一、体外培养的成骨细胞与珊瑚复合的实验研究（论文文献综述）
尹怡赫[1]（2021）在《3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料的制备及性能研究》文中研究指明[目的]研究3D打印熔融沉积成型技术制备纳米氧化锌珊瑚羟基磷灰石聚己内酯（nmZnO/CHA/PCL）抗菌人工骨支架材料的相关工艺,制备出具有良好力学性能及持久抗菌性能的个性化骨修复材料,并通过体外实验研究3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料对小鼠胚胎成骨细胞前体细胞增值黏附的影响,探讨其生物相容性。[方法]1.纳米氧化锌珊瑚羟基磷灰石（nmZnO/CHA）的制备:（1）以天然珊瑚和磷酸氢二铵为原料,通过“水热交换反应”,得到珊瑚羟基磷灰石颗粒。（2）以硝酸锌和珊瑚羟基磷灰石为原料,以聚乙二醇-6000（PEG-6000）为分散剂,通过溶胶-凝胶法制备出nmZnO/CHA复合材料。应用SEM检测分析nmZnO/CHA复合材料的表面形貌特征。2.3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料的制备:（1）聚己内酯（Polycaprolactone,PCL）多孔支架的制备:①3D打印nmZnO/CHA/PCL抗菌人工骨支架的模型设计:参考商品骨环的尺寸,利用solidworks三维设计软件设计出外径为10mm,内径为3mm,高为3mm的圆环形仿人体松质骨骨小梁结构的人工骨支架;②将设计好的模型文件另存为3D打印机识别可打印的STL格式的文件,导入3D打印机,通过熔融沉积成型技术,打印出聚己内酯多孔支架。（2）聚己内酯多孔支架表面nmZnO/CHA涂层的制备:①将聚己内酯颗粒加入到丙酮溶液中,搅拌,使聚己内酯充分溶于丙酮中,然后加入nmZnO/CHA复合材料,搅拌混合均匀,制备出nmZnO/CHA/PCL浆液。②将聚己内酯多孔支架浸入到nmZnO/CHA/PCL浆液中,采用“浸涂法”,使nmZnO/CHA复合材料涂覆在聚己内酯支架表面,然后将复合材料支架置于40℃干燥箱内24h,制备出个性化的nmZnO/CHA/PCL抗菌人工骨支架。并用电子万能材料实验机及压汞仪对其力学性能、孔隙率和孔径分布进行检测和分析。3.3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料对MC3T3-E1成骨活性的研究:取第四代生长良好的MC3T3-E1细胞,以5×104/ml的浓度接种到nmZnO/CHA/PCL抗菌人工骨支架表面,培养3d后,利用钨灯丝扫描电镜观察细胞在支架上的生长黏附情况。[结果]①利用溶胶-凝胶法对珊瑚羟基磷灰石（CHA）进行纳米氧化锌（nmZnO）改性,当CHA:硝酸锌:PEG-6000为8:2:1时,SEM检测结果显示nmZnO/CHA复合材料表面熔附的nmZnO颗粒粒径大小及分布最为理想,粒径均控制在100nm以下且未出现明显团聚现象。②利用电子万能材料实验机测试复合支架材料的力学性能,通过计算得出其弹性模量为30.15±4.13MPa;利用压汞仪测得复合支架材料的孔隙率为48.05%,孔径分布为25-50μm和50-200μm。③扫描电镜显示,MC3T3-E1细胞在复合支架材料表面生长形态良好,紧密的黏附于支架表面。[结论]①采用溶胶-凝胶法,可以制备出nmZnO/CHA复合材料。②nmZnO/CHA/PCL抗菌人工骨支架具有理想的孔隙率和孔径分布,以及良好的力学性能。③nmZnO/CHA/PCL抗菌人工骨支架细胞相容性良好,可作为骨组织工程的支架材料。
胡义敏[2]（2018）在《乳液模板法构建微纳杂化骨修复材料及其生物相容性研究》文中指出本文以制备骨缺损修复材料为目的,针对天然高分子与合成高分子溶解共存的难题,实验采用乳液模板法 合有机无机杂化技术,制备骨缺损修复用多孔支架。本文主要的研究内容和结果如下:1.羟基磷灰石粒子稳定的水溶油溶微纳杂化仿生支架的制备及表征。实验采用乳液模板的方法,以羧甲基壳聚糖（CMCS）为水相、纳米羟基磷灰石（nHAP）为亲水性乳化剂,以聚乳酸羟基乙酸（PLGA）的二氯甲烷溶液为油相,以戊二醛为交联剂,构建水包油型（O/W）乳液,利用高速分散机分散水油相,结合溶剂蒸发和冷冻干燥技术制备骨修复用多孔支架。实验以nHAP的含量为变量,根据nHAP的质量百分数分别记为SO（Owt%）,S1（0.75wt%）,S2（1.5wt%）,S3（3.0wt%）;同时,将药物淫羊藿苷（ICA）分别载入S1,S2,S3支架中,对应记为I-S1,I-S2,I-S3。实验通过SEM、FTIR、XRD、TG-DSC及孔隙率、溶胀率、机械性能、体外矿化、药物释放、BSA蛋白吸附和溶血实验以及细胞学实验研究其性能。研究发现:戊二醛与CMCS发生化学交联,有效固定了乳液模板;支架具有微纳多级结构、孔隙相互连通,PLGA微球和nHAP均匀分布在支架上;支架热稳定性良好,随nHAP质量百分比增加,材料的孔密度增加,机械性能增强,孔隙降低,溶胀减缓;载药后具有药物缓释性能;生物相容性和活性良好,材料具有较低的溶血率,具有促进成骨细胞增殖和分化的潜力。综合考虑S3和I-S3性能优异。2.鲍鱼壳粒子稳定的水溶油溶微纳杂化仿生支架的制备及表征。采用乳液模板的方法,以羧甲基壳聚糖（CMCS）和胶原（Col）的混合溶液为水相、鲍鱼壳微粒（AS）为乳化剂,以聚乳酸羟基乙酸（PLGA）的二氯甲烷溶液为油相,以戊二醛为交联剂,构建水包油型（O/W）乳液,通过高速乳化、溶剂蒸发和冷冻干燥制备骨修复用多孔支架。实验以Col、AS含量为变量,进行正交实验优化研究方案,并对其进行理化表征,结果表明:随Col含量增加,支架孔隙结构变差,实验选用孔隙相互连通、孔径均一的C0（不含Col:Sl,S2,S3）和C1（含有2.45wt%Col:C+S1,C+S2,C+S3）进一步研究,结果表明:PLGA微球和AS微粒均分散在支架表面;戊二醛成功固定了乳液模板;材料具有一定的热稳定性,随AS含量增加,机械性能增强,孔隙率和溶胀率降低,降解速率减慢;材料溶血率较低,并且可以提供成骨细胞黏附、增殖和分化所需的微环境。综合考虑,S3和C+S3性能较优。通过乳液模板法仿生构建的两种材料,生物相容性良好,均能促进成骨细胞迁移,增殖和定向分化,并且可以提供细胞生长所需的表面微环境以及组织修复和重建的力学支撑,在缺损组织修复领域,有望发挥其功能特性,成为具有前景的替代材料。
夏扬[3]（2008）在《海藻酸钠—明胶共混体系为载体的可注射式组织工程骨的研究》文中进行了进一步梳理目的:探讨海藻酸钠—明胶共混体系为载体的可注射式组织工程骨的理化性能、生物相容性及其在临床上的应用前景。方法:从兔骨髓中分离骨髓间充质干细胞,进行体外培养、分离和扩增,诱导向成骨细胞分化并进行检测和观察。探讨了不同浓度的氯化钙溶液对成骨细胞的影响作用。研究不同配比共混体系的理化性能和不同消毒方法对其的影响作用和成骨细胞在体系中的生物学行为。在从细胞遗传学角度考察了共混体系安全性的基础上,进行动物实验,观察材料的组织相容性和不同时间段新骨的形成。结果:骨髓间充质干细胞经诱导培养后分化为成骨细胞,Ca2+浓度对成骨细胞的代谢活性有影响作用。共混体系理化性能随不同配比的浓度、温度有所变化。各种消毒方法对其理化性能均有影响,其中,以高压蒸汽法对海藻酸钠粉末的影响最小。成骨细胞在共混体系中,呈悬浮状生长并增殖。植入共混体系/成骨细胞凝胶的动物,未见到有染色体型畸变。凝胶注射植入实验兔皮下后有软骨样组织和骨组织形成,并以软骨化骨的形式修复了实验动物的颅骨极限缺损。结论:骨髓间充质干细胞可通过体外诱导培养分化为成骨细胞。不同浓度和作用时间的氯化钙对成骨细胞具有影响作用。海藻酸钠—明胶共混体系的理化性能可满足作为成骨细胞载体的需要。高压蒸汽对海藻酸钠粉末进行消毒的方法对共混体系的理化性能影响最小。共混体系无明显致染色体型畸变作用。通过注射方式在动物软组织中有异位成骨作用。可以用来进行骨缺损的修复。
付志厚[4]（2008）在《组织工程化骨修复人工关节周围骨缺损的实验研究》文中研究指明研究背景:Branemark于20世纪60年代提出了骨整合的概念,即在光镜水平下正常的改建骨和假体之间无软组织,假体与骨组织直接接触,其承受的负荷能通过直接接触持续不断地传递,并分散到骨组织中。骨整合被认为是人工关节置换术后的理想状态。生物固定性假体要获得满意的远期效果,依赖于假体骨组织间的紧密接触、良好的骨长入和一定的骨生长时间。然而许多人工关节置换术或翻修术患者常合并有假体周围骨缺损,为恢复骨性结构并重建骨的稳定性,骨移植已成为修复骨缺损的一个必要手段。临床上根据骨缺损的大小、性质,可应用自体骨移植、异体骨移植治疗。但由于自体骨移植可提供的骨量有限,移植骨在形态、大小和数量上难以满足缺损处的要求,特别是巨大的或特殊部位骨缺损的修复,故其应用常常受到限制。1984年,Sloof等首先报告应用异体颗粒骨代替自体骨,打压植骨修复髋臼骨缺损。1993年,Ling等用同样的技术行股骨骨缺损的修复重建,从此该项技术被广泛的应用于人工关节置换术及翻修术中。但由于冻干的异体骨无成骨细胞,骨诱导活性低,新骨爬行替代及塑性的时间长,有移植骨吸收、塌陷、假体松动等并发症的可能。上世纪八十年代兴起的骨组织工程学为骨缺损的修复提供了一个全新的思路和方法。组织工程涉及三个要素:即种子细胞、生物活性因子、支架材料。组织工程技术通过获取具有成骨活性的组织,经分离、培养、扩增,诱导为成骨细胞,并在体外与可吸收的支架材料复合回植于体内,依靠种子细胞的成骨作用及生物材料的降解吸收,最终形成骨组织。应用组织工程化骨修复长骨节段性骨缺损、颅骨缺损已有较多的报告,而应用组织工程化骨修复人工关节周围骨缺损,并观察其对假体骨界面骨整合的研究目前国内外尚未见文献报告。目的:1.建立骨髓间充质干细胞（MSCs）的分离、培养、骨向诱导方法;2.体外骨髓MSCs与CHA（CHA）复合构建组织工程化骨,观察其修复植入体周围松质骨骨缺损的的效果。3.观察组织工程化骨修复植入体周围骨缺损对植入体-骨界面骨整合的影响。4.研究BMP促进组织工程化骨修复人工关节周围骨缺损,提高假体-骨界面骨接触的能力。方法:1.采用Ficoll（1.073g/ml）密度梯度离心加贴壁培养法分离兔骨髓MSCs,并培养、扩增;将第4代骨髓MSCs应用骨诱导培养液（10-8mol/L地塞米松+10mmol/L甘油磷酸钠+ 50mg/L维生素C）培养,骨向诱导。2.诱导后的成骨细胞应用细胞形态学、细胞活力检测、细胞生长及增殖曲线、ALP活性检测、矿化结节茜素红染色、I型胶原免疫组化与ALP鉴定。3.于兔左侧股骨髁制作一0.6×1.2cm的穿透性松质骨骨缺损,植入钛合金（Ti-6Al-4V）植入体于骨缺损的中央,在体外将同种异体骨髓MSCs与CHA复合构建组织工程化骨,修复植入体周围骨缺损,同法右侧骨缺损处仅植入CHA为对照组,术后4、8、12周行X射线检查、生物力学测试、放射性核素骨扫描、脱钙骨组织学HE染色,观察其骨缺损修复效果。4.并于术后4、8、12周行X射线检查、剖面观察、植入体剪切强度测定、植入体表面扫描电镜、植入体骨界面能谱分析、不脱钙骨组织学Van Gieson苦味酸-品红染色及图像分析系统计算植入体骨接触率,观察组织工程化骨对植入体-骨界面骨整合的影响。5.行犬人工全髋关节置换术,制作股骨骨缺损模型,随机分为三组,分别用rhBMP-2+自体骨髓MSCs +CHA、CHA+自体骨髓MSCs、CHA修复骨缺损,术后3个月处死动物,行X射线检查、生物力学测试、不脱钙骨组织学Van Gieson苦味酸-品红染色及图像分析系统分析计算假体骨接触率。结果:1.应用密度梯度离心结合贴壁培养法成功的分离、培养、扩增兔骨髓MSCs,培养3天后细胞的形态由圆形转为梭形;MSCs生长曲线分为生长潜伏期、对数生长期和平台期;MSCs表面标志物SH3呈阳性。2.骨诱导后细胞培养5-8天,细胞形态逐渐变为多角形,呈现聚集生长。诱导后细胞ALP活性较未诱导组显着性增高。骨向诱导后第三代细胞ALP染色、I型胶原免疫组化染色均呈阳性,茜素红染色可见典型的矿化结节。3.体外构建组织工程化骨修复植入体周围松质骨缺损结果:术后4、8、12周大体观察与剖面观察,实验组随时间的延长可见骨修复。X线表现为CHA颗粒吸收,被新生骨取代。生物力学结果示术后12周股骨髁最大压力载荷、载荷/应变比值均较对照组高,最大应变位移较对照组低（P<0.01）。放射性核素骨扫描实验组不同时间点ROI平均计数均较对照组高,有显着性差异（P<0.01）。实验组术后8周内ROI平均计数为快速增长期,术后8周开始进入缓慢增长期,12周达到峰值。组织学观察,实验组术后4周植入区内CHA颗粒之间有岛状新生骨组织;术后8周植入区内可见支架材料部分吸收,遗留空间被新生骨组织取代,骨缺损基本得到修复;术后12周可见明显编织骨、板层骨及骨小梁形成,CHA大部分吸收,但仍可见到未吸收的HA颗粒。对照组术后4、8周无新生骨,术后12周有少量的新生骨。4.组织工程化骨对植入体-骨界面骨整合的影响:术后4、8、12周大体观察与剖面观察,见实验组随时间的延长骨缺损得到修复,植入体周围无间隙。X线检查见CHA颗粒吸收,被新生骨取代,植入体周围为新生骨,植入体位置良好,而对照组植入体周围主要为高密度的CHA颗粒。生物力学结果示不同时间点植入体骨界面剪切强度较对照组增高（P<0.01）。扫描电镜观察,可见实验组植入体表面孔隙内无定形物质随时间的变化而逐渐增加。能谱分析术后4周实验组Ca、P元素百分含量较对照组增高,8、12周Ca元素百分含量较对照组高（P<0.05）,P元素百分含量与对照组比较无显着性差异;Ca/P比值随时间的延长逐渐增高,于术后12周达2.02（P<0.01）。不脱钙骨组织学观察,术后4周对照组植入体-骨界面为厚而疏松的软组织,实验组界面为结缔组织纤维膜,新生骨偶见;术后8周对照组植入体-骨界面为结缔组织纤维膜,厚薄不一,界面较松,周围可见少量新生骨组织,实验组界面有新骨沉积,植入体表面有部分点状骨接触;术后12周对照组植入体-骨界面为结缔组织纤维膜,界面有少量点状骨接触,实验组界面主要为骨组织,部分界面可见连续性骨接触,甚至呈环形包绕。术后4周对照组与实验组植入体骨接触率为0,术后8周、12周植入体骨接触率均高于对照组（P<0.01）。5. rhBMP-2促进组织工程化骨修复假体周围骨缺损及假体-骨界面骨整合:术后3个月X线表现BMP组新骨生成明显,CHA颗粒完全吸收,假体稳定;细胞组有大量的新骨形成,但仍有CHA颗粒影,假体稳定;对照组新骨生成不明显,假体周围有透亮带。对照组、细胞组、BMP组假体骨界面剪切强度无显着性差异。不脱钙骨组织学观察,BMP组假体骨界面为骨组织充填,部分界面可见连续性骨接触,仅见少量纤维组织,新生骨以成熟的板层骨为主,与假体结合紧密。细胞组假体骨界面主要为骨组织充填,可见较多的骨接触,有部分纤维结缔组织。对照组假体骨界面为纤维结缔组织,边缘有少量编织骨,骨接触较少。图形分析计算对照组、细胞组、BMP组假体界面骨接触率（%）分别为15.47±8.05、38.78±19.40、67.23±18.36（P<0.01）。结论:1.本研究成功的分离、培养了兔骨髓MSCs,经骨向诱导后表达高水平的ALP活性与I型胶原,并能矿化细胞外基质,证实已分化为成熟的成骨细胞。2.骨髓MSCs骨向诱导后与CHA复合可修复植入体周围松质骨骨缺损,移植物血管化、骨代谢活性前8周为快速发展阶段,8-12周进入缓慢发展渐趋成熟阶段。3.骨髓MSCs骨向诱导后与CHA复合修复植入体周围骨缺损,促进新骨生成,改善植入体-骨界面骨整合的作用。4.植入体骨界面能谱分析示随着时间的延长Ca、P元素百分比含量有增高趋势,Ca/P比值随着时间的延长逐渐接近正常骨组织,表明早期为新生骨形成阶段,逐渐转为骨改建与成熟阶段。5. BMP促进组织工程化骨修复人工关节周围骨缺损,改善早期假体骨界面骨整合率。
高瞻[5]（2008）在《基于细胞膜片技术构建组织工程化骨实验研究》文中进行了进一步梳理骨组织工程研究为肿瘤切除、创伤、先天性畸形等所致骨缺损的修复提供了新思路,其中种子细胞是核心问题之一。本研究以骨髓间充质成骨细胞为种子细胞,通过体外培养,构建出骨髓间充质成骨细胞膜片。并提出了新的骨髓间充质成骨细胞聚集体构建方法——骨髓间充质成骨细胞膜片（Bone marrow stromal osteoblast cell sheet）技术,其主要策略是提取骨髓间充质干细胞,体外扩增后,诱导为骨髓间充质成骨细胞,体外扩增纯化骨髓间充质成骨细胞,按照特定的培养程序在体外构建出骨髓间充质成骨细胞膜片,扩增的骨髓间充质成骨细胞在细胞分泌的细胞外基质表面实现三维立体生长,它的特点在于:①本研究构建的骨髓间充质成骨细胞膜片分为三层:富含基质层、中间层和富含细胞层,从而使形成的细胞膜片具有生长的动力性和方向性;②保持了扩增细胞良好的功能表型,在细胞数量增加的同时兼顾了细胞的分化能力;③良好的生物相容性和低免疫源性;④较高的种子细胞利用效率;⑤通过与天然支架材料支撑赋形,可以进行特定形态的组织构建。本研究对构建骨髓间充质成骨细胞膜片的理化性质、组织学结构和生化成分进行了分析;通过体外三维构建和动物实验评估了骨髓间充质成骨细胞膜片在体外形成骨样组织的能力和在体内形成特定形态骨样组织的能力。进而提出新的骨髓间充质成骨细胞膜片构建策略,研究不同形态骨样组织的构建方法,探索新的体外构建移植体修复骨缺损的思路。实验一骨髓间充质成骨细胞膜片体外构建目的:本实验对构建骨髓间充质成骨细胞膜片组织学结构和生化成分进行了分析;通过体外三维构建评估了骨髓间充质成骨细胞膜片体外骨样组织的形成能力。方法:骨髓间充质成骨细胞膜片的体外构建:切取兔四肢长骨干骺端,通过离心分层法制备原代骨髓间充质干细胞,将原代细胞进行细胞计数并分为六等分,平均接种至六个75 cm2培养瓶中,培养瓶底壁有80%被骨髓间充质干细胞贴满后,加入诱导液。待细胞长满皿底,消化,搜集细胞。将获取细胞高密度接种至三个九厘米直径培养皿中。孵育十四天后,观察骨髓间充质成骨细胞膜片的形成情况,并进行组织学染色和电镜观察。结果:经过体外孵育,骨髓间充质成骨细胞膜片为半透明膜状物,有弹性,内富含有质硬的白色结节,可用金属镊钳夹操作。HE染色证实有骨基质形成,并形成类似骨陷窝样的组织结构。Von kossa染色证实有矿化成分在基质中合成。观察:发现骨髓间充质成骨细胞膜片分为三层:富含基质层、中间层和富含细胞层。结论:提出骨髓间充质成骨细胞膜片的两极学说（静止极和增殖极）,建立了一种新的骨髓间充质成骨细胞膜片构建技术,骨髓间充质成骨细胞膜片是一种由骨髓间充质成骨细胞和基质（自行分泌）组成的聚集体,相信它在进一步的体外自体骨移植体的构建中具有广阔的应用价值。实验二骨髓间充质成骨细胞膜片/管状珊瑚复合体移植裸鼠皮下成骨实验研究目的:在新的骨髓间充质成骨细胞膜片构建技术下,观察骨髓间充质成骨细胞膜片在无免疫动物体内发育成管状骨样组织的能力。方法:静态培养条件下,骨髓间充质成骨细胞膜片的静止极朝向管状天然珊瑚,将其均匀缠绕在管状珊瑚外表面,进行卷层样复合,经体外孵育4周后,观察聚集体之间的融合情况,并通过组织学染色观察组织成熟情况。最后将骨髓间充质成骨细胞膜片/珊瑚复合体植入裸鼠皮下,分为8周组、12周组,了解成骨情况。结果:大体观察,体外孵育四周后,在管状珊瑚体外周部分的骨髓间充质成骨细胞膜片卷层之间发生了组织融合,并形成了较成熟的骨样组织,而在管状珊瑚体的中央部分,有非常明显成熟的骨样组织形成。结论:在良好营养交换的环境下,骨髓间充质成骨细胞膜片具备继续成熟并发育为骨样组织的能力,调整骨髓间充质成骨细胞膜片的卷层方向（静止极和增殖极的朝向）可为骨髓间充质成骨细胞膜片的体外三维构建提供新的塑形方法。实验三骨髓间充质成骨细胞膜片/种植体/珊瑚复合体移植裸鼠皮下成骨实验研究目的:利用新的骨髓间充质成骨细胞膜片构建技术,在无免疫动物体内构建出内有种植体的骨样组织,以探索骨髓间充质成骨细胞膜片体内构建带有种植体骨样组织的可行性。方法:按实验一所述方法构建出的骨髓间充质成骨细胞膜片后,以构建好的种植体/珊瑚复合体为赋形支撑体,骨髓间充质成骨细胞膜片的增殖极朝向种植体/珊瑚复合体,将其均匀缠绕在种植体/珊瑚复合体外表面。体外孵育四周后,观察聚集体之间的融合情况,最后将骨髓间充质成骨细胞膜片/种植体/珊瑚复合体植入裸鼠皮下,在8周后,取出标本。从大体形态、组织学结构等方面评价形成骨样组织情况。结果:通过此策略构建的骨髓间充质成骨细胞膜片/种植体/珊瑚复合体具有良好的生物相容性。形成的骨样组织保持着良好的初始外形,组织学结构类似于天然骨组织,含有丰富的矿化物质和胶原纤维。结论:骨髓间充质成骨细胞膜片在体内具有良好的骨样组织形成能力。形成的组织结构均匀,细胞表型维持良好,并为下一步颌骨缺损修复探索了新的方法。实验四骨髓间充质成骨细胞膜片贴附移植实验研究目的:研究骨髓间充质成骨细胞膜片贴附后成骨的构建方法。方法:按实验一所述方法构建出骨髓间充质成骨细胞膜片后,以圆片状珊瑚为支撑体,将其均匀平铺在珊瑚一面。体外短时间孵育,使骨髓间充质成骨细胞膜片与珊瑚牢靠贴附后,将构建的圆片状移植体植入细胞供体动物（新西兰兔）去除骨膜的颅骨表面。体内孵育8周、12周后,取出标本。从大体形态、组织学结构等方面了解贴附成骨情况。结果:通过上述策略,可以形成形态稳定的圆盘状骨样组织,有一定的机械性能,有大量的新骨样组织形成。结论:此策略所形成的贴附后骨样组织与膜状成骨、软骨成骨贴附移植后的情况不同。实验五骨髓间充质成骨细胞膜片修复兔颅骨极限缺损的实验研究目的:运用骨髓间充质成骨细胞膜片技术,探索在无支撑体条件下修复兔颅骨极限缺损的方法。方法:按实验一所述方法构建出骨髓间充质成骨细胞膜片。同时设自体髂骨移植的阳性对照组和单纯珊瑚材料的阴性对照组。将其分别植入兔颅骨极限缺损处,8周和12周后采用X线片,HE染色、Masson’s三色染色法等观察、比较骨缺损修复的情况。结果:组织学结构显示骨髓间充质成骨细胞膜片构建出了骨样组织。骨髓间充质成骨细胞膜片修复颅骨缺损的能力强,且与自体髂骨修复的情况相近。珊瑚组材料无成骨能力。结论:骨髓间充质成骨细胞膜片构建的组织工程骨可成为一种良好的骨缺损修复材料。实验六骨髓间充质成骨细胞膜片/种植体/珊瑚复合体修复羊下颌骨缺损的实验研究目的:利用新的骨髓间充质成骨细胞膜片构建技术,探索构建特定形态大块骨样组织的思路,并进行大动物下颌骨缺损修复。方法:以山羊为动物模型,按实验一所述方法构建出骨髓间充质成骨细胞膜片后,以珊瑚为支撑体构建山羊部分下颌骨外形,并将种植钉放入支撑材料中,用此珊瑚/种植钉作为骨髓间充质成骨细胞膜片内支撑体。骨髓间充质成骨细胞膜片的增殖极朝向支撑体,然后,将骨髓间充质成骨细胞膜片小心缠绕在内支撑体外周。进行体外孵育4周后。将此方法获得的部分下颌骨移植体植入制作好的供体动物下颌骨缺损处,12周后,取出标本,进行大体外形、组织学形态观察,了解大动物下颌骨缺损修复情况。结果:通过此策略,在内支撑体外构建的移植体具有稳定的外形,能在动物缺损部位形成理想的外形,组织学结构显示构建的骨样组织具有较好的质量。结论:骨髓间充质成骨细胞膜片加内支撑体赋形是构建特定形态骨样组织的新策略。具有较好的组织形成能力和外形稳定性,使它为大块骨缺损修复提供了新的思路。
张森林[6]（2008）在《珊瑚与骨髓基质细胞和富血小板血浆构建组织工程骨的实验研究》文中进行了进一步梳理目前临床骨缺损常采用自体骨或同种异体骨等移植修复。自体骨移植存在着骨量有限和供区并发症等缺陷,同种异体骨移植有传播疾病和引发免疫排斥反应等不足。应用骨组织工程技术可避免自体骨或同种异体骨移植中存在的缺陷或不足,为骨缺损修复提供了一种新的方法。因此,自组织工程概念提出以来,骨组织工程就成为研究的热点并得到了迅速发展。骨组织工程的研究包括三个方面:支架材料、种子细胞和生长因子。支架材料应具有多孔结构,为种子细胞提供足够的粘附和迁移空间,也为营养物质和代谢产物的运输提供通道。珊瑚是珊瑚虫死亡后遗留的外骨骼所形成的物质,呈三维多孔状结构,孔洞之间相互交通,主要成分是碳酸钙,类似无机骨,具有良好的生物相容性和可降解性,是骨组织工程较理想的支架材料之一。富含血小板血浆（platelet rich plasma,PRP）是全血经过浓集、分离而得到的血液制品。其特点是PRP的血小板浓度比全血的血小板浓度升高4-5倍以上,含有高浓度的促进骨组织和软组织再生修复的生长因子,可作为内源性的生长因子而应用于骨组织工程。骨髓基质细胞（marrow stromal cells, MSCs）具有多分化潜能,在特定条件下能向成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等分化,增殖能力强,来源广泛,取材方便,供区损伤小,是骨组织工程较理想的种子细胞之一。本研究将珊瑚作为支架、MSCs作为种子细胞、PRP作为内源性生长因子构建组织工程骨,通过体外培养、异位成骨和骨缺损修复等系列研究,来评价PRP对珊瑚支架上MSCs的增殖和成骨的影响;用PRP和MSCs在体外构建组织工程膜片并用其包裹珊瑚支架,通过异位成骨等研究,来评价其骨修复能力。实验一富血小板血浆对珊瑚支架上骨髓基质细胞增殖和成骨分化的影响目的:评价PRP对珊瑚支架上MSCs的增殖和成骨分化的影响。方法:从兔髂骨骨髓中分离出MSCs,体外培养、扩增和诱导。取50μl细胞浓度为1.0×107/ml的MSCs悬液与同一供体来源的50μl PRP混合,滴加到直径8 mm、厚2 mm的珊瑚圆片上,再滴加10μl的牛凝血酶溶液,形成珊瑚/MSCs/PRP复合物,在饱和湿度、37oC、5%CO2条件下培养。以同样数量的MSCs或PRP制备的珊瑚/MSCs复合物和珊瑚/PRP复合物在体外培养作对照。8天和14天后,通过MTT法检测PRP对珊瑚支架上MSCs增殖的影响;通过对培养液中碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性和骨钙素（osteocalcin, OC）含量检测,评价PRP对珊瑚支架上MSCs成骨分化的影响;通过扫描电镜观察MSCs在珊瑚支架上附着、生长和增殖情况。结果:珊瑚/MSCs/PRP组的光密度值明显大于珊瑚/MSCs组（p<0.05）;珊瑚/MSCs/PRP组培养液中的ALP活性和OC含量明显大于珊瑚/MSCs组（p<0.05）;扫描电镜显示:珊瑚/MSCs/PRP组,体外培养8天,大量MSCs附着于珊瑚表面和孔洞壁,可见孔洞内有血小板和纤维网格样结构存在;14天,珊瑚表面和孔洞有大量MSCs及其分泌的骨基质。珊瑚/MSCs组,体外培养8天,珊瑚表面和孔洞壁有少量MSCs附着;14天,珊瑚表面及其孔洞壁附着的MSCs周围出现分泌的骨基质。珊瑚/PRP组,体外培养8天和14天,珊瑚表面及其孔洞内有大量的血小板和纤维网格样结构存在,未见MSCs和骨基质形成。结论:PRP促进了珊瑚支架上MSCs的增殖和成骨分化。实验二富血小板血浆对珊瑚支架上骨髓基质细胞异位成骨的影响目的:评价PRP对珊瑚支架上骨髓基质细胞异位成骨的影响。方法:从兔髂骨骨髓中分离出MSCs,体外培养、扩增和诱导。取50μl细胞浓度为1.0×108/ml的MSCs悬液与同一供体来源的50μl PRP混合,滴加到直径8 mm、厚2 mm的珊瑚圆片上,再滴加10μl的牛凝血酶溶液,形成珊瑚/MSCs/PRP复合物。以同样数量的MSCs或PRP制备珊瑚/MSCs复合物和珊瑚/PRP复合物。将三种复合物植入同一裸鼠的背部皮下,术后4周和8周取材。通过大体观察、组织学观察和组织形态测量分析来评价其异位成骨情况。结果:珊瑚/MSCs/PRP植入后4W,在珊瑚表面及其孔洞内有大量的软骨形成;术后8W,珊瑚表面及其孔洞内有大量的板层骨形成,部分区域仍有软骨存在,珊瑚占据的区域明显缩小。珊瑚/MSCs植入后4W,珊瑚表面及其孔洞内也有软骨形成,并有纤维结缔组织长入;术后8W,珊瑚表面及其孔洞内有板层骨和纤维结缔组织充填。珊瑚/PRP植入后4W和8W,未见骨或软骨形成,珊瑚周围及其孔洞内有大量纤维组织充填,随着时间的推移,珊瑚占位逐渐缩小。珊瑚/MSCs/PRP组形成的软骨或骨质的量明显多于珊瑚/MSCs组（p<0.05）。结论:PRP促进了珊瑚支架上MSCs异位成骨。实验三珊瑚/骨髓基质细胞/富血小板血浆修复兔颅骨缺损目的:评价珊瑚/MSCs/PRP修复骨缺损的效果。方法:从兔髂骨骨髓中分离出MSCs,体外培养、扩增和诱导。取300μl细胞浓度为1.0×108/ml的MSCs悬液与同一供体来源的300μl PRP混合,滴加到直径15 mm、厚2 mm的珊瑚圆片上,再滴加100μl的牛凝血酶溶液,形成珊瑚/MSCs/PRP复合物。用其修复MSCs和PRP来源兔的直径15 mm颅骨缺损。自体颅骨或单纯珊瑚植入作对照。术后6周和12周,通过大体观察、X线片观察、组织学观察和组织形态测量分析,评价其骨修复效果。结果:大体观察:珊瑚/MSCs/PRP组,术后6周,缺损修复区珊瑚孔洞内有淡红色组织充填,钳夹质地较韧,植入物周边与骨床之间无明显动度;术后12周,缺损区珊瑚支架材料消失,由硬度与周围骨床类似的组织替代,植入物与骨床完全融合。自体骨组,术后6周,缺损区再植的颅骨质地较硬,与周边骨床基本融合,无明显动度;术后12周,再植的颅骨与周边骨床完全融为一体,边界不清。单纯珊瑚组,术后6周,缺损区珊瑚支架材料清晰可见,钳夹质地较脆,植入物边界清楚,与周边骨床有轻微动度;术后12周,缺损区珊瑚支架材料消失,缺损区大部为质地较软的纤维组织充填,仅周边部质地稍硬,与周围骨床边界清楚。X线片观察:珊瑚/MSCs/PRP组,术后6周,缺损区有大块片状阻射影像,12周,缺损区呈现高密度阻射影,与周围骨床密度相近、边界欠清。自体骨组,术后6周,缺损区呈现高密度阻射影,术后12周,缺损区呈现高密度阻射影,与周围骨床密度一致,边界不清。单纯珊瑚组,术后6周,缺损区呈低密度的阻射影;12周,缺损区呈现透光影,仅周边部有少量阻射影。组织学观察:珊瑚/MSCs/PRP组,术后6周,在整个缺损区珊瑚表面及其孔洞内有大量的新骨形成;12周,缺损区珊瑚完全降解吸收,被成熟的板层骨取代,缺损表现为完全的骨修复。自体骨修复组,术后6周,再植的颅骨仍维持其原有形态和结构;12周,植入区结构与周围骨床一致,边界不清。单纯珊瑚组,术后6周,在骨床附近的珊瑚孔洞内有新骨形长入,缺损中心部珊瑚孔洞内仅有纤维组织充填;12周,缺损区珊瑚完全降解吸收,骨床附近的缺损有新骨修复,缺损中心的部分区域有充纤维组织充填,表现为不完全的骨修复。图像分析显示:术后6周和12周,珊瑚/MSCs/PRP组的成骨量明显多于珊瑚组（P<0.01）;术后12周,珊瑚/MSCs/PRP组成骨量与自体骨组相近（P>0.05）。结论:应用珊瑚作为支架材料、MSCs作为种子细胞、PRP作为内源性生长因子构建的组织工程骨修复骨缺损效果良好,与自体骨移植相近,是较理想的骨移植替代材料。实验四应用富血小板血浆和骨髓基质细胞构建组织工程细胞膜片及其异位成骨的实验研究目的:探讨应用PRP和MSCs构建组织工程细胞膜片的方法及评价膜片包裹珊瑚支架后的异位成骨能力。方法:从兔髂骨骨髓中分离出MSCs,体外培养和扩增后,取500μl细胞浓度为1.0×107/ml的MSCs悬液与500μl来自同一供体的PRP混合,滴加到六孔培养板上,再滴加150μl的牛凝血酶溶液,形成凝胶样MSCs/PRP混合物,置于孵箱内培养。第1周用DMEM完全培养液,后两周改用DMEM诱导培养液。3周后,培养板底部形成半透明胶冻样的厚约2mm的膜片。通过扫描电镜观察,了解膜片的结构情况。用膜片包裹直径8mm、厚2 mm珊瑚圆片,形成膜-支架复合体,将其植入裸鼠的背部皮下,以单纯珊瑚植入作对照。术后4周和8周取材,通过组织学观察,评价其异位成骨情况。结果:细胞-膜片具有一定的韧性和可操作性。扫描电镜观察显示:大量的纺锤样成骨细胞有规律地密集在一起,在细胞的表面有散在的颗粒样骨基质形成。组织学观察显示:术后4周和8周,膜-支架复合体组,在珊瑚支架的表面及其孔洞内有大量的软骨和骨形成,以软骨内成骨的方式成骨;单纯珊瑚植入组,珊瑚表面及其孔洞内有大量纤维结缔组织长入,未见软骨或骨形成。结论:用PRP和MSCs构建组织工程细胞膜片的方法简便,膜片包裹珊瑚支架形成的膜-支架复合体具有良好异位成骨能力。
戴江华[7]（2007）在《体内灌注诱导骨髓基质干细胞构建组织工程骨的实验研究》文中认为由创伤、感染、肿瘤、烧伤等引起的大块骨缺损是临床治疗的棘手问题,采用传统的自体骨或同种异体骨移植及生物材料填充,由于存在种种弊端,治疗效果均不理想,严重限制了其临床应用。组织工程技术的兴起为解决这一难题带来了希望,成为当前的研究热点。然而,大块组织工程骨血管化以及生长因子持续稳定的释放等关键性技术难题至今未找到理想的解决办法。显然,采用常规的思路对大块骨缺损进行修复遇到了巨大的挑战。为了找到一条可供临床用来修复大块骨缺损的组织工程之路,本研究力图探索出一条基于整体论和还原论相结合的骨组织工程研究的创新之路,并率先建立近同构模型——体内灌注诱导成骨微环境系统。基于这种认识,我们开展了以下一系列研究:第6章:山羊骨髓基质干细胞的体外培养目的:将来源于山羊的骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSC）,在特定的条件下定向诱导分化为成骨细胞,观察其生物学特性,探讨其作为骨组织工程种子细胞的可行性和应用价值。方法:抽取健康山羊骨髓采用全骨髓法进行培养扩增,传代后改用含地塞米松（10-8mol/L）,β-甘油磷酸钠（10mmo1/L）和维生C （50mg/L ）的条件培养基促使其向成骨细胞定向诱导分化。在相差显微镜、HE染色、光镜下观察细胞形态,并测定培养细胞的生长曲线（MTT法）,流式细胞术进行细胞表面特征鉴定,Gomori钙钻法进行ALP染色、Von Kossa法进行钙结节染色,同时测定细胞内ALP含量变化。结果:原代和传代培养的细胞具有活跃的增殖能力。诱导培养2-3周后,细胞生长良好,生化指标稳定,光镜下表现出与典型的成骨细胞相似的形态特征。流式细胞术证明BMSC细胞膜抗原CD29, CD44, CD105表达阳性,而CD14, CD34和HLA-DR表达阴性,ALP及钙结节染色等均为强阳性;ALP活性明显增强（P<0.01）。结论:山羊BMSC取材安全方便,在特定条件诱导下,可定向诱导分化为具有典型形态学特点和功能的成骨细胞,山羊BMSC可作为理想的骨组织工程种子细胞来源。第7章:rhBMP-2及rhbFGF对山羊骨髓基质干细胞增殖的效应目的:检测rhBMP-2和rhbFGF单独及联合作用对山羊骨髓基质干细胞（BMSC）增殖的效应。方法:采用MTT法检测单独及联合施加rhBMP-2和rhbFGF后,BMSC在第1, 3, 5, 7及10天增殖的状况,并进行统计学分析。结果:rhBMP-2和rhbFGF均能显着地促进BMSC的增殖,并呈剂量依赖性。两种生长因子联合作用的效应高于单独作用的效应。结论: rhBMP-2和rhbFGF具有协同促进山羊BMSC增殖的效应。第8章:rhBMP-2及rhbFGF对山羊骨髓基质干细胞分化的效应目的:检测rhBMP-2和rhbFGF单独及联合作用对山羊BMSC的分化效应。方法:采用碱性磷酸酶（ALP）检测试剂盒及考马斯亮兰测定法检测单独及联合施加rhBMP-2和rhbFGF后,BMSC在第2,5,7及10天时的ALP活性及蛋白质含量水平以反映对细胞分化作用的影响,并进行统计学分析。结果:rhBMP-2能在较长时间内明显促进细胞ALP活性及蛋白质含量,而rhbFGF则起到抑制作用,且均呈剂量依赖性。rhBMP-2单独作用与两种生长因子联合作用的效应相近,均高于rhbFGF单独作用的效应。结论:rhBMP-2和rhbFGF联合应用与rhBMP-2单独使用均能够显着地促进山羊BMSC的分化效应。第9章:增强型绿色荧光蛋白基因质粒转染骨髓基质干细胞目的:探讨以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种子细胞示踪剂的可行性。方法:选取12月龄中国青山羊2只作为BMSC供体。将已转染pEGFP-N2的大肠杆菌109菌种,进行质粒提取并经AvaⅡ酶切鉴定。脂质体（lipofectamine 2000）介导转染羊BMSC细胞。分别于转染24h、6月后计算荧光的转染效率。以未标记的同期细胞作对照。结果:质粒经酶切后电泳,可见三条带,分别为445bp,1938bp,2354bp,确定所提质粒为pEGFP-N2。转染24h后绿色荧光表达率35%;经G418筛选,转染6个月后绿色荧光表达率75%,同时对照组未观察到绿色荧光。结论:脂质体介导法转染的pEGFP-N2标记BMSC,是一种理想的标记方法。第10章:增强型绿色荧光蛋白基因质粒标记技术示踪组织工程化骨形成目的:探讨以脂质体介导法转染的增强型绿色荧光蛋白质粒作为骨组织工程种子细胞示踪组织工程化骨形成的可行性。方法:将标记与未标记细胞经成骨诱导分化后,检测碱性磷酸酶（ALP）活性和四环素钙结节染色,以未标记的同期细胞作对照。将标记细胞接种于珊瑚支架,形成BMSC-珊瑚复合物,分别于体外培养4d、7d、14d后进行电镜扫描观察。将体外培养7d的BMSC-珊瑚复合物移植于裸鼠皮下,8周后取出,荧光显微镜下进行示踪观察,HE染色观察组织结构。以未标记的BMSC-珊瑚复合物、单纯珊瑚作对照。结果:与对照组相比,标记细胞碱性磷酸酶活性差异无统计学意义（P> 0. 05）,均具有钙结节形成能力。标记细胞与珊瑚材料贴附生长良好,并分泌胶原纤维及钙盐结晶样基质。组织学示新生骨样组织围绕材料孔隙生成;新生组织细胞内有绿色荧光清晰表达,同时对照组未观察到绿色荧光。结论:脂质体介导法转染的pEGFP-N2标记BMSC,可用于裸鼠体内示踪,是一种理想的组织工程化骨组织的示踪方法。第11章:山羊胫骨大节段骨缺损模型的制备目的:为骨组织工程的研究提供理想的动物模型。方法:取9只青山羊随机分3组,制备单侧胫骨25mm的骨膜与骨缺损,重建钢板内固定,术后放射学检查、组织学方法评价骨缺损自行修复情况。结果:术后所有动物骨缺损处x线片Lane评分均为0分,组织学显示无骨组织长人。结论:山羊胫骨适于制备骨缺损和重建钢板内固定模型,其25mm大段骨缺损模型是研究组织工程骨较为理想的动物模型。第12章:近同构模型修复山羊胫骨大段骨缺损的初步研究目的:探索骨组织工程近同构模型修复羊胫骨干骨缺损的可行性。方法:体外扩增自体骨髓基质干细胞,与珊瑚支架材料复合,植入山羊胫骨缺损处,同时通过便携式微量泵联合皮下植入式给药装置,建立近同构模型—可调控的体内灌注诱导成骨微环境系统,定时注入DMEM培养液、细胞因子rhbFGF和rhBMP-2。结果:术后8W观察结果:术后8W组织切片HE染色观察到近同构模型组骨组织形成;对照组仅见纤维组织长入。x线观察,术后8W近同构模型组织工程骨周围形成骨痂,并与胫骨缺损端融合;对照组术后8W时支架材料部分降解、吸收。结论:近同构模型构建的组织工程化人工骨具有修复大动物（羊）负重骨（胫骨）的节段性缺损的可行性。
宋克东[8]（2006）在《生物反应器内成骨细胞的扩增和组织工程骨的构建》文中提出骨组织工程（Bone tissue engineering）概念的提出为解决由于创伤、肿瘤等各种因素引起的骨缺损等疾病提供了一种崭新的方法和思路，已成为治疗骨科疾病的新突破点。生物反应器系统既可以揭示在三维培养环境中细胞功能的基本机制，又有提高工程化组织质量的功能。旋转壁式生物反应器（Rotating wall vessel bioreactor，RWVB）具有剪切力低、培养的细胞之间有三维联系的机会、极高的溶氧效率、营养物质浓度梯度低等特点，是一种非常理想的骨组织工程用三维培养系统。 本研究使用Sprague-Dawley（SD）大鼠和新西兰兔的成骨细胞（Osteoblasts，OBs）作为骨组织工程的种子细胞，对其原代、传代培养的方法和其特异性和形态学等生物学性能进行了检测，确定所培养的细胞是成骨细胞，并通过纯化确保没有其他细胞的污染，可为后续的实验提供数量充足的骨组织工程种子细胞，也为实验的准确性和可重复性提供了保证。 在相同条件下分别在培养瓶、转瓶（Spinner flask）和RWVB中使用微载体悬浮培养法进行了SD大鼠成骨细胞扩增培养的研究。培养7天后，经倒置相差显微镜、扫描电镜（Scanning electron microscope，SEM）、苏木精-伊红染色（Hematoxylin-eosin，HE）、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）、MTT、von-Kossa染色和茜素红染色等生物学性能检测，结果显示RWVB中扩增的细胞能最好地保持成骨细胞的各种生物学特征，可以作为骨组织工程的种子细胞。且当微载体的浓度为10mg／ml、成骨细胞的接种密度为5×104 cells／ml时，细胞在RWVB中可以获得最佳的扩增效果，每代可以扩增十倍以上，明显高于其它培养方式。 使用FLUENT软件模拟计算了旋转壁式生物反应器内的二维流场，计算了在反应器内进行细胞扩增和工程化组织构建时培养室内的动压、总压、剪切力和流体速度的分布，具体分析了当反应器的转速和旋转方向、中空纤维膜的径向位置和直径等发生改变时膜壁面各点的受力情况和流场分布。此外，还详细分析了当反应器的转速和旋转方向以及细胞-支架材料构建物的径向位置发生改变时构建物壁面各点的受力和流场分布情况。模拟结果显示在旋转壁式生物反应器内不同位置的中空纤维膜壁面和细胞-支架材料构建物壁面各点的动压、流体速度和剪切力随着反应器的旋转而发生周期性的变化，培养物可以获得周期性的应力刺激；反应器内流体的剪切力较低。 在上述理论分析的基础上，设计了旋转壁式中空纤维膜生物反应器（Rotating wall hollow-fiber embrane bioreactor，RWHMB），利用中空纤维膜作为成骨细胞的载体，以1×105 cells／ml接种密度在该反应器内对其进行大规模扩增，并在静态环境中以相同条件对照培养。每隔12 hr对细胞进行取样，培养5天后对细胞进行收获。对所扩增的细胞分别进行扫描电镜（SEM）观察、碱性磷酸酶（ALP）染色、钙化结节染色等生物学
张洪涛[9]（2006）在《PRP诱导人BMSc体内成骨及免疫配型不相合人BMSc混合培养实验研究》文中指出由创伤、感染、肿瘤等疾病引起的骨缺损是骨科临床的常见病，骨缺损治疗的难题主要是移植骨的来源问题。组织工程的兴起和发展为骨缺损的修复开辟了一条新的途径。骨组织工程技术以体外构建、体内重组的模式给这一领域提供了崭新的治疗技术手段，成为目前修复骨缺损的较为理想的方法。 随着研究的深入，骨组织工程已逐步由动物实验扩展到临床实验阶段。临床应用不同于动物实验，首先需要考虑治疗的安全性，因此组织工程种子细胞的选择，材料的选择以及种子细胞的体外培养过程等问题都是需要谨慎注意的。富血小板血浆是经过特殊方法提取的血小板含量丰富的血浆，相较普通血清含有更丰富的细胞因子。研究表明细胞因子是骨髓基质干细胞增值、分化的必须。本研究以自体骨髓基质干细胞作为种子细胞，尝试采用自体富血小板血浆替代普通血清——尽量排除异类抗原物质的引入且利于促进细胞的增值、分化的培养方法，诱导培养人骨髓基质干细胞，并将诱导培养的骨髓基质干细胞与临床应用相对成熟具有临床应用许可的北京意华健公司的YHJ500珊瑚羟基磷灰石材料复合植入裸鼠体内。探讨了自体富血小板血浆对诱导培养人骨髓基质干细胞生物学特性的影响及以自体富血小板血浆诱导培养的人骨髓基质干细胞与珊瑚羟基磷灰石材料的生物相容性及在体内的成骨效用。 由于自体骨髓基质干细胞培养、扩增需很长时间且针对年龄较大或存在其他疾患的个体又无法完成自体的骨髓基质干细胞的培养与扩增，因此建立人骨髓基质干细胞库是组织工程在临床推广应用的必须。研究证实异体骨髓基质干细
郑宗梅[10]（2006）在《脂肪间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞的实验研究》文中提出骨组织工程研究的基础和关键之一是种子细胞。本课题研究的目的是探讨脂肪间充质干细胞（adipose mesenchymal stem cells，AMSCs）是否可作为骨组织工程种子细胞。实验中从成人脂肪抽吸物中分离培养脂肪间充质干细胞，观察其体外扩增能力，进行成脂和成骨诱导；应用组织化学染色、免疫荧光染色和RT-PCR方法，检测其成脂分化和成骨细胞表型；比较脂肪和骨髓来源间充质干细胞的生物学性能；检测bFGF和BMP-2对AMSCs的增殖和成骨效应；最后将脂肪来源成骨细胞接种在天然珊瑚支架上，观察复合物在体内、外情况。结果显示：从成人脂肪抽吸物中分离获得的AMSCs可在体外稳定增殖并诱导成为脂肪细胞和成骨细胞；脂肪和骨髓来源的间充质干细胞有相似的生物学特征，其表面分子的表达差异主要表现在CD73和CD117，前者表达CD73，后者表达CD117；bFGF和BMP-2可分别促进脂肪间充质干细胞的增殖和成骨分化，两者联合应用在促进增殖的同时也促进分化；脂肪来源成骨细胞在体外可在天然珊瑚支架上良好的贴附和生长；植入裸鼠皮下8周后，有脂肪样组织生成，有少量的类软骨、骨样组织形成，但无确切成骨表现。由此可知，作为骨组织工程的种子细胞，AMSCs具有来源广泛，“变废为宝”的优点，在进一步研究其成骨诱导分化条件及高效的、复合生长因子的支架的基础上，其在骨组织工程研究中必将发挥重要的作用。
二、体外培养的成骨细胞与珊瑚复合的实验研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、体外培养的成骨细胞与珊瑚复合的实验研究（论文提纲范文）
（1）3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料的制备及性能研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 第一部分 3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料的制备及表征 |
| 实验一 nmZnO/CHA的制备及其性能研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 实验二 3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料的制备 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 第二部分 3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料的细胞相容性 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 骨修复材料在临床研究中的新进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（2）乳液模板法构建微纳杂化骨修复材料及其生物相容性研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 有机无机杂化技术在骨组织工程中的研究 |
| 1.3 乳液模板法在组织工程生物多孔支架中的应用及发展 |
| 1.4 有机无机杂化组织工程支架材料的构建组分 |
| 1.4.1 水溶/油溶有机高分子生物材料 |
| 1.4.2 微纳米无机生物材料 |
| 1.4.3 生物活性分子 |
| 1.5 课题的研究意义及主要研究内容 |
| 1.5.1 课题的提出和研究意义 |
| 1.5.2 研究目的 |
| 1.5.3 主要研究内容 |
| 第二章 纳米羟基磷灰石稳定的水溶油溶微纳杂化仿生支架的制备及表征 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料与仪器 |
| 2.2.1 实验材料与试剂 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 纳米羟基磷灰石稳定的水溶油溶微纳杂化载药支架的制备 |
| 2.3.2 纳米羟基磷灰石稳定的水溶油溶微纳杂化载药支架的制备 |
| 2.4 纳米羟基磷灰石类水溶油溶微纳杂化支架的性能表征 |
| 2.4.1 测试与表征(SEM/XRD/FTIR) |
| 2.4.2 孔隙率的测定 |
| 2.4.3 溶胀性能的测定 |
| 2.4.4 热性能的检测 |
| 2.4.5 机械性能的测定 |
| 2.4.6 降解性能的测定 |
| 2.4.7 体外矿化性能的测定 |
| 2.4.8 药物缓释性能的检测 |
| 2.4.9 蛋白吸附性能的测定 |
| 2.4.10 溶血性能的测定 |
| 2.4.11 统计学分析 |
| 2.5 实验结果与讨论 |
| 2.5.1 微观形貌观察 |
| 2.5.2 X射线衍射分析 |
| 2.5.3 红外光谱分析 |
| 2.5.4 热稳定性能和机械性能分析 |
| 2.5.5 孔隙率和溶胀性能分析 |
| 2.5.6 降解性能研究 |
| 2.5.7 体外生物矿化性能分析 |
| 2.5.8 药物缓释性能分析 |
| 2.5.9 蛋白吸附性能分析 |
| 2.5.10 溶血性能分析 |
| 2.6 本章小结 |
| 第三章 鲍鱼壳粒子稳定的水溶油溶微纳杂化仿生支架的制备及表征 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 试验材料与仪器 |
| 3.2.1 实验材料与试剂 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 鲍鱼壳粒子稳定的水溶油溶微纳杂化仿生支架的制备 |
| 3.4 鲍鱼壳类水溶油溶微纳杂化仿生支架的性能表征 |
| 3.4.1 测试与表征(SEM/XRD/FTIR) |
| 3.4.2 热性能的检测 |
| 3.4.3 孔隙率的测定 |
| 3.4.4 溶胀性能的测定 |
| 3.4.5 降解性能的测定 |
| 3.4.6 机械性能的测定 |
| 3.4.7 体外生物矿化性能的测定 |
| 3.4.8 蛋白吸附性能的测定 |
| 3.4.9 溶血性能的测定 |
| 3.4.10 统计学分析 |
| 3.5 实验结果与讨论 |
| 3.5.1 微观形貌观察 |
| 3.5.2 X射线衍射分析 |
| 3.5.3 红外光谱分析 |
| 3.5.4 热稳定性能分析 |
| 3.5.5 机械性能分析 |
| 3.5.6 孔隙率和溶胀性能分析 |
| 3.5.7 降解性能分析 |
| 3.5.8 体外生物矿化性能分析 |
| 3.5.9 蛋白吸附性能分析 |
| 3.5.10 溶血性能分析 |
| 3.6 本章小结 |
| 第四章 水溶油溶微纳杂化仿生支架的细胞学研究 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 成骨细胞的提取、纯化、培养及鉴定 |
| 4.2.1 实验材料与仪器 |
| 4.2.2 实验方法 |
| 4.2.3 实验结果与讨论 |
| 4.2.4 小结 |
| 4.3 水溶油溶微纳杂化仿生支架的细胞学研究 |
| 4.3.1 实验材料与仪器 |
| 4.3.2 实验方法 |
| 4.3.3 nHAP类水溶油溶杂化支架的细胞学研究结果与讨论 |
| 4.3.4 AS类水溶油溶杂化仿生支架的细胞学研究结果与讨论 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 硕士在学期间获得的研究成果及发表的学术论文 |
（3）海藻酸钠—明胶共混体系为载体的可注射式组织工程骨的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语 |
| 文献综述 |
| 第一部分 骨组织工程中的种子细胞 |
| 第二部分 骨组织工程的支架材料 |
| 第三部分 天然类可注射骨组织工程材料的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 主要设备和试剂 |
| 研究内容 |
| 第一部分 种子细胞的研究 |
| 实验一 兔骨髓基质细胞的培养及诱导成骨的研究 |
| 实验二 不同浓度氯化钙对成骨细胞的细胞毒性研究 |
| 第一部分 阶段小结 |
| 第二部分 有关海藻酸钠—明胶共混体系的研究 |
| 实验三 海藻酸钠—明胶共混体系的构建及有关物理性能的研究 |
| 实验四 不同消毒方法对海藻酸钠—明胶共混体系理化性能的影响 |
| 实验五 海藻酸钠—明胶共混体系凝胶与成骨细胞的相容性研究 |
| 实验六 海藻酸钠—明胶共混体系的致畸、致突变实验 |
| 第二部分 阶段小结 |
| 第三部分 海藻酸钠—明胶共混体系凝胶的体内实验 |
| 实验七 海藻酸钠—明胶共混体系凝胶体内异位成骨的研究 |
| 实验八 海藻酸钠—明胶共混体系凝胶修复颅骨极限缺损的研究 |
| 第三部分 阶段小结 |
| 全文总结 |
| 附图 |
（4）组织工程化骨修复人工关节周围骨缺损的实验研究（论文提纲范文）
| 英文缩写词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 正文 组织工程化骨修复人工关节周围骨缺损的实验研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 技术路线 |
| 第一部分 兔骨髓MSCS的分离培养和骨向分化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第一部分附图 |
| 参考文献 |
| 第二部分 兔骨髓MSCS与CHA 复合修复植入体周围骨缺损的实验研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分附图 |
| 参考文献 |
| 第三部分 兔骨髓MSCS与CHA 复合修复骨缺损对植入体-骨界面骨整合的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分附图 |
| 参考文献 |
| 第四部分 rhBMP-2 与组织工程化骨修复犬人工关节周围骨缺损对界面骨整合的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第四部分附图 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 文献综述假体-骨界面骨整合与影响因素 |
| 参考文献 |
| 博士在读期间论文发表 |
| 英文论着 |
（5）基于细胞膜片技术构建组织工程化骨实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 骨髓间充质成骨细胞膜片体外构建 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验二 骨髓间充质成骨细胞膜片/管状珊瑚复合体移植裸鼠皮下成骨实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验三 骨髓间充质成骨细胞膜片/种植体/珊瑚复合体移植裸鼠皮下成骨实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验四 骨髓间充质成骨细胞膜片贴附移植实验研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验五 骨髓间充质成骨细胞膜片修复兔颅骨极限缺损实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 实验六 骨髓间充质成骨细胞膜片/种植体/珊瑚复合体修复羊下颌骨缺损的实验研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（6）珊瑚与骨髓基质细胞和富血小板血浆构建组织工程骨的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 正文 |
| 实验一 富血小板血浆对珊瑚支架上骨髓基质细胞增殖和成骨分化的影响 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 珊瑚/骨髓基质细胞/富血小板血浆异位成骨的实验研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 珊瑚/骨髓基质细胞/富血小板血浆修复兔颅骨缺损 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验四 应用富血小板血浆和骨髓基质细胞构建组织工程膜片及其异位成骨的实验研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（7）体内灌注诱导骨髓基质干细胞构建组织工程骨的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 文献综述 |
| 第1章 引言 |
| 第2章 骨髓基质干细胞在骨组织工程学中的应用进展 |
| 2.1 骨髓基质干细胞来源与获取 |
| 2.2 骨髓基质干细胞接种数量与密度 |
| 2.3 骨髓基质干细胞生物学特性 |
| 2.4 骨髓基质干细胞与支架材料 |
| 2.5 骨髓基质干细胞与生长因子 |
| 第3章 骨组织工程血管化的研究进展 |
| 3.1 血管再生的机制 |
| 3.2 组织工程骨血管化的策略 |
| 3.3 问题与展望 |
| 第4章 生长因子促进成骨作用的研究与应用进展 |
| 4.1 骨形态形成蛋白 |
| 4.2 碱性成纤维细胞生长因子 |
| 4.3 转化生长因子-β |
| 4.4 联合应用 |
| 4.5 临床试验 |
| 4.6 问题与展望 |
| 第二部分 课题创新性专题论述 |
| 第5章 骨组织工程研究的方法论检讨及其思路创新 |
| 5.1 基于分析主义的骨组织工程研究进程 |
| 5.2 分析主义研究路径面临的困境 |
| 5.3 整体论思维与骨组织工程研究的路径选择 |
| 5.4 结语 |
| 第三部分 实验研究 |
| 第6章 山羊骨髓基质干细胞体外培养 |
| 6.1 材料与方法 |
| 6.2 结果 |
| 6.3 讨论 |
| 第7章 rhBMP-2 和rhbFGF 对山羊骨髓基质干细胞的增殖效应 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.2 结果 |
| 7.3 讨论 |
| 第8章 rhBMP-2 和rhbFGF 对山羊骨髓基质干细胞的分化效应 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.2 结果 |
| 8.3 讨论 |
| 第9章 增强型绿色荧光蛋白基因质粒转染骨髓基质干细胞 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.2 结果 |
| 9.3 讨论 |
| 第10章 增强型绿色荧光蛋白基因质粒标记技术示踪组织工程化骨形成 |
| 10.1 材料与方法 |
| 10.2 结果 |
| 10.3 讨论 |
| 第11章 山羊胫骨大节段骨缺损动物模型的制备 |
| 11.1 材料与方法 |
| 11.2 结果 |
| 11.3 讨论 |
| 第12章 近同构模型修复山羊胫骨大段骨缺损的初步研究 |
| 12.1 材料与方法 |
| 12.2 结果 |
| 12.3 讨论 |
| 第13章 总结与展望 |
| 13.1 结论 |
| 13.2 本论文创新之处 |
| 13.3 进一步工作的方向 |
| 致 谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
（8）生物反应器内成骨细胞的扩增和组织工程骨的构建（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 引言 |
| 1.2 骨组织工程种子细胞的研究进展 |
| 1.2.1 骨组织工程种子细胞的来源 |
| 1.2.2 种子细胞的分类 |
| 1.2.3 种子细胞的扩增 |
| 1.3 组织工程用生物支架材料研究进展 |
| 1.3.1 天然生物材料 |
| 1.3.2 人工合成生物支架材料 |
| 1.3.3 复合材料 |
| 1.4 工程化骨组织的体外构建 |
| 1.4.1 静态环境中构建 |
| 1.4.2 工程化骨组织的三维构建 |
| 1.5 骨组织工程的临床应用 |
| 1.6 本研究的选题依据和研究内容 |
| 参考文献 |
| 第二章 成骨细胞的获取，原代及传代培养与特性鉴定 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验仪器和材料 |
| 2.2.1 仪器设备 |
| 2.2.2 试剂及药品 |
| 2.2.3 实验动物 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 成骨细胞原代培养 |
| 2.3.2 成骨细胞传代培养 |
| 2.3.3 成骨细胞的纯化 |
| 2.3.4 成骨细胞的生物学性能检测 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 原代培养结果 |
| 2.4.2 传代培养结果 |
| 2.4.3 成骨细胞的纯化结果 |
| 2.4.4 颅盖骨内细胞密度 |
| 2.4.5 成骨细胞的生物学性能检测 |
| 2.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第三章 成骨细胞在旋转壁式生物反应器内的大规模扩增 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.2.1 材料 |
| 3.2.2 方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 倒置显微镜和扫描电镜观察 |
| 3.3.2 成骨细胞生长曲线 |
| 3.3.3 成骨细胞扩增倍数比较 |
| 3.3.4 营养物质代谢 |
| 3.3.5 培养基的pH值和渗透压的变化 |
| 3.3.6 HE染色和碱性磷酸酶(ALP)染色检测 |
| 3.3.7 钙化结节染色结果 |
| 3.3.8 钙化结节的数量和分布 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第四章 旋转壁式生物反应器内流场的数值模拟及分析 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 软件和方法 |
| 4.2.1 GAMBIT和FLUENT |
| 4.2.2 反应器流场的物理和简化模型 |
| 4.2.3 相关参数的设置和边界条件 |
| 4.3 计算结果与讨论 |
| 4.3.1 不同旋转方向和速度下反应器内固定有中空纤维模时的流场 |
| 4.3.2 中空纤维膜在反应器内变化径向位置的分析 |
| 4.3.3 中空纤维膜直径变化时的分析 |
| 4.3.4 细胞-支架材料复合物置于外筒壁处的分析 |
| 4.3.5 细胞-支架材料复合物在筒内其它位置的分析 |
| 4.4 小结 |
| 参考文献 |
| 第五章 成骨细胞在旋转壁式中空纤维膜生物反应器内的大规模扩增 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.2.1 材料 |
| 5.2.2 方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.3.1 倒置相差显微镜和扫描电镜观察 |
| 5.3.2 成骨细胞扩增倍数比较 |
| 5.3.3 培养基的pH值、渗透压的变化情况 |
| 5.3.4 葡萄糖、乳酸的变化 |
| 5.3.5 HE染色和碱性磷酸酶(ALP)检测 |
| 5.3.6 矿化结节染色 |
| 5.3.7 钙化结节的数量和分布 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第六章 新型旋转壁式生物反应器内三维组织工程骨的构建 |
| 6.1 前言 |
| 6.2 材料和方法 |
| 6.2.1 材料 |
| 6.2.2 方法 |
| 6.3 结果 |
| 6.3.1 成骨细胞形态与功能检测 |
| 6.3.2 倒置显微镜下观察 |
| 6.3.3 扫描电镜观察 |
| 6.3.4 AO/EB双重荧光染色 |
| 6.3.5 钙化结节茜素红染色 |
| 6.3.6 营养物质代谢 |
| 6.3.7 pH值与渗透压 |
| 6.3.8 碱性磷酸酶检测 |
| 6.4 讨论 |
| 6.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第七章 组织工程骨在生物反应器内的构建与检测 |
| 7.1 前言 |
| 7.2 材料和方法 |
| 7.2.1 材料 |
| 7.2.2 方法 |
| 7.3 结果 |
| 7.3.1 成骨细胞转染-绿色荧光蛋白标记 |
| 7.3.2 转染细胞三维和静态构建组织工程骨 |
| 7.3.3 ALP染色和定量检测结果 |
| 7.3.4 I型胶原和BMP-2表达 |
| 7.3.5 不同构建方式下细胞的生长曲线和扩增倍数的比较 |
| 7.3.6 不同培养方式下的细胞周期和染色体分析 |
| 7.3.7 营养物质代谢分析 |
| 7.4 讨论 |
| 7.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第八章 组织工程骨修复兔挠骨大段骨缺损的研究 |
| 8.1 前言 |
| 8.2 材料和方法 |
| 8.2.1 组织工程骨的制备 |
| 8.2.2 实验动物分组 |
| 8.2.3 试验方法 |
| 8.2.4 检测指标 |
| 8.2.5 统计学方法 |
| 8.3 结果 |
| 8.3.1 大体观察结果 |
| 8.3.2 X线片观察结果 |
| 8.3.3 激光共聚焦纤维镜观察结果 |
| 8.3.4 组织观察结果 |
| 8.3.5 组织切片的图像分析 |
| 8.3.6 I型胶原和BMP-2表达 |
| 8.4 讨论 |
| 8.5 小结 |
| 参考文献 |
| 第九章 结论与展望 |
| 9.1 主要研究成果和结论 |
| 9.2 前景与展望 |
| 创新点摘要 |
| 英文缩略语 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 |
| 致谢 |
| 附录1 |
| 附录2 |
| 大连理工大学学位论文版权使用授权书 |
（9）PRP诱导人BMSc体内成骨及免疫配型不相合人BMSc混合培养实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一章 PRP对诱导培养的人骨髓基质干细胞成骨活性的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 PRP诱导人骨髓基质干细胞与珊瑚羟基磷灰石的生物相容性 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三章 PRP诱导培养人骨髓基质干细胞体内异位成骨实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四章 免疫配型不相合人骨髓基质干细胞体外混合培养研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 附录 缩略词表 |
| 成果 |
| 致谢 |
| 原创性声明及版权使用授权说明 |
（10）脂肪间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞的实验研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 综述 脂肪间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞的实验研究 |
| 第一部分 脂肪间充质干细胞的分离培养及诱导分化 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 第二部分 脂肪间充质干细胞与骨髓间充质干细胞生物学性能比较及bFGF和BMP-2对脂肪间充质干细胞体外增殖及成骨分化的影响 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 第三部分 脂肪来源成骨细胞与珊瑚支架复合物体内、外观察 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 附图 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 英文缩略语表 |
| 致谢 |
| 在读期间发表论文 |
四、体外培养的成骨细胞与珊瑚复合的实验研究（论文参考文献）
- [1]3D打印PCL人工骨支架表面复合nmZnO/CHA抗菌涂层材料的制备及性能研究[D]. 尹怡赫. 昆明医科大学, 2021(01)
- [2]乳液模板法构建微纳杂化骨修复材料及其生物相容性研究[D]. 胡义敏. 福州大学, 2018(03)
- [3]海藻酸钠—明胶共混体系为载体的可注射式组织工程骨的研究[D]. 夏扬. 中国协和医科大学, 2008(07)
- [4]组织工程化骨修复人工关节周围骨缺损的实验研究[D]. 付志厚. 第三军医大学, 2008(03)
- [5]基于细胞膜片技术构建组织工程化骨实验研究[D]. 高瞻. 第四军医大学, 2008(03)
- [6]珊瑚与骨髓基质细胞和富血小板血浆构建组织工程骨的实验研究[D]. 张森林. 第四军医大学, 2008(02)
- [7]体内灌注诱导骨髓基质干细胞构建组织工程骨的实验研究[D]. 戴江华. 南昌大学, 2007(03)
- [8]生物反应器内成骨细胞的扩增和组织工程骨的构建[D]. 宋克东. 大连理工大学, 2006(12)
- [9]PRP诱导人BMSc体内成骨及免疫配型不相合人BMSc混合培养实验研究[D]. 张洪涛. 第一军医大学, 2006(12)
- [10]脂肪间充质干细胞作为骨组织工程种子细胞的实验研究[D]. 郑宗梅. 中国协和医科大学, 2006(11)