干细胞（stem cells fromhuman exfoliated deciduous teeth,SHED）是人类脱落的乳牙牙髓中分离得到的一种属于外胚间充质干细胞的牙源性干细胞,具较强的增殖能力及分化成身体各种类型细胞的潜能,组织来源方便,是细胞治疗和再生医学所需干细胞的理想来源。基于人乳牙牙髓干细胞在特定的培养环境中向神经元分化的特性,人乳牙牙髓干细胞在神经退行性疾病的治疗中发挥着重要作用。最新研究发现mi RNA（micro-RNA,小RNA）在人乳牙牙髓干细胞向神经元样细胞分化过程中差异表达,在神经元分化中发挥重要作用,但其在人乳牙牙髓干细胞神经分化中的作用机制尚不清楚我们前期的工作发现mi RNA-221（micro-RNA 21,小RNA221）在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程表达上调,并调控人乳牙牙髓干细胞神经分化效率,我们推测mi R-221调控人乳牙牙髓干细胞神经分化。本论文将研究mi R-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及其调控机制,确定mi R-221的靶基因,明确mi R-221调控人乳牙牙髓干细胞神经分化的信号通路,并确定mi R-221通过靶基因调控人乳牙牙髓干细胞神经分化特异信号通路的分子机制。本论文将为人乳牙牙髓干细胞神经分化调控机制的研究提供新的理论基础和新的方向。材料和方法:1.mi RNA-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达模式及作用（1）通过流式细胞仪检测人乳牙牙髓干细胞的间充质干细胞特异表面抗原标志物CD29（integrin subunit beta 1,β1整合素）、CD90（Thy-1 cell surface antigen,Thy-1细胞表面抗原）、CD146（melanoma cell adhesion molecule,黑色素瘤细胞粘附分子）和STRO-1（Stromal cell antigen,基质细胞抗原）,细胞粘附分子CD13（membrane alanyl aminopeptidase,膜丙氨酸氨基肽酶）和CD44（CD44 molecule,CD44分子）,造血干细胞阳性标志物CD34（CD34molecule,CD34分子）和CD45（protein tyrosine phosphatase receptor type C,蛋白酪氨酸磷酸酶受体C型）和内皮细胞特异性抗原标记物CD31（platelet and endothelial cell adhesion molecule 1,血小板和内皮细胞粘附分子1）的阳性率;通过免疫荧光实验检测人乳牙牙髓干细胞STRO-1的表达。（2）通过流式细胞仪检测人乳牙牙髓干细胞分化的神经元细胞的成熟神经元特异性抗原标志物NSE（enolase 2,烯醇化酶2）、MAP-2（microtubule associated protein 2,微管联合蛋白-2）、NF-M（neurofilament medium,神经丝蛋白）和TH（tyrosine hydroxylase,酸羟化酶）和神经干细胞特异性抗原Nestin（巢蛋白）的阳性率;通过免疫荧光实验检测人乳牙牙髓干细胞分化的神经元细胞NSE和MAP-2的表达。（3）通过q-PCR检测在人乳牙牙髓干细胞向神经元细胞分化过程中第0、2、4、6、8、10和12天mi RNA-221的表达水平。（4）通过流式细胞仪检测mi R-221 inhibitor（mi R-221抑制剂）、mi R-221mimic（mi R-221模拟物）、Blank（空白对照）和NC（Negative control RNA,阴性对照RNA）转染人乳牙牙髓干细胞后分化成神经元细胞特异标志物NSE和MAP-2的阳性率。2.mi RNA-221的靶基因确定（1）通过生物信息学分析预测mi R-221的靶基因。（2）通过双荧光素酶报告基因分析实验验证mi R-221与靶基因的相互作用。（3）通过q-PCR和western blotting检测在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程mi R-221的靶基因CHD8（chromodomain helicase DNA binding protein 8,染色质螺旋酶DNA结合蛋白8）的m RNA和蛋白表达水平。（4）通过q-PCR和western blotting检测mi R-221 inhibitor、mi R-221mimic、Blank和NC转染人乳牙牙髓干细胞后CHD8的m RNA和蛋白表达水平。3.mi RNA-221调控人乳牙牙髓干细胞Wnt（wingless,无翼的）/β-catenin（β连环蛋白）通路的分子机制（1）通过q-PCR和western blotting检测人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中Wnt/β-catenin通路特异标志物β-catenin、Wnt3A（Wnt family member3A,Wnt家族蛋白3A）、cyclin D1（细胞周期蛋白D1）、cMyc（transcriptional regulator Myc-like,Myc样转录调节因子）、c-Jun（Jun proto-oncogene AP-1 transcription factor subunit,Jun原癌基因AP-1转录因子亚基）和MMP7（matrix metallopeptidase 7,基质金属肽酶7）的m RNA和蛋白表达水平。（2）通过q-PCR和western blotting检测mi R-221 inhibitor、mi R-221
张文[4]（2020）在《BMP-7基因转染BMSCs移植对大鼠脊髓损伤后神经元修复的初步研究》文中研究说明研究目的:脊髓损伤目前尚无有效治疗方式,本研究以慢病毒载BMP-7基因转染骨髓间充质干细胞,诱导其向神经元分化;并将慢病毒载BMP-7基因转染的BMSCs移植治疗大鼠脊髓损伤,探究对大鼠脊髓损伤神经元修复的影响,为促进脊髓功能修复提供新的靶点和策略。方法:体外培养大鼠BMSCs,随机分为空白对照组（常规培养）、LV-GFP组（转染LV-GFP）、LV-BMP7-GFP组（转染LV-BMP7-GFP）,采用倒置显微镜观察细胞形态,成脂诱导分化、成骨诱导分化检测细胞分化能力,MTT法检测细胞存活率,免疫细胞化学实验检测神经元标记物NF-200、SYN1表达情况,qRT-PCR检测NF-200、SYN1mRNA表达情况。采用Allen’s打击装置制作大鼠脊髓损伤模型,随机分为假手术组（常规饲养）、模型组（脊髓蛛网膜腔内注射生理盐水）、BDNF组（脊髓蛛网膜腔内注射BDNF）、BMSCs组（脊髓蛛网膜腔内注射BMSCs）、LV-BMP7-BMSCs组（脊髓蛛网膜腔内注射LV-BMP7-BMSCs）;治疗后6 h、1 d、3 d、7 d、14 d、21 d、28 d采用BBB评分评估大鼠后肢功能,采用免疫组织化学实验、qRT-PCR、WesternBlot检测神经元修复指标NF-200、GFAP表达情况。结果:1、慢病毒载BMP-7基因转染后,LV-GFP组和LV-BMP7-GFP组BMSCs存活率与转染前相比,无显着性差异（P>0.05）;LV-GFP转染后3 d,MOI=10组平均荧光强度最高（P<0.05）。2、细胞免疫组化结果显示:空白对照组和LV-GFP组NF-200、SYN1表达呈阴性;LV-BMP7-GFP组NF-200、SYN1表达呈阳性,胞体和轴突被染成亮棕黄色。3、细胞qRT-PCR结果显示:LV-BMP7-GFP组NF-200、SYN1 mRNA相对表达量高于对照组和LV-GFP组（P<0.05）。4、脊髓损伤治疗后14 d,BDNF组、LV-BMP7-BMSCs组大鼠BBB评分高于模型组和BMSCs组（P<0.05）;治疗21 d、28 d后,LV-BMP7-BMSCs组大鼠BBB评分高于模型组、BDNF组和BMSCs组（P<0.05）。5、与假手术组相比,BDNF组、BMSCs组和LV-BMP7-BMSCs组大鼠脊髓组织中NF-200表达水平升高（P<0.05）;BDNF组和LV-BMP7-BMSCs组NF-200表达水平高于模型组、BMSCs组（P<0.05）。6、与假手术组相比,其他各组大鼠脊髓损伤后GFAP表达水平升高（P<0.05）;模型组、BDNF组、BMSCs组和LV-BMP7-BMSCs组之间GFAP表达水平无统计学差异（P>0.05）。结论:1、慢病毒载BMP-7基因转染BMSCs后得到的细胞形态与神经元样细胞相似,神经元标记物阳性表达,证明慢病毒载BMP-7基因转染BMSCs,促进其向神经元分化。2、慢病毒载BMP-7基因转染BMSCs移植治疗脊髓损伤,可促进脊髓损伤神经元修复,一定程度恢复神经功能,为临床治疗脊髓损伤提供理论依据。
任聪[5]（2019）在《马鹿茸多肽“补肾健骨”作用与机制研究》文中指出目的:对马鹿茸多肽进行分离纯化,获得不同分子量的马鹿茸多肽（A～E）。研究马鹿茸多肽（A～E）对MC3T3-E1成骨细胞的增殖及成骨分化作用、对骨髓间充质干细胞的增殖及骨向分化的作用;马鹿茸多肽A对大鼠肾虚型骨质疏松症的作用,探究马鹿茸防治骨质疏松症的作用机制。通过HPLC-MS联用技术分析马鹿茸多肽A的组分组成,采用原子力显微镜对马鹿茸多肽A的表面结构进行分析和表征,采用网络药理学和生物信息学分析方法,探究马鹿茸多肽A防治骨质疏松症的靶基因和靶蛋白,及相关的作用机制的信号通路,为防治骨质疏松症提供理论依据和科学指导。材料与方法:1材料鹿茸药材购于辽宁西丰药材市场,经辽宁中医药大学中药鉴定教研室的李峰教授鉴定为鹿科动物马鹿Cervus elaphus Linnaeus的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角;马鹿茸多肽,由实验室自制。2方法2.1马鹿茸多肽（A～E）的分离纯化及分子量的分布测定采用多级膜分离技术分离并纯化得到5种不同分子量的马鹿茸多肽（A～E）;采用高效凝胶过滤色谱法和SDS-PAGE电泳法测定马鹿茸多肽（A～E）的分子量。2.2马鹿茸多肽（A～E）对MC3T3-E1成骨细胞的增殖及分化作用采用MTT法研究马鹿茸多肽对MC3T3-E1成骨细胞的增殖作用;以ALP为指标,采用ELISA法研究马鹿茸多肽（A～E）对MC3T3-E1成骨细胞的分化作用。2.3马鹿茸多肽（A～E）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）的增殖及骨向分化作用采用MTT法研究马鹿茸多肽（A～E）对骨髓间充质干细胞的增殖作用;以ALP、BGP、BMP-2为指标,采用ELISA法研究马鹿茸多肽（A～E）对骨髓间充质干细胞的骨向分化作用。分别采用RT-PCR法和Western-blot法检测BMSCs中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2基因和蛋白的表达。2.4马鹿茸多肽A对大鼠肾虚型骨质疏松症的作用采用切除雌性大鼠双侧卵巢的方法,建立肾虚型骨质疏松症模型,分别以补佳乐（Progynova）,仙灵骨葆（XLGB）作为阳性对照药,连续给予12周的马鹿茸多肽A。采用骨密度仪测定大鼠的骨密度;采用称量法测定大鼠的子宫指数;采用酶联免疫法（ELISA）检测大鼠血清中的雌二醇（E2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨钙素（BGP）、骨形成蛋白-2（BMP-2）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ2（PPARγ2）的活性,及骨组织中的BALP、BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2、TGF-β1,以及下丘脑和肾脏组织的TIEG1、TGF?1。分别采用RT-PCR法和Western-blot法检测骨组织BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2基因和蛋白的相对表达。采用HE染色,观察大鼠股骨、椎骨的形态变化;采用免疫组化法观察大鼠骨组织的形态变化和阳性表达。2.5马鹿茸多肽A的组成与特征采用柱前衍生化的方法,利用氨基酸自动分析仪,测定马鹿茸多肽A水解后的氨基酸的种类和含量。采用HPLC-MS测定马鹿茸多肽A的组分分析。利用原子力显微镜,以粗糙度、表面高度分析、功率谱密度等为参数,测定马鹿茸多肽A的表面形貌。采用GO分析、KEGG分析和String蛋白互作网络等生物信息学方法,分析马鹿茸多肽A的72个多肽片段中,推测与骨质疏松症相关的靶基因和靶蛋白,以及作用机制相关的信号转导通路。结果:1分离纯化得到五种分子量的多肽,即多肽A（200～3000 Da）,多肽B（3000～5000 Da）,多肽C（5000～10000 Da）,多肽D（10000～50000 Da）,多肽E（>50000 Da）。2马鹿茸多肽（A～E）均能促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖及成骨分化,其中分子量为200-3000 Da的多肽A,在浓度为200μg·m L-1,作用48 h后,促成骨细胞增殖及成骨分化的作用最显着。3马鹿茸多肽（A～E）对BMSCs细胞的增殖及分化作用3.1马鹿茸多肽（A～E）均能促进BMSCs的增殖及骨向分化,其中以分子量为200-3000 Da的多肽A,在浓度为200μg·m L–1时,促BMSCs的增殖及骨向分化的作用最显着。3.2马鹿茸多肽（A～E）增强Bmp-2、Smad1、Smad5、Runx2基因、蛋白的表达;多肽A上调Bmp-2、Smad1、Smad5、Runx2基因、蛋白的表达最接近诱导液组,可能跟激活Bmp-2/Smad1、Smad5/Runx2信号转导通路有关。4马鹿茸多肽A对大鼠肾虚型骨质疏松症的作用4.1血清中骨代谢相关指标检测结果马鹿茸多肽A升高E2、ALP、BGP、BMP-2的水平,并降低TRAP和PPARγ2水平。4.2子宫指数与正常组比较,模型组大鼠的子宫明显萎缩,各组的子宫指数明显小于正常组;与模型组比较,多肽A高、低剂量组、西阳对照组、中阳对照组,与模型组的子宫指数差异无统计学意义。4.3骨密度的检测结果各给药组均能增加大鼠骨密度,马鹿茸多肽A高剂量组的效果最显着。4.4骨组织中相关指标的检测结果与正常组比较,模型组大鼠骨组织中BALP、BGP、BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2、TGFβ1、TIEG1含量显着降低;与模型组相比,马鹿茸多肽A高、低剂量组、西阳对照组、中阳对照组均能显着提高骨组织中BALP、BGP、BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2、TGFβ1、TIEG1的水平,其中多肽A高剂量组的效果最显着。4.5下丘脑中的TGF-β1和TIEG1蛋白的表达各给药组均增强下丘脑中TGF-β1、TIEG1的表达水平,多肽A高剂量组的效果最显着。4.6肾中的TGF-β和TIEG1蛋白的表达各给药组均增强肾中TGF-β1、TIEG1的表达水平,多肽A高剂量组效果最显着。4.7骨组织中相关基因的表达各给药组大鼠骨组织中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2基因相对表达量显着升高;多肽A高剂量组对BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2基因相对表达量优于其他组。4.8骨组织中相关蛋白的表达与正常组比较,模型组大鼠骨组织中BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2蛋白灰度值量显着降低;各给药组均能增加BMP-2、Smad1、Smad5、Runx2的蛋白表达量,且多肽A高剂量组的效果最显着。4.9骨组织形态学检测的结果4.9.1 HE染色检测结果与模型组比较,马鹿茸多肽A高、低剂量组可见骨小梁增厚,结构紧密,骨髓腔变小,骨外膜可见骨原细胞。4.9.2骨组织的免疫组化的结果与正常组比,模型组中的Bmp-2、Smad1、Smad 5、Runx2的平均光密度显着下降;与模型组比,各组的Bmp-2、Smad1、Smad 5、Runx2的平均光密度显着高于模型组,马鹿茸多肽A高、低剂量组的Smad1和Runx2的平均光密度显着高于西阳对照组;多肽A高、低剂量组的Bmp-2、Smad1、Smad 5、Runx2的平均光密度接近甚至高于阳性组。5马鹿茸多肽A的组分分析5.1马鹿茸多肽A中氨基酸的种类与含量在水解后氨基酸中含有18种氨基酸,约占26.4%;组氨酸的含量最高,天冬氨酸含量最少,且8种必需氨基酸含量是2071.24mg.g-1占53.04%。游离氨基酸含有18种氨基酸,约占23.6%;苏氨酸的含量最高,脯氨酸含量最少;8种必需氨基酸553.81mg.g-1,占60.18%。结合氨基酸中必须氨基酸含量1517.43mg.g-1,达50.84%。5.2 HPLC-MS法测定马鹿茸多肽A的组分组成分析得到多肽片段共72个,分子量在700～2000 Da,等电点在4.33-11.45之间。5.3马鹿茸多肽A的表面形貌特征5.3.1表面形貌概况马鹿茸多肽A表面呈现有尖锐的椎体状,且不规律分布在表面。且当浓度从0.1μg.m L-1增加到5μg.m L-1,粗糙度Ra/Rq减小,但变化不明显。5.3.2表面高度分布浓度为0.1 ug.m L-1的马鹿茸多肽的表面高度是6.13969 nm;浓度为0.25μg.m L-1的马鹿茸多肽的表面高度是39.4588 nm;浓度为0.5μg.m L-1的马鹿茸多肽样品的表面高度是14.5105 nm;浓度为1 ug.m L-1的马鹿茸多肽样品的表面高度是16.6944 nm;浓度为5μg.m L-1的马鹿茸多肽样品的表面高度是28.6132nm。5.3.3功率谱密度（PSD）当波长为0.208祄,频率为4.80/祄,马鹿茸多肽A的PSD值为水平轴PSD为40.1 nm3,垂直轴PSD为44.7 nm3,二维的PSD分别为75055 nm4;当波长为0.0971祄,频率为10.3/祄,马鹿茸多肽的PSD值为水平轴的PSD为3.29 nm3,垂直轴的PSD为6.3 nm3,二维的PSD分别为2931 nm4。5.4马鹿茸多肽A的网络药理学研究网络药理学研究发现多肽A中的主要的靶蛋白是胶原蛋白α-1（I）链（COL1A1）、有丝分裂蛋白活化蛋白激酶激酶14（MAPK14）、纤维蛋白2（FBN2）等,推测分析可知PI3K-Akt信号通路、Ras信号通路、MAPK信号通路,FOX信号通路等,可能与马鹿茸的“补肾健骨”的防治骨质疏松症的作用有关,其共同作用,防治骨质疏松症的发生。这些信号通路的发现与推测是对鹿茸多肽防治肾虚型骨质疏松症的作用机制的补充,推测鹿茸多肽“补肾健骨”的作用,可能是这几种信号通路协同作用的结果。结论:1马鹿茸多肽分离并纯化为为五种不同分子量的多肽（A～E）;采用高效凝胶过滤色谱法和SDS-PAGE电泳法测定马鹿茸多肽的分子量的结果基本一致。2马鹿茸多肽（A～E）促进MC3T3-E1成骨细胞的增殖和分化;且分子量为200-3000 Da的多肽A的促增殖及分化的效果明显优于其他分子量的多肽。3马鹿茸多肽（A～E）促进骨髓间充质干细胞BMSCs的增殖和骨向分化;且分子量为200-3000 Da的多肽A的效果明显优于其他分子量的多肽;其作用机制可能是与其上调Bmp-2、Smad1、Smad5、Runx2信号转导通路有关。4马鹿茸多肽A能防治大鼠肾虚型骨质疏松症。作用机制可能是其激活Bmp-2、Smad1、Smad5、Runx2信号转导通路。5采用HPLC-MS技术分析马鹿茸多肽A有72个多肽片段,结合网络药理学的方法和生物信息学方法,发现了骨质疏松症相关的直接和间接的靶蛋白和靶基因,及其他信号通路,靶基因靶蛋白及多条信号通路协调作用,能预防治疗骨质疏松症的发生。6采用原子力显微镜（AFM）从微观角度分析马鹿茸多肽A的表面结构,表面有凹凸不平的的椎体状,不规律地分布在分子表面,推测可能是多肽的不规则的锥形结构促使多肽A更容易进入细胞,发挥药效作用;且多肽A溶液的的浓度越低,越能清晰地观察的表面形貌。AFM对多肽A结构的深入分析,为研究马鹿茸多肽的构效关系奠定基础。
李玉琳[6]（2019）在《脉冲电磁场激励骨髓间充质干细胞修复脊髓损伤的实验研究》文中提出【目的】脊髓损伤（Spinal cord injury,SCI）是一种严重的创伤性疾患,会导致肢体感觉和运动功能障碍,致残率较高。目前,细胞移植治疗是脊髓损伤领域研究的热点。然而细胞移植治疗仍面临着很多的困难,如移植细胞在脊髓损伤局部的存活率低;在损伤后抑制性微环境中种子细胞的分化和迁移能力较差;免疫排斥反应以及伦理学问题等。本研究拟探讨不同强度的脉冲电磁场（Pulsed electromagnetic fields,PEMF）对骨髓间充质干细胞（Bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs）生物学活性的影响,并观察PEMF激励的BMSCs移植到SCI大鼠体内的治疗效果,并进一步探讨其潜在的生物学机制。【方法】1.体外实验:从Wistar大鼠体内提取、分离、纯化、培养BMSCs,并采用流式细胞技术进行细胞鉴定;观察不同强度PEMF对BMSCs活性、增殖能力的影响,选择最佳的激励强度;于细胞培养48h内分别采用25,50,75,100Hz（每天1次,每次1h,连续干预1-9天）干预强度进行细胞刺激,观察不同强度刺激下,细胞的活性、增殖能力情况,选择最佳的激励强度;采用Western-blot技术观察不同强度、不同刺激时长的PEMF激励BMSCs后,细胞分泌神经营养因子的水平。2.体内实验:采用Impactor model-Ⅱ打击器建立Wistar大鼠脊髓损伤模型,将大鼠随机分为4组,包括A组:实验对照组（行单纯椎板切除术）;B组:单纯损伤组（行脊髓损伤造模）;C组:BMSCs移植组（移植未经PEMF刺激的BMSCs治疗）、D组:OBMSCs（Optimal BMSCs）移植组（移植高活力BMSCs治疗）;将高活力的BMSCs移植入脊髓损伤大鼠体内,通过免疫组织化学方法观察移植的细胞在脊髓损伤局部的填充状态、活性、增殖能力情况,观察其对脊髓损伤局部组织学修复作用。并探索PEMF影响BMSCs存活、增殖能力与p75NTR-Trk信号通路的相关性;应用BBB评分评价大鼠运动功能恢复情况。数据采用统计学软件SPSS 18.0进行分析,数据以均数±标准差（Mean±SD）形式表示,显着性差异使用ANOVA testing计算,P<0.05被认为具有统计学意义。【结果】1.本实验完成对BMSCs的提取、分离、纯化、培养及鉴定。BMSCs的免疫表型为:CD29,CD90为阳性,CD34,CD45为阴性,符合BMSCs的表型特征,并且细胞中无造血系统的细胞污染;2.50Hz强度的PEMF,每天刺激1h,持续9天,BMSCs的活性明显高于25Hz、75Hz及100Hz组,本研究将50Hz,1h/d,9d作为最佳的激励强度,制备高活力种子细胞;体外实验WB检测结果发现,PEMF激励后的骨髓间充质干细胞BDNF及NGF的表达水平显着高于对照组（p<0.05）,NT-3的表达水平有上升趋势,与对照组比较差异无统计学意义（p>0.05）;3.体内实验发现,OBMSCs组大鼠SCI损伤局部脊髓空洞的面积显着小于对照组（p<0.05）,且NF200阳性面积显着高于对照组（p<0.05）,GFAP阳性面积显着低于对照组（p<0.05）;WB检测结果发现,OBMSCs组BDNF的表达水平显着高于对照组（p<0.05）,同时OBMSCs组NGF的表达水平呈上升趋势,较对照组差异无统计学意义（p>0.05）;在细胞移植3周后,OBMSCs组大鼠BBB功能评分显着高于对照组（p<0.05）;WB检测结果发现,OBMSCs组的p75NTR、TrkA、TrkB及TrkC表达水平显着高于对照组（p<0.05）,差异均具有统计学意义。【结论】本研究成功分离培养了BMSCs,PEMF在50Hz,1h/d,持续刺激9d的激励强度下,BMSCs表达最高的生物学活性,并表达高水平的BDNF和NGF。将高活力的BMSCs移植到大鼠SCI模型后,大鼠损伤局部脊髓空洞形成明显减少,且促进了神经元的存活和神经营养因子的表达,减少了胶质瘢痕的形成,同时大鼠运动功能得到了显着的改善。此外,OBMSCs组p75NTR、TrkA、TrkB及TrkC的表达显着增高,这可能提示了OBMSCs移植修复SCI的潜在信号通路和调控机制。
张帅帅[7]（2019）在《Transwell共培养体系中背根神经节对骨髓间充质干细胞的作用及其机制研究》文中认为【背景】严重创伤等引起的大段骨缺损的治疗一直是骨科临床上的难题。组织工程骨的迅速发展为大段骨缺损的治疗提供了一种可行的方案。然而,目前组织工程骨（TEB）并没有广泛应用于临床大段骨缺损的治疗,主要因为植入体内的组织工程骨缺乏血管和神经的支配,致使组织工程骨体内成骨效果不佳。课题组前期在动物实验研究中发现感觉神经束植入组织工程骨可以显着促进组织工程骨成骨。然而目前感觉神经促组织工程骨成骨的体外细胞学机制并不明确。【目的】1.探究感觉神经促进组织工程骨成骨的体外细胞学机制;2.探究共培养体系中背根神经节（DRG）对骨髓间充质干细胞（BMSCs）增殖分化的影响;3.探究共培养体系中DRG对BMSCs作用的内在机制。【方法】1.通过全骨髓冲洗贴壁培养法提取BMSCs,并从细胞形态、多向分化潜能、特异性CD分子三方面鉴定提取的BMSCs;2.Transwell共培养体系的构建。取新生SD大鼠背根神经节（DRG）与绿色荧光大鼠骨髓间充质干细胞BMSCs构建Transwell共培养体系。实验组为DRG与BMSCs Transwell共培养（可表示为DRG+BMSCs组）,DRG神经细胞位于Transwell小室内,BMSCs正常接种于6孔板内。对照组为BMSCs单独培养组（可表示为BMSCs组）;3.通过CCK8方法检测BMSCs增殖情况;通过茜素红、油红O、阿利辛蓝染色评估BMSCs成骨、成脂、成软骨三向分化的能力;4.通过克隆形成实验（CFU）检测BMSCs自我更新能力并通过RT-PCR实验检测BMSCs干性基因的表达以明确BMSCs干性是否增强;5.通过免疫荧光染色和Western blot方法检测自噬相关蛋白LC3的表达并采用透射电镜观察自噬小体的形成和数量探究细胞自噬的变化;6.采用Western blot方法检测BMSCs中AMPK/mTOR和AKT/mTOR信号通路的激活情况以确定本实验中介导自噬的信号通路;7.采用AMPK抑制剂Compound C阻断AMPK/mTOR通路。通过Western blot、免疫荧光检测自噬相关蛋白LC3,通过透射电镜观察自噬小体的形成,比较加入Compound C前后共培养组自噬强度和干性基因表达的变化,以明确AMPK/mTOR信号通路对BMSCs自噬和干性基因表达的调节作用;8.采用神经激肽1受体（NKIR）抑制剂阿瑞匹坦阻断DRG产生的P物质（SP）对BMSCs的作用,通过Western blot检测共培养组自噬相关蛋白LC3的变化并通过RT-PCR检测其干性基因的变化,以明确共培养体系中DRG作用于BMSCs的细胞因子。【结果】1.BMSCs的鉴定。细胞形态学观察发现:P3代细胞形态为典型的纺锤形或梭形并含绿色荧光;茜素红染色、油红O染色、阿利辛蓝染色均为阳性;细胞表面低表达造血细胞表面的标志分子CD34（2.3±0.37%,n=5）、CD45（2.4±0.19%,n=5）以及髓系细胞标志CD11b/c（1.4±0.13%,n=5）,高表达间充质干细胞的标志之一CD90（99.6±0.24%,n=5）。因此,所培养的细胞为骨髓间充质干细胞,并且细胞纯度较高。2.共培养体系中BMSCs增殖和分化实验结果。（1）CCK8实验结果显示:Transwell共培养实验第2、4、6、8、10天,共培养组BMSCs CCK8检测的吸光度值均高于对照组BMSCs（P值<0.05）,即共培养组BMSCs增殖能力强于对照组BMSCs,其中共培养第8天时两组增殖能力差异最显着。CCK8实验说明DRG与BMSCs共培养可促进BMSCs增殖。（2）茜素红染色结果显示:成骨诱导14天后,共培养组BMSCs比对照组BMSCs所形成的钙结节面积更大而且颜色更深;油红O染色结果显示:成脂诱导24天后,共培养组BMSCs比对照组BMSCs组所形成的脂滴更加饱满,脂滴数量更多;阿利辛蓝染色结果显示:成软骨诱导20天后,共培养组BMSCs比对照组BMSCs所形成的软骨基质团更大更饱满。共培养组BMSCs成骨、成脂、成软骨能力均强于对照组BMSCs,即BMSCs三向分化潜能在与DRG共培养后得到维持或增强。3.CFU实验和干性基因RT-PCR结果。（1）CFU实验结果显示:共培养组BMSCs克隆形成率显着高于对照组BMSCs（P值<0.05）,即共培养组BMSCs克隆形成能力强于对照组BMSCs。（2）RT-PCR结果显示:共培养组BMSCs Sox2、Nanog、Oct4三种干性因子基因表达较对照组BMSCs均上调（P值<0.05）。DRG与BMSCs共培养可以增强BMSCs的细胞干性。4.BMSCs自噬检测结果。（1）激光共聚焦显微镜观察免疫荧光染色结果可见共培养组BMSCs中细胞自噬相关蛋白LC3的荧光强度强于对照组BMSCs。Image J荧光强度半定量分析发现:共培养组BMSCs细胞自噬相关蛋白LC3荧光强度平均OD值大于对照组BMSCs（P值<0.05）;（2）Western blot条带半定量分析显示,共培养组BMSCs其LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值大于对照组BMSCs（P值<0.05）;（3）透射电镜观察发现:共培养组BMSCs细胞自噬小体的形成数量显着多于对照组BMSCs。共培养组BMSCs自噬强度大于对照组BMSCs。5.Western blot检测AMPK/mTOR通路和AKT/mTOR通路。Western blot结果显示:与对照组BMSCs相比,共培养组BMSCs中AMPK/mTOR信号通路中P-AMPK表达上调且P-mTOR表达下调,而AKT/mTOR信号通路中P-AKT表达没有变化。共培养过程中BMSCs自噬的增强伴随着AMPK/mTOR信号通路激活,而AKT/mTOR信号通路无明显变化。6.AMPK阻断实验。Compound C抑制AMPK的激活,阻断AMPK/mTOR信号通路的传导后,（1）Western blot结果显示:DRG+BMSCs+Compound C组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅰ表达量以及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值均小于DRG+BMSCs组（P值<0.05）,大于对照组（P值<0.05）。（2）RT-PCR结果显示:DRG+BMSCs+Compound C组Sox2、Nanog、Oct4三种干性基因的表达量小于DRG+BMSCs组（P值<0.05）,大于对照组（P值<0.05）。（3）透射电镜观察发现DRG+BMSCs+Compound C组自噬小体形成数量明显少于DRG+BMSCs组,多于对照组。AMPK特异性抑制剂Compound C可以显着降低共培养组中BMSCs的自噬水平以及干性基因的表达,AMPK/mTOR信号通路的激活介导了共培养体系中BMSCs自噬水平的增强。同时,本实验中DRG+BMSCs+Compound C组干性基因表达水平显着低于DRG+BMSCs共培养组进一步证明了自噬增强介导了共培养组BMSCs细胞干性的增强。7.NK1R抑制实验。NK1R特异性抑制剂阿瑞匹坦加入共培养体系后,（1）Western blot结果显示:DRG+BMSCs+aprepitant组自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值较DRG+BMSCs组显着下降（P值<0.05）,但仍高于对照组（P值<0.05）。（2）RT-PCR结果显示:DRG+BMSCs+aprepitant组干性基因的表达水平较DRG+BMSCs组显着下降（P值<0.05）,但高于对照组（P值<0.05）。DRG来源的SP对于BMSCs自噬水平升高以及干性基因表达的上调具有重要作用。【结论】DRG和BMSCs组成的Transwell共培养体系中,DRG可通过激活AMPK/mTOR通路促进BMSCs自噬水平增强,进而维持或增强BMSCs的干性。在这一过程中,DRG产生的感觉神经肽SP起到重要作用。本研究对于揭示感觉神经促组织工程骨成骨体外细胞学机制具有重要意义。
施盛[8]（2018）在《Shh基因过表达的间充质干细胞在心肌梗死治疗中的疗效探究》文中研究说明背景:间充质干细胞（MSCs）是一类具有自我更新能力的细胞,在一定的诱导条件下它能够分化为脂肪细胞、成骨细胞、内皮细胞以及平滑肌细胞等多种细胞类型的多能干细胞,并能分泌多种生长因子诱导血管生成。这使得间充质干细胞在再生医学方面得到了广泛的关注。目前,利用干细胞移植技术治疗缺血性疾病是一个快速发展的领域,其安全性和有效性已经被不同的研究证实。MSCs治疗缺血性心肌病其原理是通过移植或动员干细胞进入缺血性的心肌组织,增加梗死区域心肌样细胞数量及毛细血管数量,逆转心脏重构,进而改善心功能。虽然MSCs向心肌细胞分化能力还存有争议,但MSCs向内皮细胞、平滑肌细胞或血管周细胞的分化能力已得到证实。血管生成能力的增强有助于增加血管数量,从而改善心脏功能。MSCs移植可以通过刺激血管生成来促进心肌的修复,是一种有前景的缺血性心脏病治疗的细胞类型。Hedgehog（Hh）蛋白是一种在胚胎发育过程中具有重要作用的成形素,它们控制着胚胎发育过程中不同的组织和器官的发育模式。VEGF信号通路是调节血管发育和内皮细胞分化的重要信号通路之一,VEGF诱导MSCs向内皮细胞分化的确切调控机制还未明确。Shh与多种血管生成因子相关,能促进VEGF的表达,参与血管的新生,对急性及慢性心肌缺血模型和缺血再灌注损伤模型有明显的治疗作用。Shh可以通过激活血管内皮生长因子（VEGF）和血管生成素促进血管生成,因此Shh可能是血管生成的关键调控分子之一,因此也被认为是增强血管生成较有前景的治疗分子。第一部分过表达Shh基因的大鼠BMSCs的构建目的:从大鼠中分离骨髓间充质干细胞,并利用慢病毒系统构建Shh过表达的MSCs细胞株。方法:首先从幼龄大鼠中分离骨髓间充质干细胞（BMSCs）,取传至第三代的细胞,流式细胞技术对表面相关标记分子进行检测。然后利用PCR扩增技术成功的克隆出了Shh基因,并利用慢病毒系统将Shh基因在BMSCs细胞中稳定过表达。结果:检测结果显示,CD90、CD29抗原在细胞表面高表达,MHC II和CD11b/c在细胞表面不表达,表明我们分离培养的细胞为骨髓间充质干细胞。RT-q PCR检测发现,MSCs中Shh m RNA的表达水平上调,且Shh m RNA表达水平在转染后3天和7天中增加了约3000倍和5000倍。结论:成功的从大鼠骨髓中分离出间充质干细胞,并成功的构建过表达Shh基因的MSCs细胞株。第二部分Shh基因促进BMSCs向内皮细胞分化能力的研究目的:体外实验验证过表达Shh基因后,对于MSC向内皮细胞分化的影响。方法:利用RT-q PCR分别检测Shh转染3天和7天后MSCs细胞中,促血管生成分子Ptch1、IGF1、HGF、Ang-1以及VEGF-A的表达水平,并在分别使用管样形成实验、Transwell迁移实验和体内胶栓实验,检测了MSCShh管样形成能力、细胞的迁移能力和向内皮细胞分化的能力。结果:过表达Shh后,MSCs细胞中促血管生成分子表达水平上调,MSCShh的管样形成能力、迁移能力和向内皮细胞分化的能力显着高于MSCNC对照组。而且转染后7天的MSCShh细胞的成管长度和节点数量以及向内皮细胞分化能力明显高于转染后3天的细胞。结论:过表达Shh基因后,MSCs中促血管生成生长因子的表达增加,体外迁移能力、成管能力增强以及血管新生的能力增强。第三部分过表达Shh基因的BMSCs治疗大鼠心肌梗死的疗效探究目的:大鼠心梗模型中验证过表达Shh基因后,MSC对心梗的修复效果。方法:将Shh过表达前后的MSC细胞,移植到大鼠心梗模型中。心超检测心功能的恢复情况,Masson染色观察纤维化心梗后的纤维化面积。结果:MSCNC以及MSCShh均能够修复心梗后的心功能,且向较于MSCNC组,MSCShh组的修复效果更加明显。结论:过表达Shh基因后,MSC细胞能更有效地减少梗死区域面积,改善心功能。第四部分Shh基因促进BMSCs的内皮细胞分化能力的机制探讨目的:进一步的研究探讨,过表达Shh基因的MSCs细胞向内皮分化的具体机制。方法:将MSCNC和MSCShh的进行高通量测序,并对测序结果进行初步分析,找出差异表达的基因,筛选靶基因。利用si RNA技术,将靶基因沉默后分别验证MSCNC细胞的成管能力和心梗修复的能力。结果:结果发现MSCShh中,VEGF-D等与血管生成相关的基因的表达远高于在MSCNC中的表达。特别是在过表达Shh后VEGF-D的表达水平明显上调,提示Shh分子可能通过促进VEGF-D的表达进而促进血管新生。并进一步分别在细胞水平和动物水平上对此进行验证。用si RNA抑制VEGF-D的表达后,MSCShh的成管能力下降,体内实验发现其心梗后的修复效果受到抑制。结论:Shh基因可以通过Shh/VEGF-D信号轴促进骨髓间充质干细胞的向内皮分化。
李平[9]（2018）在《HB-EGF在骨发育及骨代谢中的作用》文中进行了进一步梳理肝素结合表皮生长因子HB-EGF属于EGF超家族,它可以在蛋白酶的作用下形成可溶性形式,通过自分泌或旁分泌作用发挥功能。有报道称关节炎病人样本及关节手术造模鼠中HB-EGF表达升高,EGFR信号通路被激活。HB-EGF还可以通过调控成骨细胞相关基因表达促进破骨细胞的形成。本课题在前人研究基础上,使用Cre/lox P技术,构建了间质干细胞（MSC）、软骨细胞、破骨细胞中特异性过表达或敲除HB-EGF的突变体小鼠,系统研究HB-EGF在骨骼系统中的作用及潜在机制。我们发现在Dermo1标记的MSC中特异性敲除HB-EGF时,敲除鼠骨骼大小和关节软骨均无异常,而骨量及骨密度都有一定程度上升。相反,Dermo1标记的MSC中过表达HB-EGF,小鼠骨量及骨密度均显着下降,骨形成明显减弱且骨矿化不足。组织学研究发现,实验鼠关节严重畸形,关节膨大,关节软骨退化,关节软骨下有内生软骨瘤样结构。进一步分析还发现,生长板软骨增殖增加,关节软骨纤维化显着提高,并且Dermo1-HB-EGF小鼠脊柱软骨板也有软骨瘤样表型。与此同时,本研究发现MSC中过表达HB-EGF的小鼠中,破骨细胞的数量及分化并未受到影响。为了更全面的说明HB-EGF对骨代谢的作用,我们构建了在Ly M标记的破骨祖细胞中过表达HB-EGF的小鼠。实验鼠骨骼大小和生长板软骨均无异常,骨量及骨密度均无变化。实验鼠骨髓细胞体外破骨分化能力没有差别,这说明自分泌及旁分泌的HB-EGF对成骨-破骨之间的偶联及破骨细胞自身的调控都没有作用。通过分子生物学研究发现,HB-EGF通过激活EGFR信号下游的Erk及Akt信号通路促进MSC的增殖。另外,HB-EGF通过抑制BMP信号通路下游Smad1/5/8信号抑制MSC分化。EGFR信号通路的抑制剂AG1478对过表达小鼠软骨异常表型具有良好的挽救作用。综上所述,本研究首次发现并详细的分析了HB-EGF在小鼠骨骼发育及骨代谢中的作用。研究结果表明HB-EGF在MSC中无论敲除和过表达都会对成年之后骨代谢平衡产生影响,MSC中敲除HB-EGF不影响软骨的正常发育,相反HB-EGF的过表达却对关节及生长板的发育造成严重破坏,导致软骨发育缺陷和关节炎的发生。以上研究结果拓展了我们对关节炎的发生及内生软骨瘤的产生的认识,也为临床提供了新的检测指标和治疗策略。
赖满香[10]（2018）在《梓醇促进BMSCs增殖分化及Hedgehog信号通路的研究》文中提出目的骨质疏松（Osteoporosis,OP）是一种以骨强度下降,骨微观结构改变和骨脆性增加为特征的慢性全身性骨骼系统疾病,是生理衰老在骨骼方面的一种特殊表现。随着我国社会老龄化进程的加快和我国平均寿命的延长,OP的发病率不断上升,预计到2020年我国将成为世界上拥有OP患者最多的国家,因此,寻求其发病机理和安全有效的防治药物显得尤为重要。骨髓间充质干细胞（Bone mesenchymal stem cells,BMSCs）是来源于骨髓的一类多潜能成体干细胞,其向成骨细胞（Osteoblasts,OB）分化能力下降是造成OB生成不足,骨形成降低,发生OP的主要病机之一。中医学认为“肾藏精,主骨,生髓”,即骨髓由肾精所化生,肾精充足,骨髓生化有源,骨骼得养,则骨骼生长发育正常,强健有力,若肾精亏虚,则骨髓生化乏源,不能充养骨骼则致骨髓空虚,发为OP,这一理论与现代医学BMSCs向成骨分化能力下降造成OP的发生极其相似,因此,现代医学认为BMSCs可能是肾精在细胞水平上的表现形式,并多从补肾中药入手,寻找能够促进BMSCs的增殖及诱导其向成骨分化的有效药物,以促进骨的形成,延缓OP的发生。梓醇是传统补肾滋阴中药地黄的有效活性成分,研究表明,其对神经系统疾病,糖尿病、心血管疾病,骨质疏松等多种疾病均体现出一定的防治作用。本研究观察梓醇对BMSCs增殖、骨向分化的影响,以及观察它对分化相关的Hedgehog信号通路的影响,明确梓醇作用于BMSCs而影响防治OP的具体靶点,从一条新途径阐明梓醇对OP的调节机制,对评价梓醇防治OP的有效性提供细胞分子学依据,另一方面丰富中医学理论“肾藏精,主骨,生髓”理论的现代科学内涵,也为中医养生本草的现代研究提供实验依据。方法1.采用全骨髓贴壁法分离和培养BMSCs;2.通过倒置显微观察BMSCs形态学特性、电子显微镜观察BMSCs微观结构,CCK-8法检测BMSCs生长曲线,流式细胞仪检测BMSCs的细胞周期及细胞表面标志分子CD29、CD90、CD45、CD80,ALP染色和茜素红染色鉴定其成骨分化特性,油红O染色鉴定其成脂特性;3.CCK-8方法检测不同浓度梓醇（1×10T3mol/L～1×10-9mol/L）对BMSCs的增殖活性的影响;4.pNPP法检测不同浓度梓醇（1×10-3mol/L～1 ×10-9mol/L）对BMSCs碱性磷酸酶活性的影响,以确定梓醇最佳的促BMSCs骨向分化浓度;5.以最佳促骨向分化浓度的梓醇对BMSCs进行干预,实验分四组:对照组（control group）:BMSCs细胞以含15%胎牛血清的α-MEM完全培养液培养;梓醇组（catalpol group）:含15%胎牛血清的α-MEM完全培养液培养的BMSCs细胞中加入最佳浓度的梓醇;经典组（classic group）:BMSCs细胞中加含15%胎牛血清的成骨诱导液;联合组（combination group）:BMSCs细胞中加含15%胎牛血清的成骨诱导液+梓醇最佳作用浓度。6.ALP试剂盒检测各实验组对BMSCs ALP活性的影响,茜素红染色计数矿化结节的方法评价梓醇对BMSCs细胞矿化的影响,ELISA法检测梓醇对BMSCs BGP的影响;7.QPCR技术检测各实验组干预BMSCs骨向分化过程中Hedgehog信号分子Shh、IhhmRNA 的表达;8.Western blotting技术检测各实验组干预BMSCs骨向分化过程中Hedgehog信号传导通路中跨膜受体Ptch1、Smo蛋白的表达和下游核转录因子Gli1蛋白的表达。结果1.分离培养的细胞符合BMSCs的生物学特性,流式细胞仪检测大鼠BMSCs表面标志抗原CD90、CD29表达阳性,CD45及CD80表达阴性,BMSCs经诱导能向成骨细胞、脂肪细胞分化。2.CCK-8方法检测结果显示:细胞培养第1、3、5 d,1×10-3mol/L～1×10-9mol/L浓度范围的梓醇组OD值与空白组比较均有显着升高（P<0.05）;第7 d,1×10-4mol/L～1×10-9 mol/L梓醇组OD值与空白组比较均有显着升高（P<0.05）,而1×10-3mol/L梓醇组OD值与空白组无显着性差异（P>0.05）;第9 d,1 ×10mol/L～1 ×10-9 mol/L梓醇组OD值与空白组比较均有显着升高（P<0.05）,而1×10-3mol/L、1×10-4mol/L梓醇组OD值与空白组比较无显着性差异（P>0.05）;第 11 d,1×10-5mol/L 和 1×10-6mol/L 的梓醇组 OD 值与空白组比较显着升高（P<0.05）,其它各浓度梓醇组OD值无显着性差异（P>0.05）。3.pNPP法检测结果显示:第3、18、21 d,不同浓度的梓醇组的ALP活性与空白组相比均无显着性差异（P>0.05）;第6 d,1×10-4mol/L浓度的梓醇与空白组相比能显着提高 BMSCs ALP 活性（P<0.05）;第 9 d,1 × 1 0-3mol/L～1 × 1 0-5mol/L浓度的梓醇与空白组相比能显着提高BMSCs ALP活性（P<0.05）;第 12、15 d,1×10-3mol/L、1×10-4mo1/L 浓度的梓醇与空白组相比均能显着提高BMSCs ALP活性（P<0.05）,且以1×10-4mol/L作用最显着,故以1×10-4 mol/L的梓醇浓度为后续实验的最佳给药剂量。4.ALP试剂盒检测结果显示:梓醇组、经典组和联合组的ALP活性与对照组比较均显着升高（P<0.05）,但梓醇组的ALP活性低于经典组（P<0.05）,联合组的ALP活性与经典组比较均无显着差异（P>0.05）。5.茜素红染色计数结果显示:梓醇组、经典组和联合组的矿化结节数量与对照组比较显着升高（P<0.05）,但梓醇组的ALP矿化结节数量低于经典组（P<0.05）,联合组的矿化结节数量与经典组比较无显着差异（P>0.05）。6.ELISA法检测结果显示:梓醇组、经典组和联合组的BGP含量与对照组比较显着升高（P<0.05）,但梓醇组的BGP含量低于经典组（P<0.05）,联合组的BGP含量与经典组比较无显着差异（P>0.05）。7.QPCR检测结果显示:梓醇组、经典组和联合组的Shh mRNA表达与对照组比较显着升高（P<0.05）,梓醇组的Shh mRNA表达低于经典组（P<0.05）,联合组与经典组的Shh mRNA表达无显着差异（P>0.05）;梓醇组、经典组和联合组的Ihh mRNA表达与对照组比较均无显着差异（P>0.05）。8.Western blotting检测结果显示:梓醇组、经典组和联合组的Ptch1、Smo和Gli1蛋白表达与对照组比较显着升高（P<0.05）;梓醇组和联合组的Ptch1、Smo和Gli1蛋白表达均低于经典组（P<0.05）;梓醇组的Ptch1、Smo和Gli1蛋白表达与联合组无显着性差异（P>0.05）。结论1.采用全骨髓贴壁法可获得增殖能力强,纯度高的BMSCs;2.不同浓度的梓醇对BMSCs的增殖具有明显的促进作用;3.一定浓度范围（1 ×10-3～1 ×10-5mol/L）的梓醇可以诱导BMSCs向成骨分化,尤以1 × 10-4mol/L作用明显,并能提高BMSCs ALP活性、矿化结节数目和BGP的含量;4.梓醇促BMSCs的骨向分化过程中Hedgehog信号传导通路上游Ihh信号分子可能不参与调控;5.梓醇可通过上调Hedgehog信号传导通路中上游Shh信号分子、膜受体Ptch1、Smo和核转录因子Gli1来促进BMSCs的骨向分化,从而防治OP。
二、骨形成蛋白4诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力(英文)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、骨形成蛋白4诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力(英文)（论文提纲范文）
（2）Dkk-1/Wnt/β-catenin信号轴在酒精性股骨头坏死中的作用和机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英汉缩略词对照表 |
| 前言 |
| 第一章 Dkk-1 蛋白及Wnt信号通路在酒精暴露下的骨髓间充质干细胞中的表达变化 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 第二章 Dkk-1 蛋白及Wnt信号通路在大鼠酒精性股骨头坏死组织中的变化 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 本章小结 |
| 全文总结 |
| 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 酒精对干细胞影响的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文及获得的科研成果 |
（3）miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 人乳牙牙髓干细胞 |
| 1.2 人乳牙牙髓干细胞在神经疾病中的应用 |
| 1.3 miRNA在神经疾病发生的作用 |
| 1.4 miRNA调控神经增殖与分化 |
| 1.5 Wnt/β-catenin信号通路调控神经增殖与分化 |
| 第2章 miRNA-221 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达模式及作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制 |
| 2.1.2 主要实验方法 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 人乳牙牙髓干细胞的形态观察及鉴定 |
| 2.2.2 人乳牙牙髓干细胞体外神经元分化体系的建立 |
| 2.2.3 miR-221 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的表达规律 |
| 2.2.4 miR-221 促进人乳牙牙髓干细胞神经分化效率 |
| 2.3 讨论 |
| 第3章 miRNA-221 的靶基因确定 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制 |
| 3.1.2 主要实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 生物信息学分析预测miR-221 的靶基因是CHD8 |
| 3.2.2 双荧光素酶报告基因分析验证miR-221 的靶基因是CHD8 |
| 3.2.3 miR-221 抑制人乳牙牙髓干细胞CHD8 的表达 |
| 3.2.4 CHD8 在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中表达下调 |
| 3.3 讨论 |
| 第4章 miRNA-221 调控人乳牙牙髓干细胞Wnt/β-catenin通路的分子机制 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制 |
| 4.1.2 主要实验方法 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中Wnt/β-catenin通路特征蛋白表达上调 |
| 4.2.2 miR-221 通过抑制CHD8 激活人乳牙牙髓干细胞的Wnt/β-catenin通路 |
| 4.2.3 miR-221 通过激活Wnt/β-catenin通路提高人乳牙牙髓干细胞神经分化效率 |
| 4.3 讨论 |
| 第5章 miRNA-221 通过抑制CHD8 激活Wnt/β-catenin通路促进人乳牙牙髓干细胞神经分化 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验材料、实验试剂及相关试剂配制 |
| 5.1.2 主要实验方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.2.1 miR-221 通过抑制CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞增殖 |
| 5.2.2 miR-221 通过CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞周期由G0/G1向S期转变 |
| 5.2.3 miR-221 通过抑制CHD8 抑制人乳牙牙髓干细胞凋亡 |
| 5.2.4 miR-221 通过抑制CHD8 促进人乳牙牙髓干细胞神经分化效率 |
| 5.2.5 CHD8 通过Wnt/β-catenin通路调控人乳牙牙髓干细胞神经分化 |
| 5.3 讨论 |
| 第6章 讨论和结论 |
| 6.1 讨论 |
| 6.2 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间的研究成果 |
| 综述 人乳牙牙髓干细胞的研究进展及其调控机制 |
| 参考文献 |
（4）BMP-7基因转染BMSCs移植对大鼠脊髓损伤后神经元修复的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 主要英文缩略词汇表 |
| 前言 |
| 第一章 慢病毒载BMP-7 基因转染大鼠BMSCs诱导其向神经元样细胞分化的研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 实验动物 |
| 1.1.2 实验仪器 |
| 1.1.3 实验试剂 |
| 1.1.4 骨髓间充质干细胞的分离培养[22] |
| 1.1.5 骨髓间充质干细胞鉴定 |
| 1.1.6 最佳感染复数(MOI)检测 |
| 1.1.7 慢病毒转染后骨髓间充质干细胞存活情况 |
| 1.1.8 免疫组化检测神经元样细胞标记物NF-200、SYN1 表达情况 |
| 1.1.9 qRT-PCR检测神经元样细胞标记物NF-200、SYN1 mRNA表达情况 |
| 1.1.10 统计学方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 骨髓间充质干细胞培养形态特点 |
| 1.2.2 骨髓间充质干细胞鉴定结果 |
| 1.2.3 慢病毒转染情况 |
| 1.2.4 不同时间点骨髓间充质干细胞存活率 |
| 1.2.5 转染后细胞形态学变化 |
| 1.2.6 免疫组化检测神经元样细胞标记物NF-200、SYN1 表达情况 |
| 1.2.7 qRT-PCR检测神经元样细胞标记物NF-200、SYN1 mRNA表达情况 |
| 1.3 讨论 |
| 第二章 慢病毒载BMP-7 基因转染大鼠BMSCs移植治疗脊髓损伤的修复作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验仪器 |
| 2.1.3 实验试剂 |
| 2.1.4 制作脊髓损伤动物模型 |
| 2.1.5 慢病毒载BMP-7 基因转染BMSCs |
| 2.1.6 动物分组及治疗 |
| 2.1.7 行为学评估 |
| 2.1.8 脊髓组织标本获取 |
| 2.1.9 免疫组化检测脊髓NF-200、GFAP蛋白表达情况 |
| 2.1.10 qRT-PCR检测脊髓组织NF-200、GFAP mRNA表达情况 |
| 2.1.11 Western Blot检测脊髓组织NF-200、GFAP蛋白表达情况 |
| 2.1.12 统计学处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 BBB评分 |
| 2.2.2 免疫组化检测脊髓组织NF-200、GFAP蛋白表达情况 |
| 2.2.3 qRT-PCR检测脊髓组织NF-200、GFAP mRNA表达情况 |
| 2.2.4 Western Blot检测脊髓组织NF-200、GFAP表达情况 |
| 2.3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
| 附件 |
（5）马鹿茸多肽“补肾健骨”作用与机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 肽的分离与纯化 |
| 第一节 肽的分离与纯化 |
| 第二节 高效凝胶过滤色谱法测定马鹿茸多肽的分子量 |
| 第三节 SDS-PAGE法测定马鹿茸多肽分子量的分布 |
| 第二章 马鹿茸多肽对成骨细胞的增殖和分化的作用 |
| 第三章 马鹿茸多肽对骨髓间充质干细胞的增殖和骨向分化的作用 |
| 第一节 马鹿茸多肽对骨髓间充质干细胞的增殖和分化的作用 |
| 第二节 马鹿茸多肽促骨髓间充质干细胞骨向分化的机制研究 |
| 第四章 马鹿茸多肽对大鼠肾虚型骨质疏松症的作用 |
| 第五章 马鹿茸多肽A的组分研究 |
| 第一节 马鹿茸多肽A中的氨基酸的组分分析 |
| 第二节 HPL-MS测定马鹿茸多肽A的组分分析 |
| 第三节 马鹿茸多肽A的表面结构研究 |
| 第四节 马鹿茸多肽A的网络药理学研究 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述一 中药防治骨质疏松症的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 多肽类物质的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（6）脉冲电磁场激励骨髓间充质干细胞修复脊髓损伤的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 一、骨髓间充质干细胞分离和培养 |
| 1.1 对象和方法 |
| 1.1.1 实验材料和器械 |
| 1.1.2 实验方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 细胞形态观察 |
| 1.2.2 BMSCs细胞流式细胞仪鉴定 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 间充质干细胞的特点 |
| 1.3.2 骨髓间充质干细胞的分离和培养 |
| 1.3.3 骨髓间充质干细胞的应用 |
| 1.4 小结 |
| 二、PEMF激励BMSCs制备高活力种子细胞 |
| 2.1 对象和方法 |
| 2.1.1 实验材料 |
| 2.1.2 实验方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 选择最佳脉冲电磁场强度 |
| 2.2.2 观察干预后神经营养因子表达水平 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 脉冲电磁场在医学领域的应用 |
| 2.3.2 神经营养因子的生物学作用 |
| 2.4 小结 |
| 三、高活力BMSCs移植修复脊髓损伤的实验研究 |
| 3.1 对象和方法 |
| 3.1.1 实验材料 |
| 3.1.2 实验方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 行为学观察 |
| 3.2.2 组织学修复情况 |
| 3.2.3 WB检测结果 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 脊髓损伤的机制探讨 |
| 3.3.2 细胞移植治疗SCI相关机制 |
| 3.4 小结 |
| 四、高活力BMSCs移植修复脊髓损伤的机制研究 |
| 4.1 对象和方法 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 观察各组p75NTR-Trk蛋白表达水平 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 小结 |
| 全文结论 |
| 论文创新点 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 附录 |
| 综述 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（7）Transwell共培养体系中背根神经节对骨髓间充质干细胞的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 1.组织工程骨研究现状和制约因素 |
| 2.周围神经(尤其是感觉神经和交感神经)对骨组织生理病理过程的影响 |
| 3.感觉神经和交感神经在软骨生理和发育中的作用 |
| 4.感觉神经和交感神经在骨关节炎病理中的作用 |
| 5.骨组织中感觉神经和交感神经的支配 |
| 6.骨组织中感觉神经肽和儿茶酚胺及其受体对骨重建及骨代谢的作用 |
| 7.本课题组前期的研究基础 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器和器械 |
| 1.3 实验试剂 |
| 1.4 PCR引物 |
| 2 方法 |
| 2.1 GFP大鼠BMSCs的分离提取培养 |
| 2.2 SD大鼠籽鼠DRG的提取与处理 |
| 2.3 DRG与 GFP-BMSCs共培养的方法 |
| 2.4 流式细胞检测 |
| 2.5 BMSCs成骨诱导及茜素红染色 |
| 2.6 BMSCs成脂诱导和油红O染色 |
| 2.7 BMSCs成软骨诱导和阿利辛蓝染色 |
| 2.8 CCK8 检测细胞增殖 |
| 2.9 克隆形成实验(CFU) |
| 2.10 RT-PCR |
| 2.11 蛋白电泳检测(Western blot) |
| 2.12 免疫荧光染色及观察 |
| 2.13 透射电镜观察自噬变化 |
| 2.14 药物处理 |
| 2.15 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 绿色荧光BMSCs和背根神经节细胞的培养 |
| 3.2 GFP-BMSCs的鉴定 |
| 3.3 DRG与 BMSCs共培养对BMSCs黏附的影响 |
| 3.4 DRG与 BMSCs共培养促进BMSCs的增殖和三向分化潜能的维持 |
| 3.5 DRG与 BMSCs共培养促进BMSCs的克隆形成能力和干性基因的表达 |
| 3.6 DRG与 BMSCs共培养可提高BMSCs的自噬水平 |
| 3.7 共培养过程中BMSCs内 AMPK/mTOR信号通路被激活 |
| 3.8 Compound C可降低共培养体系中BMSCs的自噬水平和干性基因的表达量 |
| 3.9 Compound C单独作用对BMSCs自噬和干性基因表达无影响 |
| 3.10 NK1R特异性抑制剂阿瑞匹坦可降低共培养体系中BMSCs的自噬水平和干性基因表达量 |
| 4 讨论 |
| 4.1 共培养体系中DRG促进BMSCs的增殖与三向分化潜能的维持 |
| 4.2 共培养体系中BMSCs除成骨、成脂、成软骨分化潜能增强外,其他方向分化潜能也可能增强 |
| 4.3 共培养体系中DRG通过增强BMSCs自噬水平维持BMSCs干性 |
| 4.4 共培养体系中AMPK/mTOR信号通路介导了BMSCs自噬增强 |
| 4.5 共培养体系中DRG分泌的SP对 BMSCs自噬和干性维持起到重要作用 |
| 4.6 BMSCs旁分泌功能及共培养体系的中DRG与 BMSCs动态相互作用的观点 |
| 4.7 本研究对于组织工程骨构建的意义 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 研究成果 |
| 致谢 |
（8）Shh基因过表达的间充质干细胞在心肌梗死治疗中的疗效探究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 过表达Shh基因的大鼠BMSCs的构建 |
| 1.1 研究背景 |
| 1.2 材料和方法 |
| 1.3 实验结果 |
| 1.4 讨论 |
| 1.5 小结 |
| 第二部分 Shh基因促进BMSCs向内皮细胞分化能力的研究 |
| 2.1 研究背景 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三部分 过表达Shh基因的BMSCs治疗大鼠心肌梗死的疗效探究 |
| 3.1 研究背景 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四部分 Shh基因促进BMSCs的内皮细胞分化能力的机制探讨 |
| 4.1 研究背景 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 总结 |
| 参考文献 |
| 综述一 Shh信号通路在临床的潜在应用研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 间充质干细胞在心肌再生中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读博士期间主要科研成果 |
| 致谢 |
（9）HB-EGF在骨发育及骨代谢中的作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 研究背景 |
| 1.1 间充质干细胞 |
| 1.1.1 MSC的发现及定义 |
| 1.1.2 MSC的标记 |
| 1.2 MSC参与骨骼系统发育及代谢中的作用调控 |
| 1.2.1 成软骨分化 |
| 1.2.2 MSC成骨分化 |
| 1.3 骨重塑 |
| 1.3.1 骨重塑过程 |
| 1.3.2 促进破骨细胞形成因子 |
| 1.3.3 抑制破骨细胞的因子 |
| 1.4 关节炎相关信号通路 |
| 1.4.1 软骨细胞代谢与自噬 |
| 1.4.2 生长因子与软骨合成代谢及软骨下骨改变 |
| 1.4.3 炎症/氧化应激/血脂异常 |
| 1.5 EGFR信号通路 |
| 1.5.1 EGFR信号通路概述 |
| 1.5.2 EGFR信号在发育中的作用 |
| 1.6 HB-EGF的结构与功能 |
| 1.6.1 HB-EGF结构 |
| 1.6.2 HB-EGF生物学功能 |
| 1.7 研究内容及拟解决的科学问题 |
| 第二章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 常用实验试剂 |
| 2.1.2 常用试剂盒 |
| 2.1.3 细胞因子及抑制剂 |
| 2.1.4 抗体 |
| 2.1.5 实验中使用的仪器及耗材 |
| 2.1.6 实验小鼠 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验小鼠繁殖及鉴定 |
| 2.2.2 荧光实时定量PCR |
| 2.2.3 蛋白质免疫印迹 |
| 2.2.4 细胞生物学相关方法 |
| 2.2.5 组织形态学实验 |
| 2.2.6 流式分析 |
| 2.2.7 统计学处理与分析 |
| 第三章 实验结果及分析 |
| 3.1 Dermo1+ MSC中过表达HB-EGF的小鼠出现明显生长缺陷 |
| 3.1.1 Dermo1-Cre;td Tomato在骨骼中的表达谱 |
| 3.1.2 HB-EGF在MSC及分化细胞中的表达 |
| 3.1.3 Dermo1-HB-EGF小鼠软骨发育异常 |
| 3.1.4 Dermo1-HB-EGF小鼠软骨增殖增加,分化抑制 |
| 3.1.5 Dermo1-HB-EGF小鼠骨代谢异常 |
| 3.2 过表达HB-EGF对破骨细胞不产生影响 |
| 3.2.1 Dermo1-HB-EGF小鼠破骨细胞形成能力及骨吸收能力表现正常 |
| 3.2.2 在破骨祖细胞中过表达HB-EGF并不影响骨吸收 |
| 3.3 MSC中敲除HB-EGF对于骨骼发育的影响 |
| 3.4 软骨细胞中过表达HB-EGF小鼠表型分析 |
| 3.5 HB-EGF调控骨骼发育的机制 |
| 3.5.1 EGFR抑制剂AG1478可以挽救Dermo1-HB-EGF小鼠的骨骼表型 |
| 3.5.2 HB-EGF调控MSC增殖及多向分化潜能 |
| 3.6 其他标记MSC类群中过表达HB-EGF小鼠表型分析 |
| 3.6.1 Prx1在骨中的谱系表达情况 |
| 3.6.2 Prx1-HB-EGF小鼠的骨表型分析 |
| 第四章 讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 |
（10）梓醇促进BMSCs增殖分化及Hedgehog信号通路的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 引言 |
| 研究背景 |
| 1 骨质疏松的研究进展 |
| 2 BMSCs成骨分化的研究进展 |
| 3 Hedgehog信号转导通路 |
| 4 中医理论对BMSCs成骨分化与“肾主骨生髓”理论相关性的认识 |
| 5 补肾中药促进BMSCs成骨分化的研究进展 |
| 6 地黄和梓醇的研究进展 |
| 实验一 SD大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 实验二 梓醇对BMSCs增殖及骨向分化的影响 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 实验三 梓醇对BMSCs骨向分化过程中Hedgehog信号通路的影响 |
| 1 研究目的 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
四、骨形成蛋白4诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元的能力(英文)（论文参考文献）
- [1]淫羊藿调控骨髓间充质干细胞分化防治骨质疏松的相关信号通路[J]. 黄为,董盼锋,黄有荣,夏天. 中国组织工程研究, 2022
- [2]Dkk-1/Wnt/β-catenin信号轴在酒精性股骨头坏死中的作用和机制研究[D]. 杨埜. 右江民族医学院, 2020(03)
- [3]miR-221在人乳牙牙髓干细胞神经分化过程中的作用及机制研究[D]. 文冰. 南昌大学, 2020
- [4]BMP-7基因转染BMSCs移植对大鼠脊髓损伤后神经元修复的初步研究[D]. 张文. 石河子大学, 2020(08)
- [5]马鹿茸多肽“补肾健骨”作用与机制研究[D]. 任聪. 辽宁中医药大学, 2019(01)
- [6]脉冲电磁场激励骨髓间充质干细胞修复脊髓损伤的实验研究[D]. 李玉琳. 天津医科大学, 2019(02)
- [7]Transwell共培养体系中背根神经节对骨髓间充质干细胞的作用及其机制研究[D]. 张帅帅. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [8]Shh基因过表达的间充质干细胞在心肌梗死治疗中的疗效探究[D]. 施盛. 苏州大学, 2018(06)
- [9]HB-EGF在骨发育及骨代谢中的作用[D]. 李平. 上海交通大学, 2018(01)
- [10]梓醇促进BMSCs增殖分化及Hedgehog信号通路的研究[D]. 赖满香. 广州中医药大学, 2018(08)