一、中国水仙病毒的提纯（论文文献综述）
庞易英[1]（2020）在《天然产物（-）-γ-Lycorane的全合成研究》文中进行了进一步梳理Lycorine型生物碱是一类存在于石蒜科植物中的重要的天然产物,其主要生理活性表现为抗肿瘤、抗乙酰胆碱酯酶、抗炎等作用。而γ-Lycorane是Lycorine型生物碱的典型代表化合物,因其分子中独特的吡咯并菲啶的四环结构,一直受到化学家们的广泛关注。本论文以天然产物（-）-γ-Lycorane的全合成为研究目标,设计并实现了一条独特、新颖的全合成路线,简洁、高效地得到了目标天然产物（-）-γ-Lycorane。基于天然产物（-）-γ-Lycorane特有的化学结构,我们围绕分子中四环结构的B、D环的构建为研究重点来展开目标分子的设计与合成研究。整个合成研究包含了三条探索路线。第一条路线尝试通过芳基卤原子分子内锂卤交换及钯催化的偶联反应来合成目标产物。然而,由于两种毗连的卤素原子的存在,整条合成路线以失败告终。第二条路线利用分子内的Heck偶联反应来构建B环,成功完成了（±）-γ-Lycorane及其异构体的全合成。但是没有区域选择性,不符合我们预期想得到的单一产物（±）-γ-Lycorane的目标。第三条合成路线,借助溴原子“占位”的策略,我们利用分子内的Heck偶联反应单一区域选择性地合成了（±）-γ-Lycorane及其异构体,并发现可以“一锅”法地同时实现钯催化的自由基Heck偶联反应和溴原子还原。最后,通过不对称合成,顺利的完成了目标分子（-）-γ-Lycorane的全合成研究。本论文在对目标分子合成过程中采用的一些合成方法,具有独特的创新性和广泛的实际应用性的特征,为与Lycorine型生物碱相关的其他化合物合成提供了重要的借鉴。
卞黎霞[2]（2016）在《双抗体夹心ELISA法检测上海崇明水仙的5种病毒》文中指出以崇明水仙露地栽培中出现的褪绿、斑驳、花叶和黄条等多种症状的植株为样本,以水仙试管脱毒苗为参照,采用DAS-ELISA法定量检测了烟草花叶病毒（TMV）、黄瓜花叶病毒（CMV）、水仙潜隐病毒（NLV）、水仙花叶病毒（NMV）和水仙黄条病毒（NYSV）5种病毒病。结果发现全部样本带毒率共计50.8%,复合感染带毒率11.1%;54份露地栽培的样本中TMV、CMV和NYSV带毒率分别为38.9%、14.8%和1.85%;组培苗中TMV和CMV带毒率分别为88.9%和11.1%。
沈建国,高芳銮,蔡伟,于文涛,虞赟,李敏,闫诚[3]（2012）在《水仙花叶病毒RT-PCR检测方法的建立及应用》文中研究说明旨在建立水仙花叶病毒（narcissus mosaic virus,NMV）的分子快速检测方法。根据已公布的NMV基因序列,设计一对特异性引物,以提取的水仙样品总RNA为模板进行RT-PCR,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性及实际检测效果进行测定。从感染NMV的水仙样品中成功扩增出预期大小（约483bp）的特异性目的片段,而健康水仙上未扩增到相应的片段。特异性、灵敏度及重复性测定结果表明,研究建立的RT-PCR方法特异性强、灵敏高、重复性好。应用该方法成功检测了一批口岸送检的水仙样品。研究建立的RT-PCR方法可为水仙上NMV的检测提供可靠的技术支持。
林双庆[4]（2012）在《福建漳州水仙病毒病的病原鉴定及两病毒基因组全序列分析》文中提出水仙病毒病是危害水仙生产的主要病害之一。通过对福建漳州水仙的田间病害调查,发现田间发病植株主要表现为褪绿斑驳、褪绿条纹、黄条、花叶等症状。采集的水仙样品经电镜观察,可以观察到长度在550-850nm姗之间的病毒线状粒体。通过血清学方法初步检测到了水仙花叶病毒（Narcissus mosaic virus, NMV）、水仙黄条病毒（Narcissus yellow stripe virus, NYSV）和水仙迟黄病毒（Narcissus late season yellows virus, NLSYV）三种病毒。利用已报道的水仙常见病毒的特异性引物和马铃薯Y病毒属简并引物对水仙样品进行分子生物学检测,并结合生物学方法,确定了漳州水仙病毒病的病原主要包括NMV、NYSV、NLSYV、水仙潜隐病毒（Narcissus latent virus, NLV）、水仙普通潜隐病毒（Narcissus common latent virus, NCLV）和水仙退化病毒（Narcissus degeneration virus, NDV）.另外在漳州水仙上还获得了两个马铃薯Y病毒属病毒分离物Y13-1和ZZ-2,其中Y13-1可能为马铃薯Y病毒属的一个新种,ZZ-2可能为NYSV的一个株系。利用基于马铃薯Y病毒属简并引物的RT-PCR和RACE扩增方法,测定了NLSYV漳州分离物（NLSYV-ZZ）和分离物ZZ-2的基因组全序列,并测定了分离物Y13-13’-端约4.6kb的基因序列。NLSYV-ZZ的基因组全序列为该病毒的首次报道（登录号为JQ326210）。基因组全长为9651个核苷酸（nt）,5’-非编码区（5’-UTR）长度为123nt,3’-非编码区（3’-UTR）长度为210nt。NLSYV-ZZ基因组全序列与亲缘关系相近的病毒比较, NLSYV-ZZ与NYSV核苷酸序列一致性最高,为69.9%,与薤花叶病毒（Scallion mosaic virus, ScaMV）的一致性为62.5%,与芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus, TuMV）的不同分离物一致性为58.8-59.8%。在基于多聚蛋白构建的系统进化树上,NLSYV-ZZ与NYSV、ScaMV、TuMV、日本山药花叶病毒（Japanese yam mosaic virus、JYMV）聚类在同一个分支上,表明了NLSYV-ZZ与这些病毒亲缘关系较近。分离物Y13-13’-端基因序列长为4606nt（登录号JQ911735）。将3’-端基因序列BLASTn搜索,结果表明Y13-1与NYSV序列一致性最高,其次为ScaMV和TuMV的各个分离物。将Y13-1的CP基因与其他马铃薯Y病毒属病毒比较,发现Y13-1与NLSYV-ZZ、NYSV的序列一致性最高,分别为73.3%nt（73.6%aa）和72.5%nt（77.1%）。这些数值在基因水平上符合ICTV关于马铃薯Y病毒属物种的分类标准。因此本研究初步认定Y13-1可能为新种,并暂时命名为水仙斑驳病毒（Narcissus mottle virus, NMoV）。分离物ZZ-2基因组全长为9654nt,5’-UTR长度为130nt,3’-UTR长度为206nt（登录号JQ911732）。ZZ-2的基因组核苷酸序列与NSYV一致性最高,为71.9%,与NLSYV-ZZ一致性为70.2%。在CP基因上,ZZ-2与NYSV的一致性同样是最高,为77.6%nt（84.4%aa）,高于马铃薯Y病毒属病毒分类标准的界限值76%nt（80%aa）。因此本研究认为ZZ-2属于NYSV的一个株系。
戴丽云[5]（2011）在《漳州水仙花产业关键技术研究》文中提出水仙花为石蒜科,属多年生球茎类的草本植物。中国水仙花是我国十大传统名花之一,是福建省省花、漳州市市花,素有“凌波仙子”之美誉。漳州水仙花,历史悠久,源远流长,距今已有550多年的历史。漳州水仙花由于产区拥有得天独厚的生态环境,加之丰富的文化背景和优异的品种,以及经长年摸索积累下的技术底蕴,创下了“漳州水仙花”全国驰名商标,使得漳州水仙花闻名全国,香飘世界。漳州水仙花品牌优势和市场价值不断凸显,产业具有很好的发展前景。我国加入WTO后,花卉市场逐步开放。漳州水仙花在与国内、外花种的竞争中,技术优势不再明显,销售受到很大冲击,市场占有率呈下滑趋势。如何保住传统品牌,发展特色品牌,在技术上推陈出新,进而带动漳州水仙花产业做大、做强,在国际竞争中扩大领跑优势,已成为当地政府和花农们面临的首要问题。本研究通过查阅国内外水仙花产业发展的最新动态资料,以及通过实地考察、问卷调查及分析、SWOT分析法等方法,多角度研究分析漳州水仙花产业关键技术和水仙花产业技术提升方向;通过对漳州水仙花产业发展的SWOT分析,详细分析了漳州水仙花产业发展的优势、问题、存在的机遇与挑战,从而得出推动漳州水仙花产业可持续性发展的策略和建议,并对漳州水仙花产业项目投资注意因素、产业技术开发注意事项进行了分析和展望。漳州水仙花的关键技术在于:新品种的选择和培育;新的栽培技术,以提高产品的产量和质量;水仙花的花期调控技术,以利周年生产和观赏;水仙花机械化生产技术,以降低生产成本;建立和拓宽销售渠道,生产精品产品,提高消费群体,促进产业发展壮大。建设现代农业产业技术体系是提高农业科技创新能力和创新效率的新思路、新机制。水仙花产业也必须要建设产业技术体系,水仙花产业技术体系应该以水仙花为单元,以产业为主线,梳理每个水仙花产业链条的技术需求,解决每个环节的生产技术难题,依靠科技进步提升水仙花产业的素质、效益和竞争力。发展水仙花产业体系,需要:（1）加大政策扶持、鼓励水仙花产业技术的不断创新和发展。（2）引进国外先进技术和设备条件,加大对水仙花产业技术创新的硬件支持,提升水仙花产业技术体系,逐一解决各个关键技术,使产业可持续发展。（3）充分发挥对台合作优势,加强龙头企业的带动作用。（4）加快水仙花新品种的培育,努力提高花农的科学素养。
何炎森[6]（2009）在《水仙花叶病毒病研究概况》文中提出水仙花叶病是危害水仙花主要病毒病,普遍发生于世界各国水仙产地。此文综述了水仙花叶病毒（NMV）的分类、生物学特性、检测技术和防治措施的研究概况,同时建议了今后的研究方向。
刘博[7]（2009）在《百合、水仙病毒分子检测及脱毒技术研究》文中研究说明百合、水仙是重要的球根花卉。但是,极易受到病毒病危害,造成种性衰退和商品生产价值丧失。其中,百合百合无症病毒Lily symptomless virus（LSV）发生较为普遍。LSV一般不会造成明显症状,但与黄瓜花叶病毒Cucumber mosais viru（sCMV）或百合斑驳病毒Lily mottle virus（LMoV）复合侵染时,可造成脉明、花叶、畸形、坏死斑以及整株矮化等症状。建立快速、准确的病毒检测和高效的脱毒体系是百合、水仙恢复种性和规模化种球生产的关键技术问题。本研究在我试验室已经建立的同时检测百合三种常见病毒的多重RT-PCR检测方法和剥茎尖结合病毒抑制剂脱毒基础上,进一步开展了百合、水仙的病毒检测和百合无症病毒（LSV）脱毒技术的研究。取得了以下主要结果:1.本研究采用RT-PCR技术从荷兰进口的喇叭水仙‘pink charm’中检测到百合斑驳病毒（LMoV）。将该序列与GenBank上已登录的病毒基因序列作BLAST。分析发现该序列与6个百合斑驳病毒多聚蛋白基因序列AJ748256;AJ564636;AB053256;AF531458;AJ564637;AJ748257相似性均在98%以上,与其他9个百合斑驳病毒基因序列AJ874695;AJ310203;EF158108;AB054886;AM048875;AJ874696; AJ879511; S60810; AY464944相似性也在90%以上,据此判定待测水仙中确带有百合斑驳病毒。该病毒是危害百合属和郁金香属作物的重要病毒病原,在水仙上未见报道。2.水仙黄条病毒（Narcissus yellow stripe virus, NYSV）属马铃薯Y病毒属（Potyvirus）病毒,被普遍认为是专一侵染水仙的病原体,其典型病症是沿叶脉产生黄色条斑,病情严重的植株瘦弱、矮化、鳞茎小。目前还未见有对水仙黄条病毒快速检测的报道,本研究用RT-PCR技术快速有效的从漳州水仙上检测到NYSV,为保护水仙品种资源,实现可持续发展提供技术支持,对病毒病的防治有重要意义。3.本试验侧重以探索更加简单方便快捷有效并且能大大降低成本,并应用于生产的百合脱毒方法,克服常规“热处理+茎尖培养”脱毒方法造成的植株成活率低的问题。针对东方百合‘Tiber’带毒（LSV）商品球,采用剥大茎尖（约2mm）结合高温变温（白天38℃-10h,夜间32℃-14h）全暗培养,处理持续一个月后,脱除LSV率达100%。该方法应用于百合脱毒在国内外尚未见报道。4.水杨酸对病毒有一定的抑制作用,但未能脱去病毒,有待于进一步研究。
郑红英,鲁宇文,沈嘉乐,林林,陈炯,陈剑平[8]（2009）在《侵染水仙的虎眼万年青花叶病毒外壳蛋白的原核表达、抗血清制备及应用》文中进行了进一步梳理采用特异性表达引物PCR扩增了一个从英国围裙水仙样品上分离的虎眼万年青花叶病毒外壳蛋白基因序列。构建原核表达载体,制备了OrMV分离物的外壳蛋白抗血清。对制备的抗血清进行了Western-blot检测,血清学关系研究并应用于样品的间接ELISA检测。
杨柳燕[9]（2008）在《崇明水仙试管成球及离体脱毒技术研究》文中研究说明崇明水仙（Narcissus tazetta var. chinensis）是上海市的特有花卉品种之一,具有悠久的栽培历史。但目前生产上分球是唯一的繁殖方式,增殖系数低,且病毒积累,造成种性退化,产量降低,阻碍其产业发展。本研究对影响崇明水仙试管球诱导和增殖的多种因素进行了探讨,建立了试管球高效诱导体系和高频增殖体系;采用DHT+高温处理、DHT+病毒唑处理等技术手段进行了离体脱毒研究。主要结果如下:1.以带鳞茎盘的鳞片为外植体时,离体诱导前应对鳞茎进行4周的冷处理。2.将鳞茎盘切成4块,在1000mg/L头孢拉定溶液中浸泡3h,污染率降至8.3%。3.适合花序轴诱导试管球的最佳培养基为MS+BA10mg/L+NAA5mg/L+蔗糖30g/L,有效诱导率达到171.3%。适合带鳞茎盘的鳞片诱导试管球的最佳培养基为MS+BA1mg/L+NAA1mg/L+蔗糖30g/L,成球率为163.6%。4.冷处理3周的内层鳞片是诱导愈伤的最佳材料,在MS+BA1mg/L+2,4-D0.1mg/L+蔗糖30g/L培养基上,诱导率和再分化率分别为48.4%和23.3%。子房愈伤诱导和再分化的最佳培养基为MS+BA10mg/L+NAA3mg/L+蔗糖30g/L,诱导率和再分化率分别为51.9%和22.2%。5.试管球增殖的最佳培养基为MS+BA5mg/L+NAA1mg/L+蔗糖40g/L,增殖率为175.0%。适当提高蔗糖浓度以40g/L为宜,AC显着降低试管球的增殖率。6.适合试管球生根的最佳培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L+AC1g/L+蔗糖30g/L,生根率为90.4%。AC有利于提高试管球的生根率。7.利用DHT+高温处理后病毒含量明显降低。DHT30mg/L+病毒唑30mg/L处理能使NMAV含量降低到极微弱的水平,且不影响试管球存活;DHT10mg/L+病毒唑10mg/L处理可以完全脱除NDV和NCLV病毒,脱毒效果通过RT-PCR技术检验证实。
陈剑平,陈炯,郑红英,林林,程晔,史雨红,鲁宇文[10]（2007）在《我国49种线状植物病毒分子鉴定及其基因组研究》文中进行了进一步梳理本研究建立了马铃薯Y病毒属、马铃薯X病毒属、麝香石竹潜隐病毒属和葱X病毒属成员RT-PCR检测和全基因组扩增技术体系,并成功用于60多种供试植物病毒的检测诊断。利用所建立的技术体系,从全国18个省市42种作物上采集的病样中鉴定了49种植物病毒,其中10种为新种,11种为国内新记录,更正了7种病毒的鉴定和命名。测定了这49种病毒217个分离物基因组序列,并全部在国际基因数据库登录,占全球登录的植物病毒基因组序列总数的3.8%,其中27种植物病毒为基因组全序列,20种为国际首次报道,15种病毒全序列被美国国家生物技术信息中心（NCBI）确定为相关病毒的标准序列。
二、中国水仙病毒的提纯（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、中国水仙病毒的提纯（论文提纲范文）
（1）天然产物（-）-γ-Lycorane的全合成研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 第1章 引言 |
| 1.1 全合成简介 |
| 1.1.1 全合成的发展及分类 |
| 1.1.2 天然产物全合成的应用 |
| 1.2 石蒜科生物碱的概述 |
| 1.2.1 石蒜科生物碱的分类 |
| 1.2.2 石蒜科生物碱的药理作用 |
| 1.3 天然产物γ-Lycorane简介 |
| 1.4 Lycorane的国内外研究现状 |
| 第2章 (-)-γ-Lycorane的全合成研究 |
| 2.1 立题意义 |
| 2.2 (±)-γ-Lycorane的全合成研究 |
| 2.2.1 (±)-γ-Lycorane的第一条合成路线研究 |
| 2.2.2 (±)-γ-Lycorane的第二条合成路线研究 |
| 2.2.3 (±)-γ-Lycorane的第三条合成路线研究 |
| 2.3 (-)-γ-Lycorane的合成路线研究 |
| 2.4 本章小结 |
| 第3章 结论 |
| 第4章 实验部分 |
| 4.1 实验材料来源以及规格 |
| 4.2 合成天然产物(±)-γ-Lycorane及其异构体操作步骤及实验数据 |
| 4.3 合成天然产物(-)-γ-Lycorane操作步骤及实验数据 |
| 参考文献 |
| 附录1 核磁图谱 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（2）双抗体夹心ELISA法检测上海崇明水仙的5种病毒（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 试验材料 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(DAS-ELISA) |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 DAS-ELISA检测 |
| 2.2 大田水仙实生苗DAS-ELISA检测 |
| 2.3 水仙组培苗DAS-ELISA检测 |
| 3 结论与讨论 |
（3）水仙花叶病毒RT-PCR检测方法的建立及应用（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 总RNA提取 |
| 1.3 引物设计 |
| 1.5 序列测定及分析 |
| 1.6 特异性测定 |
| 1.7 灵敏度测定 |
| 1.8 重复性测定 |
| 1.9 RT-PCR方法的应用 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 RT-PCR扩增 |
| 2.2 特异性测定结果 |
| 2.3 序列测定结果 |
| 2.4 灵敏度测定结果 |
| 2.5 重复性测定结果 |
| 2.6 水仙样品的检测 |
| 3 结论与讨论 |
（4）福建漳州水仙病毒病的病原鉴定及两病毒基因组全序列分析（论文提纲范文）
| 目录 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 水仙病毒病研究概况 |
| 1.2 侵染水仙的主要病毒研究进展 |
| 1.2.1 水仙花叶病毒(Narcissus mosaic virus, NMW) |
| 1.2.2 水仙黄条病毒(Narcissus yellow stripe virus,NYSV) |
| 1.2.3 水仙潜隐病毒(Narcissus latent virus,NLV) |
| 1.2.4 水仙迟黄病毒(Narcissus late season yellows virus,NLSYV) |
| 1.2.5 水仙退化病毒(Narcissus degeneration virus,NDV) |
| 1.2.6 水仙顶端坏死病毒(Narcissus tip necrosis virus,NTNV) |
| 1.2.7 水仙普通潜隐病毒(Narcissus common latent virus,NCLV) |
| 1.3 本研究的目的和意义 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 毒源 |
| 2.1.2 供试寄主 |
| 2.1.3 菌株与质粒 |
| 2.1.4 主要试剂 |
| 2.1.5 dsRNA提取相关溶液及E.coli DH5a培养基 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 接种寄主 |
| 2.2.2 电镜观察 |
| 2.2.3 血清学检测 |
| 2.2.4 Trizol法提取总RNA |
| 2.2.5 dsRNA的微量提取 |
| 2.2.6 cDNA合成 |
| 2.2.7 PCR扩增技术 |
| 2.2.8 PCR产物纯化 |
| 2.2.9 分子克隆技术 |
| 2.2.10 序列测定及分析 |
| 2.2.11 5'-RACE技术 |
| 第三章 福建水仙病毒病的毒源种类鉴定 |
| 3.1 材料和方法 |
| 3.1.1 毒源 |
| 3.1.2 引物 |
| 3.1.3 接种寄主 |
| 3.1.4 电镜观察 |
| 3.1.5 ELISA检测 |
| 3.1.6 RT-PCR检测 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 水仙病株症状 |
| 3.2.2 水仙汁液电镜观察 |
| 3.2.3 样品血清学检测 |
| 3.2.4 马铃薯Y病毒属(Potyvirus)病毒RT-PCR检测 |
| 3.2.5 水仙花叶病毒(NMV)的RT-PCR检测 |
| 3.2.6 水仙潜隐病毒(NLV)RT-PCR检测 |
| 3.2.7 水仙普通潜隐病毒(NCLV)的RT-PCR检测 |
| 3.2.8 水仙退化病毒(NDV)的RT-PCR检测 |
| 3.3 小结和讨论 |
| 第四章 NLSYV漳州分离物(NLSYV-ZZ)的基因组全序列分析 |
| 4.1 材料和方法 |
| 4.1.1 毒源与dsRNA提取 |
| 4.1.2 NLSYV-ZZ基因组全长扩增引物 |
| 4.1.3 病毒基因组全长扩增策略 |
| 4.1.4 RT-PCR反应 |
| 4.1.5 5'-RACE |
| 4.1.6 PCR产物回收和分子克隆 |
| 4.1.7 序列测定及分析 |
| 4.2 结果和分析 |
| 4.2.1 NLSYV-ZZ分离物基因组全序列扩增结果 |
| 4.2.3 序列分析 |
| 4.2.4 NLSYV-ZZ与Potyvirus其他病毒进化关系 |
| 4.2.5 NLSYV-ZZ CP蛋白和其他NLSYV分离物的进化关系 |
| 4.5 小结与讨论 |
| 第五章 漳州水仙分离物Y13-1 3’-端基因的克隆及序列分析 |
| 5.1 材料和方法 |
| 5.1.1 毒源与dsRNA提取 |
| 5.1.2 分离物Y13-1 3’-端基因扩增引物 |
| 5.1.3 RT-PCR反应 |
| 5.1.4 PCR产物回收和分子克隆 |
| 5.1.5 序列测定及分析 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 RT-PCR扩增结果 |
| 5.2.2 序列分析 |
| 5.2.3 Y13-1与Potyvirus病毒进化关系 |
| 5.3 小结与讨论 |
| 第六章 漳州水仙分离物ZZ-2的基因组全序列分析 |
| 6.1 材料和方法 |
| 6.1.1 毒源与dsRNA提取 |
| 6.1.2 分离物ZZ-2基因组全长扩增引物 |
| 6.1.4 分离物ZZ-2基因组全长扩增策略 |
| 6.1.5 RT-PCR反应 |
| 6.1.6 5'-RACE |
| 6.1.7 PCR产物回收和分子克隆 |
| 6.1.8 序列测定及分析 |
| 6.2 结果和分析 |
| 6.2.1 分离物ZZ-2的初步分子鉴定 |
| 6.2.2 分离物ZZ-2的基因组全序列扩增结果 |
| 6.2.3 序列分析 |
| 6.2.4 分离物ZZ-2与Potyvirus病毒进化关系 |
| 6.2.5 水仙上分离的potyviruses间进化关系 |
| 6.3 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 附录 缩写词和英汉对照 |
| 致谢 |
（5）漳州水仙花产业关键技术研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 前言 |
| 1.1 课题的提出 |
| 1.1.1 中国水仙花发展简介 |
| 1.1.2 漳州水仙花发展简介 |
| 1.2 国内外该课题研究状况 |
| 1.2.1 我国水仙花产业技术研发成果回顾 |
| 1.2.2 漳州水仙花产业技术研发动态 |
| 1.3 本研究的目的与意义 |
| 1.4 研究内容和方法 |
| 1.4.1 研发内容 |
| 1.4.2 研发方法 |
| 第二章 漳州水仙花产业关键技术调查分析 |
| 2.1 漳州水仙花生产销售数据分析 |
| 2.2 影响漳州水仙花产业发展趋势因素的调查分析 |
| 2.3 漳州水仙花产业关键技术调查分析 |
| 2.4 漳州水仙花产业关键技术 |
| 第三章 漳州水仙花产业关键技术介绍及技术提升 |
| 3.1 水仙花产业技术体系建设 |
| 3.2 漳州水仙花产业技术现状 |
| 3.2.1 漳州水仙花产业技术介绍 |
| 3.2.2 漳州水仙花产业技术标准 |
| 3.3 漳州水仙花产业技术提升 |
| 3.3.1 提升良种选育技术 |
| 3.3.2 提升高产栽培技术 |
| 3.3.3 提升新型贮藏及冷链运输技术 |
| 3.3.4 提升水仙花球脱土包装技术 |
| 3.3.5 提升植株矮化技术 |
| 3.3.6 提升花期调控技术 |
| 3.3.7 提升机械化操作技术 |
| 3.3.8 提升精品制作技术 |
| 第四章 漳州水仙花产业技术有投资前景分析 |
| 4.1 漳州水仙花产业发展的SWOT分析 |
| 4.1.1 漳州水仙花产业发展的区域与资源优势 |
| 4.1.2 漳州水仙花产业发展的“对台”合作优势 |
| 4.1.3 漳州水仙花产业发展中存在的问题与不足 |
| 4.1.4 漳州水仙花产业发展面临的机遇 |
| 4.1.5 漳州水仙花产业发展面临的挑战 |
| 4.1.6 推动漳州水仙花产业可持续发展的策略和建议 |
| 4.2 漳州水仙花项目投资注意因素 |
| 4.3 漳州水仙花产业技术开发的注意因素 |
| 4.4 漳州水仙花产业技术投资策略或建议 |
| 参考文献 |
| 附件一：漳州市水仙花生产情况调查问卷 |
（6）水仙花叶病毒病研究概况（论文提纲范文）
| 0 引言 |
| 1 NMV的分类 |
| 2 NMV的生物学特性 |
| 2.1 在水仙不同组织和细胞内的分布 |
| 2.2 侵染与传播途径 |
| 2.3 NMV粒体结构与基因组结构 |
| 3 NMV检测技术 |
| 4 防治措施 |
| 4.1 抗病品种的选育 |
| 4.2 培育脱毒健康种苗 |
| 4.3 加强田间管理 |
| 5 建议 |
| 5.1 无病毒种苗繁育与推广应用 |
| 5.2 病毒检测与鉴定技术的提升 |
| 5.3 抗源种质搜集和抗性遗传研究 |
| 5.4 基因转导抗病育种研究 |
| 5.5 传播途径和防治措施研究 |
（7）百合、水仙病毒分子检测及脱毒技术研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 百合、水仙病毒病及其危害 |
| 1.2 植物病毒检测方法研究进展 |
| 1.2.1 生物学鉴定法 |
| 1.2.2 电子显微镜诊断法 |
| 1.2.3 血清学方法 |
| 1.2.4 分子生物学方法 |
| 1.3 脱毒方法研究进展 |
| 1.3.1 病毒脱除理论依据 |
| 1.3.2 病毒脱除技术方法 |
| 1.4 研究的立题背景、意义与研究路线 |
| 1.4.1 立题背景、意义 |
| 1.4.2 试验材料、方法及研究路线 |
| 第二章 百合、水仙主要病毒的RT-PCR 检测 |
| 2.1 百合主要病毒检测 |
| 2.1.1 材料与方法 |
| 2.1.2 结果与分析 |
| 2.1.3 小结与讨论 |
| 2.2 喇叭水仙中百合斑驳病毒的RT-PCR 检测及序列分析 |
| 2.2.1 材料与方法 |
| 2.2.2 结果与分析 |
| 2.2.3 小结与讨论 |
| 2.3 水仙黄条病毒的RT-PCR 检测及序列分析 |
| 2.3.1 材料与方法 |
| 2.3.2 结果与分析 |
| 2.3.3 小结与讨论 |
| 第三章 百合无症病毒的脱除 |
| 3.1 试验处理 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 小结与讨论 |
| 第四章 总结 |
| 4.1 首次在荷兰进境喇叭水仙上检测到百合斑驳病毒 |
| 4.2 应用RT-PCR 方法快速检测水仙黄条病毒 |
| 4.3 高温变温结合剥茎尖全暗培养成功脱除百合无症病毒 |
| 4.4 组培苗在添加水杨酸的培养基中培养脱毒效果不理想 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（8）侵染水仙的虎眼万年青花叶病毒外壳蛋白的原核表达、抗血清制备及应用（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 病样 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.3 原核表达载体的构建及诱导表达 |
| 1.4 抗血清的制备、Western blot分析和血清学检测 |
| 1.5 田间样品的间接ELISA法检测 |
| 2 结果与分析 |
| 2.1 原核表达载体的构建 |
| 2.2 原核表达制备抗血清及Western blot分析 |
| 2.3 血清学关系 |
| 2.4 水仙样品的ELISA检测 |
| 3 讨论 |
（9）崇明水仙试管成球及离体脱毒技术研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 中国水仙组织培养研究进展 |
| 1.1.1 外植体选取 |
| 1.1.2 预处理 |
| 1.1.3 外植体消毒 |
| 1.1.4 丛生芽诱导 |
| 1.1.5 愈伤组织诱导 |
| 1.1.6 增殖培养 |
| 1.1.7 生根 |
| 1.1.8 炼苗移栽 |
| 1.2 球根花卉离体脱毒技术研究进展 |
| 1.2.1 植物脱毒常用技术 |
| 1.2.2 重要球根花卉离体脱毒技术研究进展 |
| 1.2.3 植物病毒主要检测技术 |
| 1.3 水仙病毒病研究进展 |
| 1.3.1 水仙病毒病种类 |
| 1.3.2 中国水仙病毒病种类及危害症状 |
| 1.3.3 水仙病毒脱除技术研究进展 |
| 1.3.4 水仙病毒检测技术研究进展 |
| 1.4 本研究的背景与总体设计 |
| 1.4.1 研究背景 |
| 1.4.2 研究目的 |
| 1.4.3 研究内容 |
| 1.4.4 研究技术路线 |
| 第二章 崇明水仙高效离体诱导技术体系的建立 |
| 2.1 材料及试剂 |
| 2.1.1 材料来源 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 |
| 2.1.3 主要试剂 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 鳞茎冷处理试验 |
| 2.2.2 外植体消毒试验 |
| 2.2.3 丛生芽途径诱导试管球 |
| 2.2.4 愈伤组织的诱导和再分化 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 鳞茎冷处理时间对离体诱导的影响 |
| 2.3.2 鳞茎消毒方式对污染和试管球诱导的影响 |
| 2.3.3 不同激素配比对丛生芽途径诱导试管球的影响 |
| 2.3.4 不同激素配比对愈伤组织诱导及再分化的影响 |
| 2.4 结论与讨论 |
| 2.4.1 冷处理对带鳞茎盘的鳞片诱导试管球的影响 |
| 2.4.2 头孢拉定溶液对鳞茎盘消毒处理的影响 |
| 2.4.3 激素对带鳞茎盘的鳞片诱导试管球的影响 |
| 2.4.4 激素对鳞片诱导愈伤组织和再分化的影响 |
| 2.4.5 冷处理时间、鳞片位置对鳞片愈伤组织诱导和再分化的影响 |
| 2.4.6 外植体类型对试管球诱导的影响 |
| 第三章 崇明水仙试管球高频增殖技术体系的建立 |
| 3.1 材料 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 激素配比试验 |
| 3.2.2 蔗糖浓度试验 |
| 3.2.3 活性炭浓度试验 |
| 3.2.4 试管球生根试验 |
| 3.2.5 炼苗移栽 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 不同激素配比对增殖的影响 |
| 3.3.2 不同蔗糖浓度对增殖的影响 |
| 3.3.3 不同活性炭(AC)浓度对增殖的影响 |
| 3.3.4 不同 NAA 浓度对生根的影响 |
| 3.3.5 栽培条件对试管球移栽成活率的影响 |
| 3.4 结论与讨论 |
| 3.4.1 激素对增殖的影响 |
| 3.4.2 蔗糖对增殖的影响 |
| 3.4.3 活性炭(AC)对增殖的影响 |
| 3.4.4 活性碳(AC)对生根的影响 |
| 第四章 崇明水仙离体脱毒技术体系的建立 |
| 4.1 材料及试剂 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 仪器和设备 |
| 4.1.3 主要试剂 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 热处理＋DHT 处理脱除病毒 |
| 4.2.2 DHT＋病毒唑处理脱除病毒 |
| 4.2.3 脱毒苗的病毒检测 |
| 4.3 结果与分析 |
| 4.3.1 热处理＋DHT 处理的脱毒结果 |
| 4.3.2 DHT＋病毒唑处理的脱毒结果 |
| 4.4 结论与讨论 |
| 4.4.1 病毒唑对病毒的脱除作用 |
| 4.4.2 DHT 对病毒的脱除作用 |
| 4.4.3 热处理＋DHT 处理脱除崇明水仙病毒的效果 |
| 4.4.4 DHT+病毒唑培养脱除崇明水仙病毒的效果 |
| 4.4.5 其他脱毒途径的探索 |
| 总结论 |
| 图版说明 |
| 参考文献 |
| 图版Ⅰ试管球诱导 |
| 图版Ⅱ试管球增殖、生根、移栽 |
| 图版Ⅲ崇明水仙病毒病症状及脱毒处理效果 |
| 详细摘要 |
（10）我国49种线状植物病毒分子鉴定及其基因组研究（论文提纲范文）
| 1 植物病毒检测与鉴定技术的建立 |
| 2 植物病毒全基因组序列扩增技术的建立 |
| 2.1马铃薯Y病毒属成员全基因组序列扩增技术[4-7] |
| 2.1.1 3’-RACE |
| 2.1.2 病毒中间序列的简并引物PCR扩增 |
| 2.1.3 5’-RACE |
| 2.2 麝香石竹潜隐病毒属成员全基因组序列扩增技术 |
| 2.3马铃薯X病毒属成员全基因组序列扩增技术[8-9] |
| 2.4葱X病毒属成员基因组部分序列扩增技术[11-12] |
| 3 植物病毒种类鉴定 |
| 4 植物病毒基因组序列测定 |
| 5 结束语 |
四、中国水仙病毒的提纯（论文参考文献）
- [1]天然产物（-）-γ-Lycorane的全合成研究[D]. 庞易英. 江西科技师范大学, 2020(02)
- [2]双抗体夹心ELISA法检测上海崇明水仙的5种病毒[J]. 卞黎霞. 上海农业学报, 2016(06)
- [3]水仙花叶病毒RT-PCR检测方法的建立及应用[J]. 沈建国,高芳銮,蔡伟,于文涛,虞赟,李敏,闫诚. 中国农学通报, 2012(31)
- [4]福建漳州水仙病毒病的病原鉴定及两病毒基因组全序列分析[D]. 林双庆. 福建农林大学, 2012(03)
- [5]漳州水仙花产业关键技术研究[D]. 戴丽云. 福建农林大学, 2011(11)
- [6]水仙花叶病毒病研究概况[J]. 何炎森. 中国农学通报, 2009(24)
- [7]百合、水仙病毒分子检测及脱毒技术研究[D]. 刘博. 中国农业科学院, 2009(10)
- [8]侵染水仙的虎眼万年青花叶病毒外壳蛋白的原核表达、抗血清制备及应用[J]. 郑红英,鲁宇文,沈嘉乐,林林,陈炯,陈剑平. 浙江农业学报, 2009(03)
- [9]崇明水仙试管成球及离体脱毒技术研究[D]. 杨柳燕. 南京林业大学, 2008(09)
- [10]我国49种线状植物病毒分子鉴定及其基因组研究[J]. 陈剑平,陈炯,郑红英,林林,程晔,史雨红,鲁宇文. 植物保护, 2007(05)