一、脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1对组织Toll样受体2基因表达的影响（论文文献综述）
梁萌[1]（2021）在《HMGB1调控小胶质细胞活化在血管性认知障碍中的作用及机制研究》文中认为研究目的:血管性认知障碍（Vascular cognitive impairment,VCI）是排名第二位的认知障碍类型,患病率仅次于阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）。2016年制订的《中国血管性认知障碍诊疗规范》中将VCI定义为由脑血管病危险因素、显性脑血管病或非显性脑血管病所引起的一组从轻度认知损害到痴呆的临床综合症。既往研究表明,脑白质损伤是VCI重要的病理机制。缺血引起脑内小胶质细胞活化并释放各种促炎介质,引起脑内炎症反应,是造成髓鞘损伤的重要原因。高迁移率组蛋白1（High-mobility group box 1,HMGB1）是一种广泛存在于真核细胞核内的非组蛋白DNA结合蛋白。病理状态下,其可由神经元或胶质细胞经主动或被动方式释放至胞外,作为一种危险相关模式分子（Danger-associated molecular patterns,DAMP）参与诱导免疫细胞激活并引起炎症反应。与免疫细胞表面受体结合和后,HMGB1可主要通过多条细胞内信号通路激活核转录因子κB（Nuclear Factor-Kappa B,NF-κB）,最终增加促炎因子的合成及释放并引起炎症反应。本研究将就HMGB1在VCI的病理机制中的作用以及潜在的细胞通路展开研究。研究方法:收集VCI患者血清标本并检测HMGB1等炎症因子水平,通过与健康对照比较,观察HMGB1是否与VCI发生相关。通过在双侧颈总动脉结扎（Bilateral Common Carotid Artery Occlusion,BCCAO）法构建的VCI模型动物中拮抗HMGB1,以及通过向健康小鼠侧脑室内注射HMGB1,探索HMGB1参与VCI发病的病理机制。提取并培养小鼠原代小胶质细胞,探索HMGB1诱导小胶质细胞活化的细胞内通路。结果:第一部分研究结果发现,与认知功能正常的社区老年患者相比,VCI患者中高血压、冠心病、糖尿病的患病率及既往有脑卒中患病史的比例显着升高。对两组人群的实验室检查结果进行分析发现,与对照组相比,VCI患者外周血红细胞计数、血红蛋白浓度、血小板计数、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量较低,而中性粒细胞百分比和空腹静脉血糖含量较高。对比两组人群的血清炎症因子含量发现,VCI组患者血清中HMGB1、p Src、IL1-β、IL-6及TNFα水平较对照组均显着升高。第二部分研究结果发现,VCI小鼠认知功能损伤与海马区小胶质细胞活化及少突胶质细胞成熟障碍密切相关,而上述病理改变与HMGB1表达增高有关。给予HMGB1特异性拮抗剂甘草酸后,VCI小鼠海马区HMGB1含量显着降低,同时小胶质细胞活化减少且少突胶质细胞成熟增多,海马区髓鞘损伤改善,并且小鼠的抑郁样行为及认知功能损伤也明显好转。第三部分研究结果发现,向健康小鼠侧脑室内注射重组HMGB1可引起小鼠认知功能下降及出现抑郁样行为,而上述现象的发生与HMGB1引起小鼠海马小胶质细胞激活及髓鞘损伤有关。第四部分研究结果发现,首先,VCI小鼠中Src和NFκB磷酸化表达增多,提示两者活性均增加,给予甘草酸拮抗HMGB1后,两者活性降低,表明VCI小鼠海马中Src和NFκB活性与HMGB1表达水平相关。其次,通过对健康小鼠侧脑室注射HMGB1,其海马HMGB1相关通路蛋白Src和NFκB磷酸化表达增多。给予小鼠腹腔注射Src拮抗剂PP2,观察发现,PP2改善了HMGB1引起的小鼠认知功能下降及抑郁样行为,并且部分改善了海马小胶质细胞过度活化及髓鞘损伤,对小鼠海马蛋白表达水平检测也发现,Src和NFκB磷酸化表达减少,表明其活性降低。此外,通过使用重组HMGB1直接刺激小鼠原代小胶质细胞我们发现,HMGB1可引起小鼠小胶质细胞向M1型活化,给予Src拮抗剂PP2预处理可逆转上述效应。以上研究结果表明,HMGB1通过激活小胶质细胞内Src-NFκB通路,使其向M1型活化,从而引起了中枢髓鞘损伤,最终导致小鼠情绪及认知功能受损。结论:以上研究结果表明,HMGB1与VCI的病理机制密切相关。胞外HMGB1与小胶质细胞表面受体结合后,通过激活Src-NFκB通路诱导小胶质细胞向M1型活化,引起中枢炎症反应并造成少突胶质细胞受损及髓鞘损伤,参与了VCI的病理机制。
薛鑫[2]（2020）在《HMGB1在神经干细胞迁移和脊髓损伤修复中的作用及机制研究》文中指出脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）是一种对神经系统具有严重破坏性的疾病,发病人群主要集中在青壮年,不仅给病患本人带来巨大的身体创伤和情感代价,也给社会和家庭带来了严重经济负担,是一个亟待解决的公共卫生难题。面对脊髓损伤,当前临床治疗方法主要是早期手术解除压迫、稳定脊柱结构、脱水抗炎、予以神经营养支持和针对性的康复训练等,但是治疗后病患仍会遗留严重的神经功能障碍。因SCI后神经环路受到破坏、缺血缺氧、炎症反应、脱髓鞘病变、胶质瘢痕形成等诸多不利于神经再生和修复条件限制,使其成为现代脊柱外科领域最为难治的疾患之一。神经干细胞（neural stem cells,NSCs）是一类具有自我更新和分化能力的多潜能细胞,存在于成年哺乳动物的大脑中侧脑室下区（SVZ区）和海齿状回颗粒下区（SGZ区）,在哺乳动物终身的神经发育和修复中起到至关重要的作用。中枢神经系统（central nervous system,CNS）发生损伤后SVZ区的NSCs激活后大量增殖,并且能够迁移到损伤区域分化为功能神经元,整合于受损的神经回路从而促进神经功能恢复。尽管既往研究证实了NSCs对于神经修复和再生的作用,但是NSCs的增殖和定向迁移到损伤灶的能力有限,并且损伤区域不良外界环境限制了其神经修复作用。因此,针对NSCs这一特殊的细胞群体,研究促进其迁移能力的方法及潜在机制具有重大的基础和临床意义。高迁移率族蛋白B1（high mobility group box protein 1,HMGB1）是HMG家族中存在最为广泛的蛋白成员,HMGB1因参与机体的炎症反应而被熟知,同时研究发现其在细胞的迁移、免疫识别、维持炎症作用等方面都起着关键作用。在CNS疾病中,发现HMGB1可以促进神经母细胞分化为神经元,从而促进神经功能修复,但其对神经干细胞的迁移作用未见相关研究。同时,移植NSCs可以通过自我更新、神经保护、自分泌、再髓鞘化等作用参与脊髓损伤后的神经修复,是一种新的脊髓损伤修复策略,但是移植后的NSCs只有极少数能够分化为功能性的神经元,大部分细胞因诸多外界限制而丧失迁移和分化能力。为了避免这种情况,需要新的方法提高移植后NSCs迁移数量及存活率,保证其神经修复效果。为验证HMGB1对于NSCs迁移和脊髓损伤后修复作用和机制,本研究通过提取和培养NSCs为基础,建立脊髓损伤动物模型,阐明HMGB1对与NSCs迁移及其对脊髓损伤后修复作用和可能机制。具体研究内容如下:一、高迁移率族蛋白B1对神经干细胞迁移中的作用及机制研究目的通过体外培养神经干细胞,建立HMGB1浓度梯度,研究不同浓度HMGB1对NSCs迁移和增殖的影响,采用Western blotting、Transwell、免疫荧光等方法验证HMGB1对NSCs迁移影响及机制。方法第一部分研究提取小鼠脑皮质来源的神经干细胞,所培养的细胞鉴定NSCs标志物Nestin和Sox2的表达,分化培养后鉴定其GFAP、Olig2和DCX的表达;设置分组为:对照组、0.01 ng/ml HMGB1组、0.1 ng/ml HMGB1组、1 ng/ml HMGB1组、10 ng/ml HMGB1组,利用CKK-8法和显微镜下观察测定Neurospheres的直径检测不同浓度HMGB1对于NSCs增殖的影响;Transwell实验观察HMGB1对于NSCs迁移的作用,倒置相差显微镜观察测定HMGB1干预后Neurospheres向外迁移的细胞数目和距离;免疫荧光和Western Blotting分析HMGB1对于NSCs中RAGE表达的影响;通过Phalliodin和tubulin观察HMGB1对于NSCs丝状伪足形成影响和形态变化;使用RAGE拮抗剂FPS-ZM1和RAGE si RNA,探究HMGB1/RAGE对于NSCs迁移的作用机制。结果（1）体外培养的脑皮质来源的细胞,免疫荧光染色结果提示大部分细胞Nestin表达阳性和Sox2阳性,经分化培养后细胞GFAP表达阳性、Olig2表达阳性和DCX表达阳性。提示培养细胞为NSCs,其具有干性特性和分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的多向分化潜能;（2）1 ng/ml HMGB1组、10 ng/ml HMGB1组在450 nm吸光度值和Neurospheres直径明显高于其他各组。提示HMGB1能够呈浓度依赖性促进NSCs的增殖;（3）通过Transwell实验及显微镜观察HMGB1干预后NSCs的迁移距离和细胞数目。1 ng/ml HMGB1组神经干细胞球中NSCs迁移数目和距离增加。提示HMGB1能够促进NCSs的迁移;（4）1 ng/ml HMGB1可促进神经干细胞Filopodia形成和升高RAGE表达而促进神经干细胞迁移;（5）HMGB1/RAGE信号通路在1 ng/ml HMGB1介导神经干细胞迁移中具有重要作用。结论1 ng/ml HMGB1可通过促进丝状伪足形成促进神经干细胞迁移;同时,HMGB1/RAGE信号通路在其中具有重要作用。二、高迁移率族蛋白B1对脊髓损伤修复的作用及机制研究目的通过体外培养神经干细胞,建立大鼠脊髓损伤模型,通过移植HMGB1预处理后的NSCs研究其对脊髓损伤后的修复作用,采用Western blotting和免疫荧光方法研究HMGB1对脊髓损伤后修复影响的可能机制。方法本部分研究提取并培养大鼠脑皮质来源的神经干细胞,建立大鼠脊髓损伤模型,移植HMGB1预先处理后的NSCs,使用大鼠BBB评分、机械痛觉测定、冷/热板温觉测定装置评价移植后SCI大鼠运动和感觉功能恢复情况,HE染色和Nissl染色对HMGB1预处理NSCs移植后SCI大鼠损伤区域的神经元和组织结构进行观察,WB和免疫荧光初步研究其促进功能恢复原因和相关机制。结果（1）通过成功构建大鼠SCI模型,使用大鼠BBB评分、机械痛觉测定、冷/热板温觉测定装置进行对照组、NSCs组、HMGB1-NSCs组对SCI模型大鼠的运动和感觉功能恢复评分,在大鼠SCI术后第21天,HMGB1-NSCs组BBB评分、机械痛觉测定评分、冷/热板温觉测定评分都明显优于对照组、NSCs组,提示HMGB1预处理NSCs移植后能够促进SCI模型大鼠运动和感觉功能恢复;（2）取大鼠SCI术后第21天脊髓标本,对脊髓组织切片进行HE染色和Nissl染色,HMGB1-NSCs组相比于对照组、NSCs组损伤面积更小,组织结构更完整和功能性Nissl小体数目更多。提示移植HMGB1预处理后的NSCs能提高SCI模型大鼠的局部神经组织结构重塑水平及残存神经元数目;（3）运用Western blotting和免疫荧光法测定对照组、NSCs组、HMGB1-NSCs组SCI大鼠脊髓损伤区域神经元标记物βIII-tubulin的表达量,HMGB1-NSCs组多于对照组、NSCs组。提示:移植HMGB1预处理神经干细胞可促进脊髓损伤区域的神经元存活;（4）运用Western blotting和免疫荧光法测定NSCs组、HMGB1-NSCs组、HMGB1-NSCs+U0126组βIII-tubulin和ERK表达水平,HMGB1-NSCs组表达增高。提示:HMGB1能够通过ERK信号通路调控NSCs分化。结论移植HMGB1预处理后的NSCs,可促进大鼠脊髓损伤后的神经功能恢复,其作用可能是通过减轻局部损伤和增加局部神经元数量实现,其中增加的神经元数量可能来源于移植的NSCs促进损伤区域神经元的存活及促进移植的NSCs向神经元分化,而其潜在机制可能与激活ERK信号通路相关。
赵妍[3]（2019）在《黄龙汤联合美罗培南对CLP模型大鼠抗炎作用机制研究》文中研究说明目的:观察黄龙汤联合美罗培南对脓毒症模型大鼠的抗炎作用,通过对各组大鼠近回盲部回肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB、PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平的检测,探讨黄龙汤联合美罗培南对脓毒症大鼠回肠TLR4/NF-κB和PI3K/Akt信号通路的调控作用,阐述黄龙汤联合美罗培南对脓毒症模型大鼠的抗炎作用机制。材料与方法:雄性SPF级SD大白鼠70只,200±20g,购自辽宁长生生物科技有限公司,实验动物生产许可证号:SCXK（辽）2010-0001。实验动物购入后,饲养于辽宁中医药大学实验动物中心SPF级动物室内,许可证号:SYXK（辽）2013-0009。常规颗粒饲料喂养,自由食水,12小时昼夜节律。大鼠购入后,适应性饲养一周,观察其状态良好,对周围环境完全熟悉,活动度良好后,开始正式实验。黄龙汤中药饮片,购自辽宁中医药大学附属医院药局。注射用美罗培南,石药集团中诺药业（石家庄）有限公司生产。70只大鼠,随机抽取10只作为假手术组,剩余60只行盲肠结扎穿孔术,模型复制后,再次随机分为模型对照组,西药组,黄龙汤联合西药组,共计四组。大鼠称量体重后,经腹腔注射10%水合氯醛溶液,3ml/kg体重,待大鼠深度麻醉后,左侧腹部平3-4腰椎旁开0.8cm处剪毛,俯卧位固定于手术台,去毛处碘伏常规消毒后,纵向切口1cm,逐层钝性分离,直至腹腔,组织镊探查,找到盲肠尖,小心移至切口处,距离盲肠尖1cm处结扎盲肠,并于盲肠尖部以7号针头不重复刺穿盲肠3次,挤压盲肠,另少许盲肠内容物溢出,盲肠归位,逐层缝合肌层及皮肤层,碘伏消毒。假手术组大鼠术式同上,但不做盲肠结扎和穿孔。术后24小时,于假手术大鼠和盲肠结扎穿孔术大鼠中各随机抽取2只,断髓处死,取近回盲部3cm处的回肠组织,浸泡于4%多聚甲醛溶液中固定,次日取出制备石蜡切片,HE染色法观察回肠病理改变,判断模型是否复制成功。假手术组:正常饲养,不作处理。术后次日,模型复制成功后,假手术组大鼠正常饲养,不做处理;模型对照组大鼠经口灌胃蒸馏水,2ml/次·只-1,同时经腹腔注射生理盐水,1ml/次·只-1,每日2次,连续4天;西药组大鼠经腹腔注射美罗培南注射液,1ml/次·只-1,每日2次,连续4天;黄龙汤联合西药组大鼠经口灌胃黄龙汤,2ml/次·只-1,同时经腹腔注射美罗培南注射液,1ml/次·只-1,每日2次,连续4天。末次给药后1小时,将大鼠以10%水合氯醛经腹腔注射麻醉,剖开腹腔,腹主动脉穿刺采集全血5ml至促凝管中,室温静置1小时,2000转/分,离心10分钟,分离上清液用于检测IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量。各组大鼠取血后,于近回盲部3cm处截取回肠组织2cm,预冷PBS缓冲液洗净后,冻存于2ml冻存管中,用于检测回肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量和TLR4、MyD88、NF-κB的表达水平。另取回肠组织2cm,浸泡于4%多聚甲醛溶液中,用于免疫组织化学法检测回肠组织中PI3K、Akt、p-Akt的表达水平。自CLP模型复制后,每日观察大鼠一般状态,末次给药后,采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测各组大鼠血清、回肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量;采用western-blot法检测回肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB的表达水平;采用免疫组织化学法检测回肠组织中PI3K、Akt、p-Akt的表达水平。结果:1.模型评价:假手术组CLP术后大鼠近回盲部回肠组织HE染色结果显示:假手术组大鼠黏膜层完好,尤其是上皮层,未见受损改变,黏膜下层未见炎性细胞浸润情况。CLP术大鼠回肠HE染色镜下可见上皮层变性、脱落,肠绒毛排列紊乱,甚至发生融解或缺失,黏膜下层有大量的炎性细胞浸润,浆膜层也可见炎性细胞,偶见坏死灶一般状态观察2.一般状态观察:CLP术后,意外死亡3只,完全苏醒后,饲养至次日,期间死亡12只,次日随机抽取2只进行模型评价,剩余CLP术后大鼠43只,随机分为三组,模型对照组15只,西药组14只,黄龙汤联合西药组14只。干预期间,模型对照组大鼠死亡7只,西药组死亡6只,黄龙汤联合西药组死亡5只。假手术组未见死亡,随机抽取2只进行模型评价。末次给药后,假手术组大鼠伤口愈合良好,毛色洁白,富有光泽,活动度良好,食水量正常。模型对照组大鼠状态最差,毛色枯槁,蜷缩聚堆于鼠笼角落,活动度极少,进水进食量急剧减少。西药组和黄龙汤联合西药组大鼠状态明显好于模型对照组,未见大鼠聚堆现象,但活动度明显较假手术组差,伤口愈合情况尚可。3.各组大鼠血清及回肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量检测结果显示:与假手术组比较,其余三组大鼠血清及回肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均显着升高（p<0.01）,有统计学差异;与模型对照组比较,西药组和黄龙汤联合西药组大鼠血清及回肠组织IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均显着降低（p<0.01）,有统计学差异;与西药组比较,黄龙汤联合西药组大鼠血清及回肠组织IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8含量均显着降低（p<0.01）,有统计学差异。4.各组大鼠回肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达水平检测结果显示:与假手术组比较,模型对照组大鼠回肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达水平显着上调,有统计学差异（p<0.01）;与模型对照组比较,西药组、黄龙汤联合西药组大鼠回肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达水平显着下调,有统计学差异（p<0.01）;与西药组比较,黄龙汤联合西药组大鼠回肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB表达水平显着下调,有统计学差异（p<0.01）。5.各组大鼠回肠组织中PI3K、Akt、p-Akt表达水平检测结果显示:与假手术组比较,模型对照组大鼠回肠组织中PI3K、Akt、p-Akt表达水平显着上调,有统计学差异（p<0.01）;与模型对照组比较,西药组、黄龙汤联合西药组大鼠回肠组织中PI3K、Akt、p-Akt表达水平显着下调,有统计学差异（p<0.01）;与西药组比较,黄龙汤联合西药组大鼠回肠组织中PI3K、Akt、p-Akt表达水平显着下调,有统计学差异（p<0.01）。结论:1.大鼠盲肠穿孔术能够引发全身较为严重的炎症反应,与临床脓毒症的发生过程及其相似,可用于脓毒症发病机制及药物疗效观察等相关研究对象。2.黄龙汤联合美罗培南对CLP模型大鼠血清及回肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8的含量。3.黄龙汤联合美罗培南对CLP模型大鼠的抗炎作用可能通过抑制血清及感染灶局部IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8的水平而实现的。4.黄龙汤联合美罗培南能够下调脓毒症模型大鼠回肠组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达水平。5.黄龙汤联合美罗培南对脓毒症模型大鼠的抗炎作用可能是通过抑制TLR4/NF-κB信号通路的过度活化而实现的。6.黄龙汤联合美罗培南能够下调脓毒症模型大鼠回肠组织中PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达水平。7.黄龙汤联合美罗培南对脓毒症模型大鼠的抗炎作用可能是通过抑制PI3K/Akt/NF-κB信号通路的活化而实现的。
杜诗涵[4]（2019）在《p38MAPK信号通路介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞模型中线粒体融合蛋白的影响》文中研究指明脓毒症是由宿主对感染的反应失调引起的一种危机生命的器官功能障碍,每年会影响全世界数百万人且病死率高达25%,已成为引起死亡的十大病因之一[1,2]。过度的氧化应激及炎性反应被认为是脓毒症所致多器官功能障碍的重要原因,其中肺脏是脓毒症中最易受损的靶器官之一[3]。而在脓毒症肺损伤所涉及的靶细胞中,肺泡上皮细胞是重要的靶效应细胞,肺泡中性粒细胞（PMN）、肺泡巨噬细胞等炎性细胞会粘附于肺泡上皮细胞表面并释放大量活性氧（ROS）以及其他炎性介质使肺泡上皮细胞受损,从而破坏肺内机械屏障,导致大量炎性因子涌入,进而加重肺损伤[4,5]。线粒体是细胞内重要的细胞器,除了能够产生ATP外,还在细胞程序性死亡的调控、免疫炎性反应、钙信号传递以及脂肪酸氧化中发挥重要作用[6]。同时,线粒体作为一种动态的细胞器,能通过线粒体动力学作用改变其在细胞内的大小、形状、位置和功能,氧自由基作用在线粒体会致使线粒体融合减少,影响线粒体功能,进而会损害细胞的长期生存能力[7]。在哺乳动物中,调节线粒体融合的蛋白包括线粒体融合蛋白1（mitofusin,Mfn1）、线粒体融合蛋白2（mitofusin,Mfn2）和视神经萎缩蛋白1（optic atrophy protein 1,OPA1）,其中Mfn1、2是定位于线粒体外膜的蛋白而OPA1定位于线粒体内膜[8]。研究表明,在培养的细胞和小鼠组织中,融合蛋白的缺失会导致线粒体网络严重断裂,线粒体与线粒体之间的物质交换被终止,线粒体DNA含量显着下降,Mfn1和Mfn2功能的丧失导致线粒体代谢功能改变、膜电位丧失并降低线粒体呼吸功能,敲除OPA1会使线粒体膜电位广泛丧失并减少基础呼吸速率[8,9]。血红素加氧酶-1（HO-1）是一种由ROS和细胞因子诱导的应激反应酶,能够催化血红素降解为一氧化碳、胆绿素和游离铁,在抑制和调节机体组织器官炎症、氧化应激、凋亡和增殖过程中发挥着重要作用[10]。我们前期的研究表明,在LPS攻击大鼠模型中,HO-1上调可促进线粒体融合,但其机制尚不明确[11,12]。p38MAPK作为丝裂原活化蛋白激酶亚族之一是信息转导的纽带,可以被细胞外的炎性刺激等因素激活,激活后的p38MAPK通路可调动机体内源性抗炎能力,诱导细胞HO-1表达,调节细胞衰老、凋亡、细胞炎症及其氧化应激,在减轻急性肺损伤的炎性反应中发挥着重要的作用[13,14]。目前尚无p38MAPK介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡II型上皮细胞中线粒体融合影响的相关报道。目的探讨p38分裂原激活蛋白激酶（p38MAPK）介导血红素加氧酶1（HO-1）表达对脂多糖（LPS）攻击大鼠肺泡II型上皮细胞中线粒体融合的作用。方法将大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞以1x106个/ml密度接种于6孔板。采用随机数字表法分为7组:空白对照组（C组）、LPS攻击模型组（L组）、LPS+CO释放剂CORM-2组（LC组）、LPS+p38MAPK抑制剂SB203580组（LS组）、LPS+DMSO组（LD组）、CORM-2组（CO组）和SB203580组（S组）。C组正常培养细胞;L组给予10μg/ml LPS;LC组于加入LPS前30 min给予CORM-2100μM;LS组和LD组于加入LPS前1 h分别给予SB203580 10μM和0.1%DMSO 100μM;CO组、S组分别加入CORM-2 100μM、SB203580 10μM。细胞孵育24 h后,采用MTT法检测细胞活力、硫代巴比妥酸法测定培养液丙二醛（Malondialdehyde,MDA）含量、黄嘌呤氧化酶法测定培养液（Superoxide Dismutase,SOD）活性,采用ELISA法测定细胞上清液肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）的水平,采用Western blot法测定p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38MAPK）、血红素加氧酶-1（HO-1）、线粒体融合蛋白1（Mfn1）、线粒体融合蛋白2（Mfn2）和视神经萎缩蛋白1（OPA1）的表达水平。结果与C组、CO组、S组相比,其余各组MDA含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-6水平升高,细胞活力降低,p-p38和HO-1表达上调,Mfn1、Mfn2、OPA1表达下调（P<0.05）;与L组相比,LC组MDA含量降低,SOD活性升高,TNF-α、IL-6水平降低,细胞活力升高,p-p38、HO-1、Mfn1、Mfn2和OPA1表达上调（P<0.05）,而LS组MDA含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-6水平升高,细胞活力降低,p-p38、HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1表达下调（P<0.05）;与LC组相比,LS组MDA含量升高,SOD活性降低,TNF-α、IL-6水平升高,细胞活力降低,p-p38、HO-1、Mfn1、Mfn2、OPA1表达下调（P<0.05）。且C组、CO组、S组间,L组和LD组间上述各指标比较差异无统计学意义（P>0.05）,各组间总p38蛋白表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。结论HO-1可促进LPS攻击大鼠肺泡II型上皮细胞中线粒体融合,其机制可能与p38MAPK信号通路有关。
黑悦[5]（2019）在《慢性脑低灌注大鼠海马CA1区神经元损伤分子机制及MSCs源性外泌体对其调控作用研究》文中提出大鼠永久性的双侧颈总动脉闭塞（bilateral occlusion of the common carotid artereis,2VO）建立的慢性脑低灌注（chronic cerebral hypoperfusion,CCH）模型是目前最为广泛应用血管源性痴呆与认知障碍模型,CCH模型中神经元保护（尤其在海马区域）成为了重要的改善认知能力的手段。我们和国内外其他团队的先前研究发现神经调节蛋白1（Neuregulin1,NRG1）以及其主要的受体酪氨酸激酶ErbB4信号系统的功能障碍可导致如神经元凋亡等直接神经元损伤;再者,据报道高迁移率族蛋白1（High mobility group box-1,HMGB1）激活后作为一种重要的促炎性信号分子在CCH模型中参与了神经炎性反应引起的间接（延迟/二次）神经元损伤。这些信号系统的表达模式以及调控对CCH动物模型的影响尚未有系统研究。另外,国内外包括我们的前期研究证实间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）以及间充质干细胞源性外泌体（MSCs-derived exosomes,MSC-exo）具有明显的免疫调控和神经保护功能,相比单纯细胞治疗,MSC-Exo易于透过血脑屏障,规避细胞致瘤风险,方便冻融保存（-20℃）等等,综合提示MSC-Exo可能成为临床更理想的神经保护剂。本研究在此基础上,进一步探究了与神经保护相关的信号机制（NRG1/ErbB4和HMGB1信号系统）,并初步探讨了MSC-exo对CCH模型的宏观治疗作用以及对以上信号系统的调控作用。具体分为以下三部分:内容一:NRG1/ErbB4信号系统功能障碍介导的直接神经元损伤及其调控实验一:CCH模型中NRG1/ErbB4的表达与神经元凋亡相关性分析目的:本研究旨在探讨2VO诱导的CCH大鼠模型海马区域NRG1/ErbB4的变化及其与神经元凋亡的相关性。方法:采用SD大鼠2VO手术构建CCH大鼠模型。Morris水迷宫（Morris water maze,MWM）以及NeuN染色用于观察2VO大鼠造模后的海马依赖性认知功能和CA1区域神经元损伤,而酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹（Western blotting）和间接免疫荧光染色等用于观察2VO大鼠海马NRG1/ErbB4的表达变化以及ErbB4的共表达模式改变;通过原位末端标记法（TdT-mediated nick end labeling,TUNEL）染色和蛋白印迹分析凋亡和ErbB4相关蛋白的表达。统计TUNEL阳性细胞数以及NRG1、ErbB4表达水平,并进行Pearson相关性分析。结果:2VO可以引起显着的认知缺陷和神经元凋亡。海马CA1 NRG1（ELISA）和ErbB4（免疫荧光）表达水平在2VO组呈现明显下降。Pearson相关性分析显示NRG1/ErbB4的表达与神经元凋亡直接相关（NRG1:r=-0.869,P=0.025<0.05;ErbB4:r=-0.859,P=0.029<0.05）。结论:表明海马NRG1/ErbB4信号系统可能参与CCH的疾病进展,尤其是CCH过程中的神经元凋亡。实验二:ErbB4介导的NRG1对认知改善和海马CA1区神经元保护作用目的:通过使用ErbB4特异性抑制剂AG1478来进一步研究NRG1在CCH大鼠模型中的保护作用,并阐明ErbB4受体是否参与介导NRG1神经保护作用。方法:采用SD大鼠构建CCH模型,进行2VO或假手术（sham）。NRG1（100μM）和AG1478（50 mM）立体定向注射入CCH大鼠侧脑室内后8周（w）,采用Morris水迷宫（MWM）和八臂水迷宫（radial-armed water maze,RAWM）检测认知功能障碍,分别采用NeuN和TUNEL染色对海马CA1神经元的存活和凋亡进行组织学评价。蛋白印迹检测凋亡相关蛋白表达及ErbB4活化（pErbB4/ErbB4）情况。结果:NRG1明显改善了MWM（空间学习和记忆）和RAWM（空间工作和参考记忆）相关表现,下调了海马CA1神经元损伤和细胞凋亡,上调了pErbB4/ErbB4和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,与此同时也下调了促凋亡蛋白如Cl-caspase3和Bax的表达。此外,AG1478的介入部分抵消了NRG1的保护作用。结论:NRG1可部分通过ErbB4受体来改善CCH大鼠的认知障碍和神经元凋亡。内容二:HMGB1介导的神经炎性反应相关间接神经元损伤及其调控目的:探究HMGB1中和抗体对2VO诱导的CCH模型HMGB1信号的调控以及对神经炎症的抑制作用;方法:SD大鼠接受2VO或假手术（sham）。术后静脉注射PBS或HMGB1中和抗体（1 mg/kg）或对照IgG抗体（1 mg/kg）。在3 d时评估HMGB1核转位、血脑屏障（BBB）通透性、胶质细胞激活,炎性细胞因子和氧化应激水平。另于3 d、4 w和12 w进行NeuN免疫染色和Morris水迷宫（MWM）;结果:HMGB1抗体能抑制海马CA1亚区HMGB1易位,提高海马HMGB1水平。此外,抗HMGB1抗体在3 d时保持了BBB的完整性,减少了胶质细胞的活化,同时调控了氧化应激水平和炎性细胞因子水平。在慢性期（4 w和12 w）,抗HMGB1中和抗体可以改善海马CA1神经元的存活率和MWM实验中的行为学水平。结论:HMGB1中和抗体在急性期抑制海马炎症反应和氧化应激,这些变化在慢性期CCH中发挥长期的有益作用,提示拮抗HMGB1相关信号通路对CCH大鼠模型神经保护和认知功能的积极作用。内容三:MSC-exo对CCH模型认知改善和海马CA1区神经保护作用及分子机制初探目的:初步探索MSC-exo对CCH大鼠模型海马CA1区域神经保护作用及可能的分子机制。方法:SD大鼠随机分为三组:假手术组（Sham组,仅注射PBS）,2VO组（2VO手术）和2VO+MSC-exo组（2VO手术后2 h进行MSC-exo侧脑室立体定向注射）。体外对MSC超速离心后分离的exo进行鉴定（CD81/CD63,透射电镜以及纳米颗粒追踪分析等）。在2VO术后28 d进行Morris水迷宫（MWM）分析行为学改善,同时进行蛋白印迹和间接免疫荧光染色分析其对神经元保护和ErbB4（ErbB4&NeuN表达水平和pErbB4/ErbB4的蛋白表达水平）以及HMGB1信号（HMGB1核易位、TLR2、TLR4）的调控作用。结果:MSC-exo表达CD81和CD63表面标志物并且在透射电镜下呈现典型形态,纳米颗粒追踪分析发现分离物的粒径大小在40-150 nm左右;体内立体定向注射后发现,MSC-exo可明显改善MWM空间学习和记忆能力相关表现,并发挥神经保护作用（NeuN阳性细胞数以及TUNEL染色的凋亡系数）以及神经炎性反应的抑制作用（Iba1以及GFAP表达水平的调控）。最后,MSC-exo可明显上调ErbB4&NeuN阳性细胞数量和pErbB4/ErbB4表达水平,并下调HMGB1在神经元中的核易位以及HMGB1下游TLR2/4的表达。结论:MSCs-exo立体定向注射可明显减轻CCH大鼠模型认知障碍并起到海马CA1区神经元保护作用。而MSCs-exo以上作用可能通过调控ErbB4的表达以及抑制HMGB1的激活来实现。
王宏燕[6]（2019）在《低氧性肺动脉高压中HMGB-1对TDAG8表达的影响及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:利用慢病毒干扰技术研究低氧性肺动脉高压（HPH）模型小鼠中HMGB-1对TDAG8表达的影响及炎症反应的调控作用,并阐明其相关信号通路。方法:18只SD小鼠随机分正常组（NC组）、低氧组（HPH组）、HMGB-1基因干扰组（HPH+HMGB-1-组）,HPH组常压低氧法建立低氧肺动脉高压小鼠模型,HPH+HMGB-1-组分别在低氧造模d10、d20向小鼠尾静脉HMGB-1特异性shRNA慢病毒实现基因干扰,持续28天造模成功后,留取血液及组织标本。器官水平评估模型建立情况及慢病毒干扰效果:（1）评估右心肥厚指数及病理切片评估肺动脉血管重塑情况;（2）活体荧光示踪法及组织冰冻切片验证小鼠尾静脉HMGB-1特异性shRNA慢病毒注入实验小鼠体内情况。细胞水平:检测慢病毒介导shRNA干扰HMGB-1在小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7的表达效果。基因水平:（1）RT-PCR检测模型小鼠肺组织中HMGB-1mRNA表达;（2）Western-blot检测HMGB-1、TDAG8蛋白表达及ERK磷酸化水平。分子水平:ELISA检测肺泡灌洗液中HMGB-1、TLR4、NF-KB、IL-6、IL-1β、HIF-1的表达及cAMP累积量表达水平。方差分析检验组间差异,Pearson分析法分析相关性。结果:1、低氧性肺动脉高压小鼠模型建立成功:（1）28d后小鼠的平均体重:HPH组较NC组明显下降,P=0.0001;HPH+HMGB-1-组较NC组下降,P=0.001;HPH+HMGB-1-组较HPH组下降,P=0.01;右心肥厚指数（RVHI）在三组间均具有统计学意义,P<0.05;（2）病理切片结果显示肺动脉管腔形态:NC组大鼠肺动脉壁正常,HPH组较NC组肺动脉壁增厚管腔严重狭窄,P=0.0001;HPH+HMGB-1-组较NC组管腔狭窄,P=0.001;HPH组较HPH+HMGB-1-组肺动脉壁增厚及管腔明显狭窄,P=0.01,综上证明HPH造模成功。2、HPH炎症因子表达上调,HMGB-1信号转导通路激活:肺组织中HMGB-1mRNA及HMGB-1蛋白、肺泡灌洗液中HMGB-1表达在HPH组较NC组中高表达,P<0.05,证明HPH中HMGB-1表达增高;肺泡灌洗液中TLR4、NF-KB、IL-1b、IL-6在HPH组较NC组高表达,P<0.05;Pearson相关性分析提示HPH组HMGB-1的表达分子水平与基因及蛋白水平呈正相关,P<0.05;Pearson相关性分析提示HMGB-1与TLR4、NF-KB、IL-1β、IL-6呈正相关,表明HPH中HMGB-1表达增高,炎症因子IL-1β、IL-6表达上调,TLR4/NF-kB信号通路激活。3、尾静脉注射HMGB-1特异性shRNA慢病毒,显着抑制了肺组织中HMGB-1的mRNA和蛋白表达,炎症因子下调,减轻炎症反应:（1）巨噬细胞RAW264.7中验证HMGB-1 shRNA慢病毒干扰效果:PCR检测转染HMGB-1shRNA慢病毒后,HMGB-1 mRNA表达明显减低,P<0.05。（2）活体荧光示踪法和组织冰冻切片均可验证小鼠尾静脉注射HMGB-1特异性shRNA慢病毒成功。（3）肺组织中HMGB-1mRNA及HMGB-1蛋白、肺泡灌洗液中HMGB-1表达HPH+HMGB-1-组较HPH组表达下降,P<0.05。Pearson相关性分析提示HPH+HMGB-1-组HMGB-1的表达分子水平与基因及蛋白水平成正相关,P<0.05,有统计学意义。肺泡灌洗液中TLR4、NF-KB、IL-1b、IL-6在HPH+HMGB-1-组较HPH组低表达,P<0.05。4、HPH中HIF-1表达升高:肺泡灌洗液中HPH组较NC组较明显增高（t=6.53,P=0.0001）;HPH组较HPH+HMGB-1-组明显升高（t=3.77,P=0.001）。直线相关性分析提示HIF-1与HMGB-1表达呈正相关。5、HPH中HIF-1表达升高,导致微酸环境,TDAG8/cAMP表达激活:（1）小鼠肺组织中TDAG8蛋白表达水平在HPH组较NC组中高表达,P<0.05;（2）ELISA法检测肺泡灌洗液中cAMP累积量增加:HPH组较NC组明显增高（t=8.54,P=0.0001）,具有统计学意义。Pearson相关性分析提示TDAG8与cAMP呈正相关性;HIF-1与TDAG8、cAMP表达呈正相关。6、HMGB-1介导的HPH炎症反应中,HIF-1表达升高,乳酸堆积,形成酸性环境,TDAG8/cAMP通路激活,预测HPH中HMGB-1能正反馈调节TDAG8的表达:HPH组较NC组TDAG8及cAMP高表达,P<0.05,有显着性;HPH+HMGB-1-组较HPH组TDAG8及cAMP低表达,P<0.05,有统计学意义。Pearson相关性分析提示HMGB-1与TDAG8、cAMP的表达呈正相关。结论:1、低氧性肺动脉高压小鼠模型建立成功;2、HPH中HMGB-1mRNA和蛋白表达明显升高,炎症因子（IL-1、IL-6）上调,激活TLR4/NF-kB信号通路,HMGB-1与TLR4、NF-kB、IL-1、IL-6呈正相关,表明HPH中HMGB-1介导炎症反应;3、HPH中HIF-1表达升高,TDAG8、cAMP表达升高,HIF-1与TDAG8、cAMP呈正相关,表明HIF-1激活TDAG8/cAMP信号通路;4、HMGB-1基因干扰后,炎症因子表达下调,病理结果示HPH+HMGB-1-组肺动脉管腔狭窄程度较低氧组明显减轻,表明HPH炎症反应减轻;5、HPH组TDAG8、cAMP表达升高,TDAG8负调控炎症因子作用增强,HPH+HMGB-1-组TDAG8、cAMP表达下降,HMGB-1信号转导通路调控炎症反应占主导地位,本实验预测HMGB-1正反馈调节TDAG8的表达。
汤鲁明[7]（2018）在《高迁移率族蛋白B1介导CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化受体机制的实验研究》文中研究说明脓毒症是由感染诱发的失控性全身炎症反应,往往伴随器官功能障碍,具有高死亡率特点。目前认为免疫功能紊乱是导致脓毒症发生发展的一个重要原因。T淋巴细胞既是宿主免疫系统的调节细胞,也是效应细胞。脓毒症相关的T淋巴细胞免疫功能紊乱表现为T淋巴细胞凋亡增加,增殖受抑以及出现以Th2型为主的免疫反应。研究证实,HMGB1的分泌增加是严重烫伤大鼠导致T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化向Th2漂移的一个原因。而体外实验证实,HMGB1能直接诱导CD4+T淋巴细胞Th1/Th2向Th2型免疫反应分化。RAGE与TLR-4是识别和结合HMGB1的主要受体,并均在T淋巴细胞中表达,但对于其是否直接参与HMGB1介导CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化过程目前尚未见报道。本文拟通过体外实验观察HMGB1对CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化以及RAGE、TLR-4表达的影响,并通过抑制RAGE、TLR-4表达,分别观察RAGE、TLR-4在HMGB1介导CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化中的作用。本研究分为二部份:第一部分RAGE在HMGB1介导的CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化中的作用目的:探讨RAGE在HMGB1介导的CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化的调控作用。方法:分离培养正常小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,调整细胞浓度为2×106/L,以0.2mL/孔的体积接种至96孔培养板,加入3μg/L刀豆素A（ConA）刺激12h;分别采用10ng/mL、100ng/mL和1000ng/mL的HMGB1刺激细胞,对照组加入对应体积的PBS液,分别在12h、24h和48h使用ELIS A法检测细胞培养液IFN-y和IL-4浓度,计算IFN-γ/IL-4比值,Western-Blot和荧光实时定量PCR检测RAGE和GATA-3的表达;分别采用RAGE中和抗体以及携带RAGE-siRNA基因慢病载体干预CD4+T淋巴细胞,干扰RAGE的表达,观察HMGB1刺激后IFN-γ和IL-4浓度以及RAGE、GATA-3的表达。结果:与对照组比较,HMGB1刺激24h,10ng/mL组IFN-γ/IL-4比值显着增加（P<0.05）,而 100ng/mL组、1000ng/mL组IFN-y/IL-4比值明显降低（P<0.05）,100ng/mLHMGB1刺激,与对照组比较,12h组IFN-y/IL-4比值无明显差异（P>0.05）,而24h组IFN-y/IL-4比值显着降低（P<0.05）,48h组则更为明显（P<0.05）;1OOng/mLHMGB1刺激24h,RAGE蛋白和mRNA表达均显着升高（P<0.05）。HMGB1+RAGE抗体组较HMGB1组细胞培养上清液IFN-γ/IL-4比值有所升高（P<0.05）,而HMGB1+Lv-RAGE-siRNA组IFN-γ/IL-4比值下降（P<0.05）;与HMGB 1 组比较,HMGB 1+RAGE 抗体组、HMGB 1 +Lv-RAGE-siRNA组RAGE mRNA表达明显下降（P<0.05）;但与对照组比较,HMGB1+RAGE抗体组RAGE mRNA表达则仍有升高（P<0.05）,而HMGB1+Lv-RAGE-siRNA组RAGEmRNA表达则显着下降（P<0.05）,且HMGB1+Lv-RAGE-siRNA组RAGEmRNA的表达较HMGB1+RAGE抗体组明显下降（P<0.05）。与对照组比较,HMGB1组、HMGB 1+PBS组以及HMGB 1+RAGE抗体组CD4+T淋巴细胞GATA3 mRNA表达显着升高（P<0.05）,而HMGB1+RAGE抗体组细胞GATA3 mRN、A表达与HMGB1组比较显着降低（P<0.05）;结论:HMGB1介导小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞Th1/T2功能性分化至少部分是与RAGE/GATA3信号通路过度活化相关。第二部分TLR-4在HMGB1介导CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化中的作用目的:探讨RAGE对HMGB1介导的CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化的影响。方法:分离培养正常小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞,调整细胞浓度为2×106/L,以0.2 mL/孔的体积接种至96孔培养板,加入3μg/L刀豆素A（ConA）刺激12 h;采用100 ng/mL的HMGB1刺激细胞24h,Western-Blot和荧光实时定量PCR检测TLR-4的表达;分别采用TLR-4中和抗体以及携带TLR-4-siRNA基因慢病载体干预CD4+T淋巴细胞,干扰TLR-4的表达,观察HMGB1刺激后IFN-γ和IL-4浓度,计算IFN-γ/IL-4比值;AnnexinV-FITC细胞凋亡检测试剂盒检测CD4+T淋巴细胞的调亡。结果:与对照组比较,HMGB1刺激组CD4+T淋巴细胞的TLR-4蛋白及mRNA表达均显着升高（P<0.05）;HMGB1组、HMGB1+PBS组以及HMGB 1+TLR-4抗体组较对照组细胞培养上清液IFN-γ/IL-4比值显着下降（P<0.05）,而HMGB1+TLR-4抗体组细胞培养上清液IFN-y/IL-4比值与HMGB1组比较无显着性差异（P>0.05）;HMGB1+Lv-TLR-4siRNA转染后,与HMGB1组比较IFN-γ/IL-4比值无显着差异（P>0.05）;与对照组比较,HMGB1组CD4+T淋巴细胞的凋亡率显着增加（P<0.05）;而与HMGB1比较,HMGB1+TLR-4抗体组CD4+T淋巴细胞的凋亡率明显下降（P<0.05）;结论:TLR-4信号途径未参与HMGB1介导小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞Th1/T2功能性分化过程,但参与了介导HMGB1对小鼠脾脏CD4+T淋巴细胞的调亡反应。
张振辉,陈晓辉,江子欣,陈伟燕,熊旭明[8]（2013）在《微小RNA-141对人单核细胞合成高迁移率族蛋白B1的调控作用》文中研究说明目的探讨微小RNA-141（miR-141）对人单核细胞株THP-1高迁移率族蛋白B1（HMGB1）表达的调控作用。方法体外培养THP-1细胞,化学合成人miR-141的拟似物和抑制剂。用脂质体Lipofectamine RNAi MAX转染miR-141的拟似物或抑制剂进入THP-1细胞,转染48 h后分别用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测HMGB1的mRNA和蛋白表达。结果转染100 nmol/L miR-141拟似物后,可提高THP-1细胞miR-141的表达水平（35.33±7.24比1.21±0.20,t=-8.408,P=0.010）;转染100 nmol/L miR-141抑制剂后,可抑制THP-1细胞miR-141的表达水平（0.55±0.12比1.09±0.05,t=7.473,P=0.002）。与相应对照组比较,THP-1细胞在过表达miR-141后,HMGB1的mRNA和蛋白表达明显下调（mRNA:0.43±0.06比0.97±0.08,t=9.760,P=0.001;蛋白:0.63±0.12比1.00±0.11,t=2.991,P=0.040）;而抑制THP-1细胞中miR-141后,HMGB1的mRNA和蛋白表达均明显上调（mRNA:2.13±0.11比1.16±0.13,t=-9.977,P=0.001;蛋白:1.78±0.04比0.96±0.09,t=-13.778,P=0.000）。结论 miR-141能调控人单核细胞HMGB1的表达水平,提示miR-141在调控免疫细胞的炎症反应过程中具有重要的作用。
张蕊[9]（2013）在《罗格列酮对脓毒症大鼠肺组织TLR4和STAT3活性的影响及其机制探讨》文中进行了进一步梳理目的：观察PPARγ激动剂罗格列酮对盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠肺损伤的影响，探讨可能的保护机制。方法：48只健康雄性Wistar大鼠,采用随机数字表法分为3组：假手术组（SHAM组）；盲肠结扎穿孔组（CLP组）；罗格列酮组（ROSI组），CLP前0.5小时静脉注射罗格列酮0.3mg/Kg。于CLP后6小时、24小时各组随机抽取8只大鼠心脏取血并留取肺组织。测定各组肺组织湿/干质量比（W/D）；肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性；酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平、白细胞介素-6（IL-6）水平；实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）测定肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA水平、TLR4mRNA水平。结果：与SHAM组比较，CLP组、ROSI组大鼠肺组织W/D、MPO活性、TNF-α水平、IL-6水平以及HMGB1mRNA水平、TLR4mRNA水平在CLP后6、24小时均增加（P<0.05）；与CLP组比较，ROSI组大鼠W/D、MPO活性、TNF-α水平、IL-6水平以及HMGB1mRNA水平、TLR4mRNA水平在CLP后6、24小时均降低（P<0.05）。结论：罗格列酮降低脓毒症大鼠早期炎症因子TNF-α、IL-6和晚期炎症因子HMGB1水平，抑制炎症级联反应，减少肺组织中性粒细胞浸润，改善肺组织水肿状况，从而对肺损伤起到保护作用。其机制可能与抑制TLR4的表达有关。目的：观察罗格列酮对盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠肺组织TLR4和STAT3的影响，探讨可能的保护机制。方法：120只健康雄性Wistar大鼠，采用随机数字表法分为5组：假手术组（SHAM组）；盲肠结扎穿孔组（CLP组）；罗格列酮组（ROSI组），CLP前30分钟静脉注射罗格列酮0.3mg/Kg；GW9662+罗格列酮组（GW+ROSI组）：依次于CLP前30分钟静脉注射罗格列酮抑制剂GW96620.3mg/Kg、CLP前15分钟静脉注射罗格列酮0.3mg/Kg。雷帕霉素组（RPM组），CLP前30分钟皮下注射STAT3抑制剂雷帕霉素0.4mg/Kg。CLP后，各组随机抽取8只大鼠进行生存率分析。于CLP后6小时、24小时各组随机抽取8只大鼠心脏取血并留取肺组织。各组肺组织进行病理学检查，测定各组肺组织湿/干质量比（W/D）；肺组织髓过氧化物酶（MPO）活性；酶联免疫吸附法（ELISA）测定血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平、白细胞介素-6（IL-6）水平；凝胶阻滞电泳分析技术（electrophoretic mobility shiftassay,EMSA）测定肺组织STAT3DNA结合活性；实时荧光定量聚合酶链反应（real-time PCR）测定肺组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA水平、TLR4mRNA水平。结果：与SHAM组比较，CLP组、ROSI组、RPM组、GW+ROSI组大鼠W/D、MPO活性、TNF-α水平、IL-6水平、STAT3DNA结合活性以及HMGB1mRNA水平、TLR4mRNA水平在CLP后6、24小时均增加（P<0.05）；与CLP组、GW+ROSI组分别比较，ROSI组、RPM组大鼠W/D、MPO活性、TNF-α水平、IL-6水平、STAT3DNA结合活性以及HMGB1mRNA水平、TLR4mRNA水平在CLP后6、24小时均降低（P<0.05）。结论：罗格列酮可能通过抑制脓毒症大鼠的TLR4表达，进而降低TNF-α、IL-6以及HMGB1表达水平，从而抑制STAT3活性，抑制JAK2/STAT3通路活性，减轻肺组织炎症损伤及肺水肿程度，对炎症所致脓毒症大鼠肺损伤具有保护作用。
李杉珊[10]（2013）在《高迁移率族蛋白1在内毒素耐受中的作用及其机制研究》文中指出背景：高迁移率族蛋白1（HMGB1）生理状态下以非组蛋白的形式存在于细胞核中,可在炎症反应晚期释放至胞外发挥炎症因子的作用。外源性重组HMGB1可以引起内毒素耐受。内毒素耐受是机体抑制自身炎症反应过度发展的有效手段,表现为抑制TNF-α等促炎因子的表达而并不抑制IL-10等抑炎因子的表达。虽然内毒素耐受能在一定程度上抑制炎症反应的泛滥,但若任其发展,便会削弱机体的防御能力,增加二次感染甚至死亡的几率。目前有关内毒素耐受机制的研究尚无定论,我们不知道该过程通过什么来介导,是否存在关键的启动因子。目的：研究经典内毒素耐受（小剂量LPS引起）的发生机制,说明内源性HMGB1在其中不可替代的独特作用,并阐明其机制。方法：课题分为四个部分。第一章,应用重组HMGB1或经热处理的重组HMGB1预处理小鼠1小时后,给予其大剂量LPS打击, ELISA检测血清中TNF-α的含量,WB及免疫组织化学染色法检测肝脏中其中IRAK-M的表达；第二章,应用小剂量LPS预处理小鼠24小时后,给予其大剂量LPS打击,ELISA检测血清中HMGB1的含量,WB检测肝脏中HMGB1的表达；应用小剂量LPS预处理RAW264.7细胞18小时后,给予其大剂量LPS打击,免疫荧光染色观察HMGB1的核-胞浆转移情况；第三章,应用小剂量LPS预处理小鼠,0.5,4和10小时后分别连续腹腔注射正丁酸钠,24小时后腹腔注射大剂量LPS, RT-PCR检测肝脏中TNG-α mRNA的表达,WB检测肝脏中HMGB1的表达,ELISA检测血清中TNF-α的含量；第四章,应用小剂量LPS预处理小鼠,2,12,22小时后分别连续腹腔注射HMGB1中和抗体,24小时后腹腔注射大剂量LPS, ELISA检测血清中TNF-α的含量,WB检测肝脏中IRAK-M的表达,WB检测NF-κB在肝脏胞核中的表达,EMSA检测肝脏中NF-κB与DNA的结合能力。结果：第一章,重组HMGB1预处理1小时可以引起内毒素耐受,其机制与上调负性调控蛋白IRAK-M的表达有关,与混在其中的微量LPS无关；第二章：小剂量LPS预处理24小时可以引起内源性HMGB1表达及释放的增加；第三章,HMGB1抑制剂正丁酸钠可以抑制小剂量LPS引起的内毒素耐受；第四章,HMGB1中和抗体可以通过下调IRAK-M的表达,恢复NF-κB的活性来阻碍LPS引起的内毒素耐受现象。结论：小剂量LPS引起的内毒素耐受现象需要内源性HMGB1的参与,其机制与上调IRAK-M的表达,抑制NF-κB通路的活性有关。
二、脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1对组织Toll样受体2基因表达的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1对组织Toll样受体2基因表达的影响（论文提纲范文）
（1）HMGB1调控小胶质细胞活化在血管性认知障碍中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第一部分 血管性认知功能障碍患者外周血炎症相关指标的研究 |
| 前言 |
| 一、对象与方法 |
| 二、结果 |
| 三、讨论 |
| 第二部分 HMGB1与VCI小鼠小胶质细胞活化及少突胶质细胞成熟障碍的相关性研究 |
| 前言 |
| 一、实验设备及试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第三部分 外源性HMGB1 对健康小鼠小胶质细胞、髓鞘及认知功能的影响 |
| 前言 |
| 一、实验设备及试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 第四部分 HMGB1 致中枢炎症的相关通路研究 |
| 前言 |
| 一、实验设备及试剂 |
| 二、实验方法 |
| 三、统计方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 综述 高迁移率族蛋白1在情绪及认知障碍疾病中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
（2）HMGB1在神经干细胞迁移和脊髓损伤修复中的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| Abstract |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 HMGB1促进神经干细胞迁移作用及机制的体外研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 数据统计 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 HMGB1 预处理NSCs移植对于SCI后神经功能恢复的作用及机制研究 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.2 实验分组 |
| 3.3 数据统计 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 高迁移率族蛋白B1的研究进展 |
| 参考文献 |
| 学习期间发表的论文 |
| 致谢 |
（3）黄龙汤联合美罗培南对CLP模型大鼠抗炎作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文论着摘要 |
| 英文论着摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 黄龙汤联合美罗培南对CLP模型大鼠抗炎作用的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 黄龙汤联合美罗培南对CLP模型大鼠TLR4/NF-κB通路影响的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 黄龙汤联合美罗培南对CLP模型大鼠PI3K/Akt/NF-κB信号通路调控作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附录 |
| 综述一 TLR4-NF-κB通路介导脓毒症发病的炎症反应机制研究进展 |
| 综述二 PI3K/Akt/NF-κB通路介导脓毒症炎症反应机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（4）p38MAPK信号通路介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞模型中线粒体融合蛋白的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略语/符号说明 |
| 前言 |
| 研究现状、成果 |
| 研究目的、方法 |
| 1 对象和方法 |
| 1.1 实验细胞 |
| 1.2 实验药品与试剂 |
| 1.3 实验仪器 |
| 1.4 试剂和溶液配制 |
| 1.5 实验方法 |
| 1.6 指标检测 |
| 1.7 统计学处理 |
| 2 结果 |
| 2.1 各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞活力比较 |
| 2.2 各组细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)和白介素-6(IL-6)浓度比较 |
| 2.3 各组细胞丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性比较 |
| 2.4 各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中血红素加氧酶和线粒体融合蛋白比较 |
| 2.5 各组大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中p38、p-p38 蛋白比较 |
| 3 讨论 |
| 3.1 模型细胞的选择 |
| 3.2 LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞RLE-6TN损伤模型的建立 |
| 3.3 线粒体融合 |
| 3.4 HO-1的内源性保护作用 |
| 3.5 p38 丝裂原活化蛋白激酶 |
| 小结 |
| 结论 |
| 论文创新点 |
| 论文不足之处 |
| 参考文献 |
| 发表论文和参加科研情况说明 |
| 综述 HO-1/CO在肺脏疾病中的作用研究现状 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）慢性脑低灌注大鼠海马CA1区神经元损伤分子机制及MSCs源性外泌体对其调控作用研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 内容一:NRG1/ErbB4 信号系统功能障碍介导的直接神经元损伤及其调控 |
| 实验一 :NRG1/ErbB4 信号系统的表达与神经元凋亡相关性分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 实验二 :ErbB4 介导的NRG1 对认知改善和海马CA1 区神经元保护作用. |
| 1 材料 |
| 2.方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 内容二:HMGB1 介导的神经炎性反应相关间接神经元损伤及其调控 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 内容三:MSC-exo对 CCH模型认知改善和海马CA1 区神经保护作用及分子机制初探 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（6）低氧性肺动脉高压中HMGB-1对TDAG8表达的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1.材料与方法 |
| 2.研究方法 |
| 3.实验结果 |
| 4.讨论 |
| 5.结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 缩略语表 |
| 攻读学位期间发表文章情况 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
（7）高迁移率族蛋白B1介导CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化受体机制的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 RAGE在HMGB1介导的CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化中的作用 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 实验动物、仪器与试剂 |
| 1.2 方法 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 HMGB1对CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化的影响 |
| 2.2 HMGB1对CD4~+T淋巴细胞RAGE受体表达的影响 |
| 2.3 RAGE中和抗体对HMGB1诱导CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化的影响 |
| 2.4 Lv-RAGE-siRNA慢病毒转染对HMGB1诱导CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化的影响 |
| 2.5 RAGE中和抗体和Lv-RAGE-siRNA对HMGB1介导GD4~+T淋巴细胞RAGE表达的比较 |
| 2.6 RAGE中和抗体对HMGB1介导CD4~+T淋巴细胞GATA-3表达的影响 |
| 3 讨论 |
| 第二部分 Toll样受体-4在HMGB1介导CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化中的作用 |
| 4 材料与方法 |
| 4.1 主要仪器与试剂 |
| 4.2 方法 |
| 5 研究结果 |
| 5.1 HMGB1对CD4~+T淋巴细胞TLR-4表达的影响 |
| 5.2 TLR-4中和抗体对HMGB1诱导CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化的影响 |
| 5.3 Lv-TLR4 siRNA慢病毒转染对HMGB1秀导CD4~+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化的影响 |
| 5.4 TLR-4中和抗体和Lv-TLR4 siRNA慢病毒转染对HMGB1诱导CD4~+T淋巴细胞TLR-4表达变化的影响 |
| 5.5 TLR-4中和抗体对HMGB1诱导CD4~+T淋巴细胞凋亡的影响 |
| 6 讨论 |
| 7 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 |
| 致谢 |
（9）罗格列酮对脓毒症大鼠肺组织TLR4和STAT3活性的影响及其机制探讨（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 第一部分：罗格列酮对脓毒症大鼠肺损伤的影响 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 罗格列酮对脓毒症大鼠肺组织 TLR4 和 STAT3 的影响及其机制 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 全文结论 |
| 展望与不足 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（10）高迁移率族蛋白1在内毒素耐受中的作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 1 前言 |
| 2 外源性HMGB1预处理引起内毒素耐受的机制 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要试剂 |
| 2.1.3 主要仪器 |
| 2.1.4 动物模型及分组 |
| 2.1.5 酶联免疫吸附试验 |
| 2.1.6 蛋白免疫印迹试验 |
| 2.1.7 免疫组织化学染色 |
| 2.1.8 统计学分析 |
| 2.2 实验结果 |
| 2.2.1 重组HMGB1引起的TNF-α表达下调与混杂于其中的微量LPS无关 |
| 2.2.2 重组HMGB1预处理引起IRAK-M表达的增加 |
| 2.3 分析与讨论 |
| 2.4 本章小结 |
| 3 内源性HMGB1在内毒素耐受中的表达和分泌 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 细胞系 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 主要试剂 |
| 3.1.4 主要仪器 |
| 3.1.5 RAW264.7细胞培养 |
| 3.1.6 免疫荧光染色 |
| 3.1.7 动物饲养及分组 |
| 3.1.8 蛋白免疫印迹试验WB |
| 3.1.9 酶联免疫吸附试验ELISA |
| 3.1.10 统计学分析 |
| 3.2 实验结果 |
| 3.2.1 小剂量LPS预处理RAW264.7鼠巨噬细胞引起内源性HMGB1核-胞浆转 |
| 3.2.2 小剂量LPS预处理增加小鼠肝脏组织中HMGB1的表达 |
| 3.2.3 小剂量LPS预处理增加小鼠血清中HMGB1的含量 |
| 3.3 分析与讨论 |
| 3.4 本章小结 |
| 4 HMGB1抑制剂正丁酸钠对内毒素耐受的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 主要试剂 |
| 4.1.3 主要仪器 |
| 4.1.4 动物饲养及分组 |
| 4.1.5 蛋白免疫印迹试验WB |
| 4.1.6 酶联免疫吸附试验ELISA |
| 4.1.7 半定量反转录-聚合酶链反应RT-PCR |
| 4.1.8 统计学分析 |
| 4.2 实验结果 |
| 4.2.1 正丁酸钠抑制内毒素耐受小鼠肝脏中HMGB1的表达 |
| 4.2.2 正丁酸钠增加内毒素耐受小鼠血清中TNF-α的含量 |
| 4.2.3 正丁酸钠增加内毒素耐受小鼠肝脏TNF-α mRNA的表达 |
| 4.3 分析与讨论 |
| 4.4 本章小结 |
| 5 HMGB1特异性中和抗体对内毒素耐受的影响及其机制 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 主要试剂 |
| 5.1.3 主要仪器 |
| 5.1.4 动物饲养及分组 |
| 5.1.5 酶联免疫吸附试验ELISA |
| 5.1.6 提取组织核蛋白 |
| 5.1.7 蛋白免疫印迹试验WB |
| 5.1.8 凝胶迁移实验EMSA |
| 5.1.9 统计学分析 |
| 5.2 实验结果 |
| 5.2.1 HMGB1特异性中和抗体增加内毒素耐受小鼠血清中TNF-α的含量 |
| 5.2.2 HMGB1特异性中和抗体减少内毒素耐受小鼠中IRAK-M的表达 |
| 5.2.3 HMGB1中和抗体增加内毒素耐受小鼠NF-κB的活性 |
| 5.3 分析与讨论 |
| 5.4 本章小结 |
| 6 全文总结 |
| 参考文献 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间主要研究成果 |
| 致谢 |
四、脓毒症大鼠高迁移率族蛋白-1对组织Toll样受体2基因表达的影响（论文参考文献）
- [1]HMGB1调控小胶质细胞活化在血管性认知障碍中的作用及机制研究[D]. 梁萌. 中国人民解放军海军军医大学, 2021(01)
- [2]HMGB1在神经干细胞迁移和脊髓损伤修复中的作用及机制研究[D]. 薛鑫. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(07)
- [3]黄龙汤联合美罗培南对CLP模型大鼠抗炎作用机制研究[D]. 赵妍. 辽宁中医药大学, 2019(01)
- [4]p38MAPK信号通路介导HO-1表达对LPS攻击大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞模型中线粒体融合蛋白的影响[D]. 杜诗涵. 天津医科大学, 2019(02)
- [5]慢性脑低灌注大鼠海马CA1区神经元损伤分子机制及MSCs源性外泌体对其调控作用研究[D]. 黑悦. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [6]低氧性肺动脉高压中HMGB-1对TDAG8表达的影响及机制研究[D]. 王宏燕. 内蒙古医科大学, 2019(03)
- [7]高迁移率族蛋白B1介导CD4+T淋巴细胞Th1/Th2功能性分化受体机制的实验研究[D]. 汤鲁明. 武汉大学, 2018(01)
- [8]微小RNA-141对人单核细胞合成高迁移率族蛋白B1的调控作用[J]. 张振辉,陈晓辉,江子欣,陈伟燕,熊旭明. 中华危重病急救医学, 2013(10)
- [9]罗格列酮对脓毒症大鼠肺组织TLR4和STAT3活性的影响及其机制探讨[D]. 张蕊. 南京医科大学, 2013(12)
- [10]高迁移率族蛋白1在内毒素耐受中的作用及其机制研究[D]. 李杉珊. 中南大学, 2013(02)